Способ получения пептидов

СОЮЗ СОВЕТСКИХИ 4 ФЗСМ 4 ЕПЕХРЕСПУБЛИК ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) фармиталия Карло Эрба С,п.А,(1 Т)(56) Суап 8 Е.А., Ковсег 13.сг Н,Ч,А 8 опдвс апй апсаеоп 1 вс асс 1 опв ойшогрЬпеЖе дгц 8 в оп сЬе 8 ц 1 пеар 18 дво 1 асей 11 ецщ. - Вгдс, Л.РЬагшас. СЬещосЬег 1966, ч. 27, р.514.Нц 8 Ье в Л., Коз сег 1с г Н ЛЬев 1 д Р Е 1 йесс о щогрЬ 1 пе апйайсепегдде сгапвппвв 1 оп п сЬешоцве чав ЙЫегепв, Аввеввшепс о 2а 8 оп 1 вс апй апсадоп 1 вс росепс 1 ев ойпагсосдс апа 18 евдсв, - Вг,Л.РЬагщас.,1975, ч. 53, р. 371.СЬегщапс К., Бппоп Р. 1 п 1 ессоппсгачегсгец 1 а 1 ге сегеЬга 1 е сЬег1 ев гас апавсЬев 1 е. - Л.РЬагщас,Рагнов, 1975, ч. 6, р. 489,0 Лщоцг Р.Е Бщ 1 СЬ 0,Ь. А шеСЬодоГ еча 1 цас 1 п 8 апа 181 в 1 е асЫчсу псЬе гас, - З.РЬагшас. ехр. ТЬег.,1941, ч, 72, р. 74,Ашмарин И.П, и др. Олигопептидымозга - аналептики, стимуляторы памяти и сна. - Молекулярная биология,1978, Ф 12, с, 965.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ(57) Изобретение касается пептидов(ПТ), в частности соединений общей ЯО 1316565 А 3 ш 4 С 07 К 7/06 А 61 К 37/02 формулы Н-Туг-А 1 а-РЬе-В-,С-У, где В-С 1 у, Баг, РЬе, С-Туг, 0-Туг, Ьец, Мес, Мес(О), Рго, Бег, Туг(Вг 1) -Рго, Туг-Рго, Туг-Бег, Рго-Бег, Туг-РгоБег, Туг(Вк 1)-Рго-Бег, Туг-Нур-Бег, Туг-Нур-Бег( Вг 1), Туг(Вг 1)-Ча 1-Бег, Туг-С 1 у-Бег, РЬе-Нур-Бег, Туг-РгоБег, РЬе-Рго-Бег, РЬе-Нур-Бе(Вх 1), С 1 у-Рго-Бег, Туг-Рго-С 1 у, Туг(В 21)- Рго-Бег(Вг 1), Туг-Рго-Бег(Вг 1); -ОН, ОСНЗ, БН , НЕ, ИННг, НН- адамантил К - бензилоксикарбонилф гили фенил, которые обладают анальгетической активностью и могут быть использованы в медицине. Цель " создание новых более активных пептидов. Получение ПТ ведут по следующей схеме: Вос-В-ОН + НгИ-МНЕ в (К) - Вос-В-ННЕ (ОТЩ) - Н-В-БН-МНЕ + Вос-РЬе-ОН -(К) Вос-РЬе;В-МН-ВНЕ- (ОТЩ)- Н-РЬе-В-ИН-ИН 2 + Вос-А 1 а-ОН - (К) - Во с-А 1 а-РЬе-В-БН-ВНЕ (ОТЩ) Н-Вос-А 1 а-РЬе-В-НН-ННЕ + 4 Вос-Туг-ОН- Вос-Туг-А 1 а-РЬе-ВН-ИНЕ - (ГД)- Вос-Туг-А 1 а-РЬе-ВН-ХНг + Н-Д-Е-Р (КАЗ), где К - конденсация, которую проводят методом смешанных ангидридов в среде диметилформамида или тетрагидрофурана при (-15) - (+25) С в присутствии этилхлорформиата; ОТЩ - отщепление защитной группы Е при обработке раствором НС 1 в СН СООН или тетрагидрофуране; ГД - гидрогенолиз в присутствии 10 Х-ного Рй/С в среде метанола или диметилформамида; КАЗ - конденсация по азидному методу в присутствии н-бутилнитрита и НС 1 в среде, диметилформамида или тетрагидрофура17 1316565 Из (Ь 11) обработкой раствором НС 1 в тетрагидрофуране получают (Ы 11), т.пл. 210-220 С (изопропанол-эфир); Р= 0,44 (С); 0,66 (П); Е = 0,51; Гое)в = +10 ю 1 (С = 1; МеОН).Аминокислотный анализ: Нур 0,96 ,(1) , Яег 0,96 (1); С 1 у 1,07 (1); П-А 1 а 0,97 (1),Туг 1,97;РЬе 1,00 (1)Найдено, %; С 55,72; Н 5,86; Я 12,82,С,Н С 1 ИОВычислено, %: С 56, 17; Н 6,01; Я 13,10.П р и м е р 10.Н-Туг-П-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг(Вг 1)- Нур-Яег(Ва 1)-ИН НС 1 (Ь 1 Ч) Из (Ь 11) по методике, описанной впримере 8 (стадия 8), получают (Ь 1 Ч),т.пл. 175-180"С (метанол-эфир); К =(ЬЧ 1) Вос-Туг-Ча 1-ОМе Из Вос-Туг-ОН и НС 1 Н-Ча 1-ОМе методом смешанных ангидридов с использованием этилхлорформиата в диметилформамиде получают (ЬЧ 1).Стадия 2,Стадия 1.(метанол), оц= -68,2 (С = 1;МеОН).Стадия 3.Вос-Туг-Р-А 1 а"РЬе- С 1 у-РгоБег-ИН (ХСЧ 11)Из соединений (Х) и (ХСЧ 1) по методике, описанной в примере 1 (стадия 11), получают (ХСЧ 11), т.пл, 143 о146 С (метанол-этилацетат-диизопропиловый эфир); К = 0,58 (С); ы = -10,7 (С = 1; МеОН).Стадия 4.Н-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-С 1 уРго-Бег-ИН НС 1 (ХС 1 Ч)Из соединения (ХСЧ 11) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2),получают (ХС 1 Ч), т.пл. 180 С (эфир),К = 0,32 (С); Е = 0,58.Аминокислотный анализ: Бег 0,99;Рго 1,00 (1); С 1 у 2,00 (2); П-А 1 а1,00 (1), Туг 1,01 (1); РЬе 1,00 (1),Найдено, Х: С 53,89; Н 6,00;И 15,09; С 1 4,85.СНС 1 И,О,Вычислено, Ж: С 54,05; Н 6,18;И 15,28; С 1 4,83.П р и и е р 23.Н-Туг-Р-А 1 а-РЬе-С 1 у-ТугРго-Бег-ИН-Ме НС 1 (ХСЧПт)Стадия 1.Вос-Туг(Вг 1)-Рго-Бег-ОМе (ХС 1 Х)Из соединений (Х 1 Х) и Н-Бег-ОМехНС 1 по методике, описанной в приИз соединения (ХСТХ) и метиламинав диметилформамиде получают соединения (С), т.пл. 179-181 С (этилаце О тат); К = 0,46 (А).Стадия 3.Н-Туг(Вг 1)-Рго-Бег-ИН-МеНС 1 (С 1)5Из соединения (С) по методике,описанной в примере 3 (стадия 2),получают (С 1).Стадия 4.20Вос-Туг-Э-А 1 а-РЬе-С 1 уТуг(Вк 1)-Рго-Бег-ИН-Ме (С 11)Из соединений (Х) и (С 1) по ме тодике, описанной в примере 1 (стадия 11), получают (С 11), т.пл; 179181 С (изопропанол-эфир);К =0,26 (В).Стадия 5.30 Вос-Тут-Р-А 1 а-РЛе-С 1 у-ТугРго-Бег-ИН-Ме (С 111)Из соединения (С 11) по методике,описанной в примере 1 (стадия 12),35 получают (С 111), т.пл, 213-216 С(изопропанол-эфир); К = 0,10 (В);0,81 (С) .Стадия 5,Н-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-РгоЯег-ЯН-Ег НС 1 (СТЧ) Н-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-РгоЗег-ОМеНС 1 (СХХ) Н-Туг(-Ва 1)-Рго-Яег-ОМефНС 1 (СХ) 5 Из соединения (ХС 1 Х) по методике описанной в примере 3 (стадия 2),получают (СХ). Стадия 2.ЮВос-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 уТуг(-Въ 1)-Рго-Яег-ОМе (СХ 1) Из соединений (Х) и (СХ) по мето 15 дике, описанной в примере 1 (стадия11) получают (СХ 1), т.пл. 175 -180 С (хлороформ-изопропанол-эфир),К =- 0,47 (В).Стадия 3. гоН-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг(Вг 1)- Рго-Яег-ОМе, (СХ 11) Из соединения СХХ по -методике,25 описанной в примере 3 (стадия 2),получают (СХ 11), т.пл. 190 С (эфир);К = 0,72 (С).Стадия 4. ХН-Туг"0-А 1 а-РЬе-С 1 у"Туг-РгоЗег-ОМе НС 1 (СХ) Иэ соединения (СХ 11) по методике,описанной в примере(стадия 12),получают (С 1 Х), т.пл. 240 С (эфир),35 К 0,66 (С); Е = 0,55, ГК"(стадия 11), получают (СХЧТТТ),Стадия 2,Н-Туг-Э-А 1 а-РЬе-С 1 у-Э-ТугИН НСТ (СХЧТТ) Из соединения (СХЧТТТ) по методике описанной в примере 3 (стадия 2),Фополучают (СХЧТТ), т.пл. 230 С (эфир);К = 0 76 (С)Е г = Оэ 57 в Гебу(СХХХ 111) 20 Стадия 4. Стадия 1,Из Вос-Туг-ОН и АЙЯН с использованием дициклогексилкарбодиимида с добавкой Я-оксибензотриазола в качестве конденсирующего агента по методике, описанной в примере 5 (стадия 1), получают (СХХХ 111), т.пл,128- 131 С (петролейный эфир);= +6,7 (С = 1, МеОН),Стадия 2. Н-Туг-ЯНАИ НС 1 (СХХХ 1 Ч) Из соединения (СХХХ 111) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2), получают (СХХХ 1 Ч).Стадия 3. Вос-Туг-Р-А 1 а-РЬе-С 1 у-ТугЯНАЙ (СХХХЧ) Из соединений (Х) и (СХХХ 1 Ч) по методике, описанной в примере 1 (стадия 11), получают (СХХХЧ). Н-Туг-Р-А 1 а-РЬе-С 1 у-ТугЯНАс 1 НС 1(СХХХ 11) Из соединения (СХХХЧ) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2), получают (СХХХ 11), т.пл, 160 С (эфир); К = 0,90 (С), Е = 0,52," ЫД = +17,2 (С = 1, МеОН).Аминокислотный анализ: С 1 у 0,98 (1), Р-А 1 а 1,00 (1); Туг 1,96 (2); РЬе 1,00 (1)Найдено, %: С 63,79; Н 6,75;Я 10,59; С 1 4,60.С 4 нС 1 Я 6 07Вычислено,.: С 63,90; Н 6,76; Я 10,64; С 1 4,49.П р и м е р 33. Ч-Туг-Р-А 1 а-РЬе-С 1 у-ТугЯНСН СР НС 1 (СХХХЧ 1) Стадия 1.Вос-Туг- ЯНСН СР (СХХХЧ 11) Из Вос-Туг-ОН и СР СНЯН по методике, описанной в примере 8 (стадия 1), получают (СХХХЧ 11),5 Из соединения (СХХХЧ 11) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2),получают (СХХХЧ 111),Стадия 3,Вос-Туг-Р-А 1 а-РЬе-С 1 у-ТугЯНСН СР (СХХХ 1 Х) Из соединений (Х) и (СХХХЧ 111) пометодике, описанной в примере 1 (ста дня 11), получают "ХХХ 1 Х,Стадия 4,Н-Туг-Р-А 1 а-РЬе-С 1 у-ТугЯНСН СГ НС 1 (СХХХЧ 1) Из соединения (СХХХ 1 Х) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2),получают (СХХХЧ 1), т.пл, 200-230 Сна при. (-30) - (+25)Сф Вос - трет-бутилоксикарбонил; 2 - бензилоксикарбонил; В - указано выше; 0-Туг,Э-Туг, 1.ец, Мег, Мег(0), Рго, Бег,Туг(Вг 1), С 1 у, РЬе, Тгр; Р - Бег,Бег(Вг 1), С 1 у или простая связь;Е - Рго, Бег, Нур, С 1 у, Ча 1 илипростая связь; И - указано выше. Получение фрагмента ведут по следующей схеме:Вос-Е-ОН + Н-Г-Я- (К ).Вос-Е-Р-Ы- (ОТЩ ) Н-Е-Р-И +Вос-ОН - (К) Вос-Е-Р-Ы ;(ОТЩ)- Н-В-Е-Г-У, где К- конденсация методом смешанных ангидрицов в присутствии этилхлорформиата 1316565или изобутилхлорформиата в среде диметилформамида или тетрагидрофуорана при (-15) - (+25) С или карбоимидным методом в присутствии дициклогексилкарбодиимида и М-оксибензотриазола; ОТЩ - отщепление Я-концевой трет-бутилоксикарбонильной группы обработкой НС 1 в тетрагидрофуране или СР СООН при 0 С, причем если имеются боковые защитные группы, то их удаляют гидрогенолизом в присутствии 10 -ного Рс 1/С в среде метанола или диметилформамида. Испытания ПТ показывают высокую анальгетичес" кую активность. 2 табл,-Бег, Туг-Нур-Бег, Туг-Нур-Бег(В 21), Туг(Вк 1) -Ча 1-Бег,Туг-С 1 у-Бег, РЬе-нур-Бег,Туг-Рго-бег, РЬе-Рго-Бег,РЬе-нур-Бег(Вк 1), С 1 у-Рго-БегТуг-Рго-С 1 у, Туг-Рго-Бег(Вг 1),Туг(Вг 1) -Рго-Бег(Вг 1),Ы - ОН, ОСН , ИН , ИН-К, ИН-ИНИН-ИН-Кгде К - СН, С Н , СН СГ , адамантил, 20К, - бензилоксикарбонил, фенил,в виде хлоргидратов и/или трифторацетатов, которые могут найти примене"ние в экспериментальной биологии имедицине.Цель изобретения - способ получения новых пептидов, обладающих болеевысокой анальгетической активностьюи низкой токсичностью.В экспериментальной части исполь- ЗОзованы следующие сокращения: Ме - ме-,тил, Ег - этил 2 - бензилоксикарбонил; Вос-трет-бутилоксикарбонил; 1 Изобретение относится к способу получения пептидов общей формулы:40;15 (верхний слой)В н-Бутиловый спирт - уксуснаякислота - вода 4:1:1Г Хлороформ - метиловый спирт -32%-ный гидроксид аммония65:45:20Д Хлороформ - метиловый спирт8:2Анализы методом ТСХ проводятся нев стандартных условиях,поэтому значения К могут меняться, особенно приразличных температурах. Температуруплавления определяют в открытых капиллярах без поправок. Большинствопроизводных до плавления размягчает"ся и разлагается. Растворители длякристаллизации, высаждения или смешения даны в скобках.Бумажный электрофорез под высокимнапряжением проводят на приборе фе, рограф Оригинал-Франкфурт, тип 64(1); Рго 0,99 (1); С 1 у 1,03 (1);Р-А 1 а 1,00 (1); Туг 1,96 (2); РЬе1,02 (1) .Найдено, 7: С 63,05; Н 6,51;И 12,65; С 1 4,05.С, НС 1 Ип 01 оВычислено, 7: С 63,22; Н 6,43;И 12,55; С 1 3,97.П р и м е р 39,15Н-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-РгоБег-ОН НС 1 (СЫЧ) Стадия 1,20Н-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг(Вг 1)- Рте-Бег-ОН (С 1 Ч) Из соединения (СХ 1) путем обработки 1 н. раствором ИаОН получают (СЬЧ)Стадия 2. Н-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-РгоБег-ИНИН 2 НС 1 (СЫ)Из соединения (ХЧ 1) путем каталитического гидрирования в метаноле над 107.-ным палладием на угле в присутствии эквимольного количества НС 1 получают (СЫ), т,пл,198-200 С (изопропанол-этилацетат) К = 0,52 (С); Е = 0,86; К= -1,4 (С =1, МеОН).Аминокислотный анализ; Бег 0,96 (1), Рго 0,97 (1), С 1 у 1,02 (1), 0-А 1 а 1,03 (1); Тут 2,01. (2); РЬе 1,00 (1) .Найдено, 7.: С, 53,85, Н 6,08, И 14,14, С 1 8,09.СН С 1 ИВычислено, 7: С 53,93; Н 5,99; И 14,15, С 1 7,96.П р и м е р 40. Н-Туг-Э-А 1 а-РЬе-С 1 у -Туг(Вг 1)- Рго-Бег-.ОН НС 1 (С 1 ЧТ) 30Из соединения (СЬЧ) по методике,описанной в примере 3 (стадия 2),получают (СЬЧ 1).Стадия 3. Н-Туг)-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-РтоБег-ОННС 1 (СЬ 1 Ч) Из соединения (СЬЧ 1) по методике,описанной в примере 1 (стадия 10), 40получают (СЫЧ), т. пл. 215 С (изоопропанол-эфир), К = 0,57 (С); Ед =(1); Рго 1,03 (1); С 1 у 1,02 (1);О-А 1 а 0,98 (1); Туг 2,04 (2), РЬе1,00 (1)Найдено, 7: С 57,21; Н 5,87;И 11,60; С 1 4,28.С мНуо С 1 ИОВычислено, /: С 57,17; Н 5,99,И 11,66; С 1 4,21. Н-Туг-Р-А 1 а-РЬе-С 1 у-Мег(О)- НС 1 (С 1 11) Стадия 1. Вос-Туг-П-А 1 а-РЬе-С 1 у-Мет(0)- ИН ( СЬ 111) Из соединения (ЬХХХ 1 Х) путем обработки ИаЭО в водном метаноле полу 4очают (СЫ 11), т.пл. 159-161 С (этилацетат).Стадия 2,Периферическая анальгетическаяактивность описываемых пептидов бы ла изучена в опытах дп чегго на препарате продольная мьппца - меямьппечное сплетение подвздошной мьппцы морской свинки (ПММС) и на сосудистом пучке мьппи (СПМ),Н-Тут-О-А 1 а-РЬе-С 1 у-Ме с (0) -ИН НС 1 (СЫ 1) 40Из соединения (СЬ 11) по методике,описанной в примере 3 (стадия 2),получают (СЬ 11), т.пл. 125 С (диизопропиловый эфир); К = 0,37 (С).5 Аминокислотный анализ: С 1 у 1,031316565 42от активности Н-Туг-Э-А 1 а-Рйе-С 1 у-Туг-Рго-Бег-ИН СР СООН, принятойза 1007 Для Н-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-Рго-Бег-ИН СРзСООН на препарате ПММС 1 С = 3,3 нМ, а на СМП1 С = 29 нМ (1 С - концентрацияпрепарата, вызывающая ослаблениесокращения препаратов гладких мьппцна 507).1 О Центральная анальгетическая активность описываемых соединений былаизучана в опытах дп чиччо на крысахпо тестам "отдергивание хвоста".и"горячая пластинка". Крысам линии15Ядзгаг мужского пола вводили исследуемые соединения интрацеребровентрикулярно в 10 мкл физиологическогораствора по известной методике. Втесте "отдергивание хвоста" латентный период при воздействии излучаемого тепла измеряли автоматически сточностью до 0,1 с. В каждом эксперименте использовали группы, содержащие 10 животных,25Время реакции на воздействие излучаемого тепла и горячей пластиныизмеряли за 30 и 15 мин до введенияпрепарата и затем каждые 15 мин в течение первого часа после введенияпрепарата и далее каждые 30 мин в течение следующих 3 ч. Рассчитывалиэффективную дозу (ЭД ,) и 957-ныедоверительные пределы.Для Н-Туг-Р-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-Рго-.35 -Бег-МН СР СООН, активность которого принята 100, по тесту "горячаяпластинка" ЭД = 13,3 пмоль, потесту "отдергивание хвоста" 23 пмоль,.Полученные результаты представле 40 ны в табл. 2. Критерием активности пептидов на препаратах гладкой мышцы при электрическом раздражении служило максимальное ослабление подергиваний, наблюдаемое в течение 5 мин контакти рования с исследуемым соединением. Препарат ПММС готовили по известной методике и помещали в ванночку емкостью 15 мл с модифицированным раствором Кребса, содержащим, ммоль: ЯаС 1 118; КС 1 4,75; СаС 1 2,54, КН,РО 1,19; МАМБО 0,12; ИаНСО, 25; глюкоза 11, гексаметохлорид 0,069; мепираминмалеат 0,125 мкМ; О, 957. и СОп 57. Температура раствора 36 С.Похожие на подергивания сокращения продольной мышцы фиксировали изометрически с помощью датчика, измеряющего растяжение (07 1, Ваз 11 е, Мд 1 ап), и демонстрировали на записывающем микродинамометре(Ваз 11 е, М 11 ап), Интрамуральные нервы раздраж:ли прямолинейными импульсами длительностью 0,5 мс с интервалами 10 с используя надмаксимальное напряжение. Обычно подвздошную мьппцу подвер гали воздействию опсоидных пептидов в течение 3-5 мин до тех пор, лока ослабление подергиваний не становилось максимальным.Препарат СПМ готовили но известной методике и помещали в ванночку емкостью 8 мл с модифицированным раствором Кребса, содержащим, ммоль: ЯаС 1 118; КС 1 4,75; СаС 1 2,54; КНРО 0,93, МаНСО 25; глюкоза 11; аскорбиновая кислота 0,1; натриевая соль.этилендиаминтетрауксусной кислоты 0,027; О 957 и СО 57. Темпеоратура раствора 36 С. Продольные сокращения записывали так же, как описано для случая с подвздошной мьппцей морской свинки.Интрамуральные нервы раздражали сериями прямолинейных Импульсов длительностью 1 мсСерии импульсов подавали с интервалами 15-20 с, и они состояли из 6-7 раздражений с интервалами 100 мс. Импульсы проходили между платиновым точечным источником, находящимся в донной части ванночки, и вертикальным кольцом (высота 5 мм, ширина 10 мм) иэ платиновой фольги, закрепленным на верхней части ванночки с органическим раствором,50 Полученные результаты представлены в табл. 1, где активность изучен" ных соединений выражена в процентах формула изобретения Способ получения пептидов общей45 формулы Н-Туг-П-А 1 а-РЬе-В-С-И,где В - С 1 у, Бег, РЬе,С - Туг, В-Туг, Ьец, Мег, Мег(О),Рго, Бег, Туг-Рго, Туг(Вя 1) -НР-ИН-Е,где Е - бензилоксикарбонил,методом смешанных ангидридов в средедиметилформамида или тетрагидрофурана при (-15) - (+25) С в присутствии этилхлорформиата и полученноесоединение формулы где Вос, В и Е имеют указанныезначения,обрабатывают раствором НС 1 в уксусной кислоте или тетрагидрофуране с образованием соединения общей формулы З где В и Е имеют указанные значения,которое конденсируют с соединениемформулы где Вос имеет укаэанное значение,методом смешанных ангидридов в присутствии этилхлорформиата в среде ди-.метилформамида или тетрагидрофуранапри (-15) - (+25) С и от полученного соединения формулы где Вос, В и Е имеют указанные значения,отщепляют М-концевую защитную группу 5 О обработкой раствором НС 1 в уксусной кислоте или тетрагидрофуране с получением соединения формулы где В и Е имеют указанные значения,которое конденсируют с соединениемформулы где Вос имеет указанное значение,методом смешанных ангидридов в присутствии этилхлорформиата в средедиметилформамида или тетрагидрофурана при (-15) - (+25) С и полученное производное защищенного трипептида формулы Вос-А 1 а-РЬе-В-ИН-ИН-Е,где Вос, В и 2 имеют указанные значения,обрабатывают раствором НС 1 в уксусной кислоте или тетрагидрофуране с образованием соединения формулы: Н-А 1 а-РЬе-В-ИН-ИН-Е,где В и Е имеют указанные значения,которое конденсируют с соединениемформулы где Вос имеет указанное значение, методом смешанных ангидридов в присутствии этилхлорформиата в среде диметилформамида или тетрагидрофураона при (-15) - (+25) С и полученное производное защищенного тетрапептида формулы: Вос-Туг-Р-А 1 а-РЬе-В-ИН-ИН-Е,где Вос, В и 2 имеют укаэанные значения,подвергают каталитическому гидрогенолизу в присутствии 10 Ж-го Ро/С в метаноле или диметилформамиде с образованием соединения общей формулы ФВо с-Туг-Р-А 1 а-РЬе -В-БН-ХН где Вос и В имеют указанные значения, которое конденсируют азидным методом в присутствии н-бутилнитрита и НС 1 в среде диметилформамида или тетрагидорофурана при (-30) - (+25) С с соединением общей формулы где 0 - Туг, 0-Туг, 1.ец, Мег, Ме(0),Рго, Ъег, Туг(Вг 1), С 1 у, РЬе,Тгр;Р - Бег, Бег(Вг 1), С 1 у или простая связь;16565 46ной группы от полученного соединения общей формулы 45 Вос-Е-Р-У,5где Вос, Е, Р и Ю имеют указанныезначения,обработкой НС 1 в тетрагидрофуране иот полученного соединения общей10 ф ВВс-Р-ОН,Вос-Э-Е-Р-И,где Вос, Р, Е, Р и И имеют указанные значения,отщенляют Я-концевую трет-бутилоксикарбонильную защитную группу обработкой НС 1 в тетрагидрофуране и отполученного соединения общей формулы Н-Е-Р-Й,где Вос, В, С и И имеют указанныезначенияотщепляют Я-концевую трет-бутилоксикарбонильную защитную группу обработкой НС 1. в тетрагидрофуране или трифторуксусной кислотой при 0 С и, если имеются боковые защитные групЗ 0,пы, то их, в случае необходимости,удаляют гидрогенолизом в присутствии 107.-ного Рд/С в метаноле или диметилформамиде.Приоритет по приз накам: Вос-Е-ОН,20.09.79 при И - ОН, ОСН , ЯНЯн-к, где К - СНЗ, Стн СН 2 СР 3 уадамантил.ф 09.05.80 при М - ЯН"ЯН, ф ЯН-ЯН-Е.1 фгде К 1 - бенэилоксикарбонил, фенил.Таблица 1 Соединение Анальгетическаяактивность, 7.Н-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-Рго-Бег-ЯН СР СООН Н-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-Рго-Бег-ЯН-Ие НС 1100 100 80 Н-Туг-Р-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-Рго-Бег-ЯН-Ег НС 1 70-80 90 80-90 70-80 Н-Туг-Р-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-Рго-Бег-ЯНЯН 2 НС 1 Е - Рго, Бег, Нур, С 1 у, Ча 1 илипростая связь,.И имеет указанные значения, получаемым путем конденсации соединения общей Формулы где Вос и 0 имеют указанные значения,методом смешанных ангидридов в при-сутствии этилхлорформиата или изобутилхлорформиата в среде диметилформамида или тетрагидрофурана при(-15) - (+25) С или карбодиимидным ьметодом в присутствии дициклогексилкарбодиимида и Я-оксибензотриазолас соединением общей формулы где Е Р М имеют указанные значения,Э Экоторое, в свою очередь, получают,если Е - Рго, Бег, Нур, С 1 у, Ча 1,путем конденсации соединения общейформулы где Вос имеет указанное значение,Е - Рго, Бег, Нур, С 1 у, Ча 1,с соединением общей формулы где Р и У имеют указанные значения, методом смешанных ангидридов в присутствии этилхлорформиата или изобутилхлорформиата в среде диметилформамида или тетрагидрофурана при (-15)-(+25) С с последующим удалением Я-концевой трет-бутнлоксикарбонильВос-Туг-Р-А 1 а-РЬе-В-С-И,.50 Продолжение табл. Соединение Анальгетическаяактивность, Х ПММС СПМ Таблица 2 00 100-Туг-Р-А 1 а"РЬе-С 1 20-3 20-40 Н-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-ИНИН.Н Н-Туг-.П-А 1 а-РЬе-С 1 уг-А 1 а-РЬе-С 1.ец Н-Туг-А 1 а-РЬе-Яаг-Т 4 БН-ЕфНС 14 Составитель В.ВолковаТехред В,Кадар, Корректор С.Шекмар В.Петр Реда Заказ 2375/58 оизводственно"полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 Н"Туг-В-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-Бег-ИН СР СОН-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у"Туг-ИН ,СР, СООН НН НС 1 НС 1Тираж 347 ВНИИПИ Государстве по делам изобрет 113035, Москва, Ж, Подписноеного комитета СССРний и открытийРаушская наб., д. 4/515 3на бумаге В 2317 ф, "Гляген эндБулл" при напряжении 1600 В (40 В/см)и рН 1,2 (муравьиная кислота - уксусная кислота - вода 123:100:777),Значения электролитической подвижности (Е ) приведены относительноэтих величин для глутаминовой кислоты,П р и м е р 1. Н-Туг-А 1 а-РЬеС 1 у-Туг-Ргр -Бег-МНСРз СООН Стадия Т. Вос-Рго-Яег-МН (1) 4упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор последовательно промывают насыщеннымраствором МаС 1 в 1 М лимонной кислоте, 1 М раствором МаНСОз и водой.Органический слой сушат над безводным Ма ЯО и упаривают в вакууме,Остаток кристаллизуют в системеэтилацетат-петролейный эфир, Получают 1,4 г (111), т,пл, 115 С; оК раствору 1,00 г (4,65 ммоль)Вос-Рго-МН в 10 мл безводного тетрагидрофурана последовательно прибавляют при -12 С 0,52 мл (4,65 ммоль)М-метилморфолина и 0,45 мл 20(4,65 ммоль) этилхлорформиата. Реакционную смесь перемешивают 2 мин при-12 С и добавляют охлажденный раствор 0,48 г (4,65 ммоль) Н-Бег-МНв 10 мл ДМФА. Реакционную смесь пе-. 25ремешивают при -10 С 3 ч и при 20 С1 ч, осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме. Остатоккристаллизуют в системе метанол -эфир. 30Получают 1,1 г (1), т.пя, 138 С,об = -58,9 (С = 1, МеОН), К 10915 (А)У, 0933 (В).Стадия 2,35(11) Н-Рго-Бег-МН СР СООНэ Вос-Туг(Вз 1)-Рго-Бег-МН (111) К раствору 1,0 г (3,2 ммоль) (11) 50 в 35 мл ДМФА добавляют при 0 С 36 мл (3,2 ммоль) М-метилморфолина, 1,2 г (3,2 ммоль) Вос-Туг(Вг 1)-ОН, 0,43 г (3,2 ммоль) 1-оксибензотриазола и 0,73 г (3,2 ммоль) дициклогексилкар бодиимида. Реакционную смесь перемеошивают 1 ч при 0 С и в течение ночи при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат 1,0 г (3,3 ммоль) соединения (1).растворяют при 0.С в 10 мл трифторуксусной кислоты. Через 30 мин раст вор упаривают в вакууме, Продукт извлекают с помощью системы эфир - петролейный эфир.Получают 1,0 г (11), т,пл, 48 50 С, К = 0,10 (С). 45Стадия 3. Из 1,0 г (1,8 ммоль) (111) по методике, изложенной на стадии 2, получают 1,0 г (17), т.пл. 54-57 С(разл,), с= -7,4 (С р 1; МеОН),К = 0,59 (С).Стадия 5,Вос-РЬе-С 1 у-МН-МН К раствору 1,0 г (3,8 ммоль)Вос-РЬе-ОН в 10 мл безводного, тетрагидрофурана последовательно добавляют при -12 С 0,42 мл (3,8 ммоль)М-метилморфолина и 0,3 мл (3,8 ммоль)этилхлорформиата, Реакционную смесьоперемешивают 2 мин при -12 С и до-бавляют охлажденный раствор 0,95 г.(3,7 ммоль) Н-С 1 у-МН-МН-Е НС 1 и0,4 мл (3,7 ммоль) М-метилморфолинав 15 мл ДМФА. Реакционную смесь пеоремешивают 3 ч при -10 С и 1 ч прио20 С, отфильтровывают осадок, фильтрат упаривают в вакууме. Остатокрастворяют в этилацетате и несколькораз последовательно промывают насыщенным раствором МаС 1 в 1 М лимоннойкислоте, 1 М раствором МаНСОз и водой. Органический слой сушат надбезводным Ма ЯО и упаривают в вакууме, Из остатка продукт извлекаютс помощью системы метанол-диизопропиловый эфир.Получают 1,4 г (Ч), т,пл. 143 С,осип = +5,6 (С = 1, МеОН), К= 0,63 (А),Стадия 6,Н-РЬе-С 1 у-МН-МН-Е10 г (2, 1 ммоль) (Ч) в течение 30 мин обрабатывают 10 мл 1,3 н.раствора НС 1 в ледяной уксусной кислоте. Затем реакционную смесь упаоривают в вакууме при 30 С, остатокСтадия 1,(ХЧ 11) Вос-Бег-ИНИНвательно добавляют при -30 С 2,0 мл (12 ммоль) 6 н, НС 1 в безводном тетрагидрофуране и 0,63 мл (5,28 ммоль) н-бутилнитрита. Реакционную смесь пео ремешивают 30 мин при -30 С, добавляют 1,34 мл (12 ммоль) И-метилморфоолина при -40 С, а затем охлажденный до -40 С раствор 0,865 г (4,0.ммоль) Н-Туг-Нн НС 1 и 0,456 мл (4,0 ммоль) Я-метилморфолина в 50 мл диметилформамида. Реакционную смесь оставляют.она 7 сут при -10 С, упаривают до минимального объема, отфильтровывают осадок и из фильтрата высаживают продукт добавлением хлороформа. Полученный сырой продукт кристаллизуют из смеси метанол-хлороформ.Получают 2,0 г (ХТЧ), т.пл. 127- 129 оС; о р = +19,9 (С = 1, МеОН); В. = 0,15 (А); 0,56 (В),Стадия 2Н-Туг-Р-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-МН,СР, СООН (ХЧ) 1,0 г (1,4 ммоль) (Х 1 Ч) смешивают с 12 мл трифторуксусной кислоты. Реакционную смесь выдерживают 30 минопри 0 С, упаривают в вакууме, оста,ток растирают с эфиром, образовавшийся осадок отделяют и перекристаллизовывают из смеси изопропанол-эфир Получают 0,94 г (ХЧ), т.пл. 145 - 146 С, о 3 = +25, о 3= +34,5 ( = 1, МеОН); К = 0,65 (С).Аминокислотный анализ: С 1 у 1,02 (1), 0-А 1 а 1,00 (1); Туг 1,96 (2); РЬе 1,00 (1).Найдено, 7: С 55,57, Н 5,35; Н 11,39; Р 7,65.Сч Нз Р з И ь 09Вычислено, Х: С 55,73; Н 5,36; И 11,47, Р 7,78 .Пример 3. Н-Туг-П-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-РгоБег-ИН-ИН(ХЧ 1) К 1,0 г (4,87 ммоль) Вос-Бег-ОН в 20 мл тетрагидрофурана последова- . тельно добавляют 0,55 мл (4,87 ммоль) И-метилморфолина и 0,49 мл-12 С. Реакционную смесь перемешиваоют при -12 С 2 мин и добавляют ох 5 10 15 20 25 8лажденный раствор 1,0 г (4,87 ммоль)Н Я-ИН-Е НС 1 и 0,55 мл (4,87 ммоль)М-метилморфолина в 20 мл ДМФА. Реакционную смесь перемешивают при-10 С 3 ч и при 20 С 1 ч, отфильтровывают осадок, фильтрат упариваютв вакууме, Остаток растворяют вэтилацетате и полученный раствор несколько раз промывают последовательно насыщенным раствором ИаС 1, 1 Млимонной кислотой, 1 М растворомБаНСО, и водой, сушат над безводнымНа БО и упаривают в вакууме, Остаток очищают на хроматографическойколонке с силикагелем, используя вкачестве элюента систему хлороформметанол 98:2. Фракции, содержащиеоднородный по данным тонкослойнойхроматографии продукт, объединяют иупаривают в вакууме. Остаток перекристаллизовывают из смеси эфир-петролейный эфир,Получают 1,4 г (ХЧ 11), т,пл. 4246 С, оса = -25,8 (С = 1; МеОН),К = 0,52 (А).Стадия 2. 1,0 г (2,83 ммоль) (ХЧ 11) растворяют в 10 мл 4 н, раствора НС 1 в безводном тетрагидрофуране, через 30 мин добавляют эфир, выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси абсолютный этанол-эфир. Получают 0 7 г (ХЧ 111), т.пл. 110- 115 С, Я р =. +20,7 (С = 1, МеОН),От 49 (С)Е,г = 1,16,Стадия 3. Вос-Туг(Вг 1)-Рго-ОН 1,0 (8,7 ммоль) Н-Рго-ОН растворяют в 4,35 мл 2 н, раствора НаОН.оРаствор охлаждают до 0 С, разбавляют10 мл ДМФА и упаривают в вакууме при35 С. Остаток суспендируют в 10 млДМФА и добавляют 4,3 г (8,7 ммоль)Вос-Туг(Вз 1)-ОИр. Реакционную смесьперемешивают 1 ч и упаривают в вакууме, Остаток растворяют в воде инесколько раз промывают этилацетатом.Водный слой охлаждают до 0 С, подкисляют 5 н. соляной кислотой дорН 2,0 и экстрагируют этилацетатом,Органический слой промывают до нейтральной реакции насыщенным растворомИаС 1 в воде, сушат над безводнымНаВО и упаривают,(ХХ) Вос-Туг-Рго-ОН 1,0 г (2, 13 ммоль) (Х 1 Х) в 15 мл метанола гидрируют в присутствии 0,27 г 103 Рй/С. Подле окончания гид- О рирования катализатор отфильтровывают, фильтрат разбавляют этилацетатом и упаривают в вакууме до образования осадка. Получают 0,7 г (ХХ),.т. пл. 136-138 С, м, = -25,0 (С= - 1, МеОН); К = 0,42 (А); Е8 =0,52Стадия 5.(ХХ 1)20 Н-Туг-Рго-Бег-ИНИННС 1 (ХХ 11)30Из 1, О г (1, 63 ммоль) (ХХ 1) по ме-: тодике, описанной на стадии 2 поо лучают 0,78 г (ХХ 11), т.пл. 172-174 С (эфир); о= -38,4 (С = 1 МеОН), К = 0,46 (С); Е, = 0,79. 35Стадия 7. 1,0 г (1,4 ммоль) (ХХЧ 11) в 10 млметанола гидрируют в присутствии 0,27 г 103-ного Ро/С. После окончания гидрирования реакционную смесь обрабатывают, как описано на стадии 4,Получают 0,64 г (ХХЧ 111),т.пл.148 С; о = +26,6(С = 1; МеОН); К = 0,34 (В); Е, = 0,57,Стадия 13. 40 Вос-Туг-А 1 а-Рпе-С 1 у-Туг-РгоЗег-ИНИН(ХХ 1 Х)К раствору 1,0 г (1,75 ммоль) (ХХЧ 111) в 15 мл безводного ДМФА последовательно прибавляют 1,1 мл (4,38 ммоль) 4 н. НС 1 в безводном тетрагидрофуране и 0,2 мл (1,93 ммоль)он-бутилнитрита при -ЗО С. Реакцион-.о ную смесь перемешивают при -30 С 30 мин, добавляют 0,5 мл (4,38 ммоль) . И-метилморфолина, а затем охлажденный до -ЗО С раствор 0,803 г (1,46 ммоль) (ХХ 11) и 0,16 мл (1,46 ммоль) И-метилморфолина в 15 мл безводного ДМФА. Реакционную смесь 55 Получают 3,7 г (Х 1 Х), т пл. 97 -100 С (разл), о 3 р = -15,7 (С1, МеОН), К 1 = 0,70 (А), Е 8=0,35.Стадия 4. Вос-Туг-Рго-Бег-ИНИНИз 1,0 г (2,65 ммоль) (ХХ) и 0,77 г (2,65 ммоль) по методике, описанной на стадии 1, получают 1,46 г (ХХ 1), т,пл. 116-118 С (эфир-петролейный эФир); Я , = -46,5 (С = 1, МеОН); К = 0,17 (А), О 37 (В).Стадия 6. Вос-РЬе-С 1 у-ИНИН(ХХ 111) Из 1,0 г (3,8 ммоль) Вос-РЬе-ОН и 0,95 г (3,7 ммоль) Н-С 1 у-ИНИНк ,фНС 1 по методике, описанной на стадии 1, получают 1,4 г (ХХ 111), т.пл. 143 С (метанол-изопропиловый эфир); м 3= +5,6 (С = 1; МеОН); К = 0,63 (А)Стадия 8. Н-РЬе-С 1 у-ИНИННС 1 (ХХ 1 Ч)50 1,0 г (2, 1 ммоль) (ХХ 111) растворяют в 10 мл 1,3 н. раствора НС 1 в ледяной уксусной кислоте, через 30 мин раствор упаривают в вакууме при 30 С. Остаток растирают с эфиром. Получают 0,89 г (ХХ 1 Ч),т.пл.178 С; о = +45,0 (С = 1, МеОН), Кс 0,78 (С) Е%2 = Оф 88 Вос-Р-А 1 а-Рпе-С 1 у-ИНИН(ХХЧ) Из 1,0 г (5,3 ммоль) Вос-А 1 а-ОНи 1,09 г (5,1 ммоль) (ХХ 1 Ч) по методике, описанной на стадии 5 полуФчают 2,5 г (ХХЧ), т,пл. 165 С,сц= +8,0 (С = 1; МеОН); К= 0,51 (А),Стадия 10,Н-П-А 1 а-РЬе-С 1 у-ИНИННС 1 (ХХЧ 1) Из 1,0 г (ХХЧ) по методике, описанной на стадии 6, получают 0,84 г (ХХЧ 1), т.пл. 180 С; сС =,+0,2 (С= 1, МеОН), К = 0,75 (С); Е = = 0,80.Стадия 11. Вос-Туг-П-А 1 а-Рпе-С 1 у-ИНИН(ХХЧ 11) Из 1,0 г (3,5 ммоль) Вос-Туг-ОН и 1,65 г (3,4 ммоль) (ХХЧ 1) по методике, описанной на стадии 5 получао ют 2,24 г (ХХЧ 11), т. пл. 148 С (метанол-эфир); ес= +16,2 (С = 1; МеОН); К = 0,38 (А) .Стадия 12. Вос-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-ИНИН (ХХЧ 111)Н-Туг-П-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-РгоЯег-ИНИН, НС 1 Из 1,0 г (0,95 ммоль) (ХХ 1 Х) пометодике, описанной на стадии 2, получают 0,89 г; т. пл. 170 С (разл.,этилацетат); Ы= -1,8(С = 1,МеОН); ос = +1,0 (С = 1, АсОН);К = 0,69 (С),Аминокислотный анализ: Бег 0,97(ХХХХХ) Вос-Туг-ИНИНК раствору 1,0 г (3,55 ммоль) Вос-Туг-ОН в 20 мл безводного ДМФА тетрагидрофурана последовательно прибавляют 0,4 мл (3,55 ммоль) И-метилморфолина и 0,48 мл (3,55 ммоль) изобутилхлорформиата при -12 С, Реакционную смесь перемешивают 2 мин при -12 С, добавляют охлажденный раствор 0,72 г (3,5 ммоль) Н И-ИНхНС 1 и 0,4 мл И-метилморфолина в 20 мл ДМФА. Реакционную смесь переомешивают при -10 С 90 мин, отфильтровывают образовавшийся осадок, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и полученный раствор несколько раз последовательно промывают водным растооставляют на два дня при -9 С, отфильтровывают образовавшийся осадок, Фильтрат упаривают в вакууме и остаток смешивают с 107-ной лимонной кислотой, охлажденной до 0 С, Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают до нейтральной реакции водой, высушивают в вакууме и перекристаллизовывают из смеси этилацетат-эфир. Получают 1, 15 г (ХХ 1 Х), т,пл, 140- 150 С; ос = -20,3 (С = 1; МеОН), К = 0,17 (В); 0,92 (С).Стадия 14.вором 1 М лимонной кислоты, 1 М раствором. ИаНСО и насьпценным раствором ИаС 1. Органический слой сушат над безводным Иа,БО и упаривают.Получают 1,3 г (ХХХ 1), т,пл, 68-70 С; о = -5,85 (С = 2; МеОН); К = = 0,76 (А)Стадия 2. 1,0 г (2,33 ммоль) (ХХХ 1) растворяют в 10 мл 4 н. НС 1 в безводном тетрагидрофуране, через 30 мин раствор упаривают в вакууме и продукт осаждают иэ изопропанола эфиром. Получают 0,76 г (ХХХ 11), т.пл, 103- 105 С; ос р = +48,8 (С = 1; МеОН), К=О 70 (С), Е =092.20 Стадия 3. К раствору 1,0 г (1,75 ммоль) (ХХ 711) в 15 мл безводного ДМФА последовательно добавляют 1,1 мл (4,39 ммоль) 4 н, НС 1 в безводном тетрагидрофуране и 0,2 мл (1,93 ммоль)он-бутилнитрита при -30 С. Реакционную смесь перемешивают 30 мин при -30 С, добавляют 0,5 мл (4,38 ммоль) И-метилморфолина, а затем охлажденный до -30 С раствор 0,535 г (1,46 ммоль) (ХХХ 11) и О, 16 мл (1,46 ммоль) И-метилморфолина в 15 мл безводного ДМФА. Реакционную смесь выдерживают в течение трех дней прио-9 С, отфильтровывают образовавшийся осадок, фильтрат упаривают в вакууме, Остаток смешивают с охлажден-. ной до 0 С 102-ной лимонной кислотой, выпавший осадок отфильтровывают, промываютдо нейтральной реакции водой, сушат в вакууме и перекристаллизовывают из смеси изопропанол-эфир. Получают 0,85 г (ХХХ 111), т.пл. 137 150 С; Я в = +3,8 (С = 1, МеОН); К = 0,27 (А), 0,52 (В).Стадия 4.(ХХХ) Из 1,0 г по методике получают О,ацетат), т.(1); Р-А 1 а 0,98 (1); Туг 1,96 (2),РЬе 1,00 (1) .Найдено, %: С 59,61; Н 5,81;М 1220 С 1 4 й 49Вычислено, %: С 59,73; Н 5,76;М 12,19; С 1 4,41Пример 5,Н-Туг-Р-А 1 а-РЬе-Ъ 1 у-Туг-РгоМН НС 1 (ХХХ 1 Ч) Вос-Туг( Вг 1) -Рго-МН г (ХХХЧ)Получают путем конденсации ВосТуг(Вг 1)-ОНс Н-Рго-МН в присутствии2дицикгексикарбодиимида и М-оксибензотриазола в среде ДИФА.Стадия 2,4С Н М ОВычислено, %: С 62,98; Н 6,54;М 10,49.Стадия 5. Н-Туг-Р-А 1 а-Рйе-С 1 у-Туг-РгоНС 1 (ХХХ 1 Ч) Из соединения (ХХХЧ 111) путем обработки раствором НС 1 в этилацетатеполучают (ХХХ 1 Ч), т. пл. 200 С (этилацетат); К = 0,58 (С); Е, = 0,59.Аминокислотный анализ: Рго 1,00(1), С 1 у 1,00 (1); 0-А 1 а 1,01 (1);Туг 2,00 (2), РЬе 1,03 ( 1),Найдено, .7.: С 54,12; Н 5,30;М 11,83; Р 6,90,С На Р ИгОВычислено, Х: С 54, 21; Н 5, 41;Н 11,96, Р 6,95.Пример 8, 35 Вос-Туг (Вг 1) -Нур-Бег (Вг 1) -ИН (Х 1,1 Х) Из Вос-Туг(Вк 1)-ОН и (Х 1,Ч 111) методом активированных эфиров получают (Х 11 Х), т.пл. 130 С (метанол-этнлацетат-эфир), К = 0,46 (В); ос в9 : -5,7 (С = 1; МеОН)Стадия 6.Н-Туг(Вк 1)-Нур-Бег( Вк 1)-НН (1,) Из соединения (Х 1,1 Х) по методике, описанной в примере 1 (стадия 2), получают (1.1), т,пл, 67-69 С (эфирпетролейный эфир); К 1 = 0,52 (С); Е, = 0,66.Стадия 7. Н-Туг-А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг-НурБег-ХН НС 1 (Х 11 Ч)а Вос-Туг"А 1 а-РЬе-С 1 у-Туг Нур-Бег-МН (1 11) 40 Стадия 1. Из (Ь 1) по методике, описанной в примере 1 (стадия 12), получают (1.11), т.пл. 156-160 С (этилацетатэфир); К 1 = 0,75 (С); ос= -1,4 (С = 1, МеОН).Аминокислотный анализ; Нур 0,98 ( 1); Бег 0,98 (1); С 1 у 1,05 (1);0-А 1 а 1,01 ( 1); Туг 1,97 (2); РЬе1,00 (1).Найдено, Ж: С 58,63; Н 6,15; Н 11,90.СНдз И 80,зВычислено, 7: С 58,81; Н 6,36; И 12,19,Стадия 8. Вос-Бег-ЯН, Вос-Бег(Вя 1)-ИН