Способ получения кардиолипина

(51)М. Кл.2 А 61 К 37/2 Государственный комитет СССР по делан изобретений и открытий(53) УДК 615,45: :615,34(088,8) Опубликовано 150180 Бюллетень Мо 2 Дата опубликования описания 20.01.80(72) Авторы изобретения Г,А. Сенников, В.И. Ивец, И.И, Гольбец, Г.Л. Орлова и Ю.М, Краснопольский Завод бактерийных препаратов Харьковскогонаучно-исследовательского института микробиологиивакцин и сывороток им. И.И, Мечниковаи Московский ордена Трудового Красного Знамениинститут тонкой химической технологии им, М.В, Ломоносова(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАРДИОЛИПИНА Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается получения активных реагентов,используемых в серодиагностике сиФилиса.Известен способ получения кардиолипина путем экстракции ацетономизмельченной ткани сердца крупногорогатого скота, обработки метанолом,осаждением целевого продукта раствором хлористого бария и выделения ввиде натриевой соли (1),Однако известный способ являетсятрудоемким и обеспечивает невысокийвыход целевого продукта (0,35 г из1 кг сердечной мышцы) с высоким содержанием примесей до 20-25,Целью изобретения является повышение качества, выхода целевого продукта и упрощение технологии производства.Цель достигается тем, что экстракцию ацетоном проводят в атмосфереинертного газа при температуре от-2 до -10 С и осаждение бариевой сооли кардиолипина проводят при температуре от +3 до +5 С,Способ осуществляют следующимобразом.30 Сердечную мышцу измельчают на гомогенизаторе, затем трижды проводят экстракцию ацетоном при температуре от -3 до -10 С. Из обезжиренной и обезвоженной сердечной мышцы трижды экстрагируют фосфолипиды метанолом при коьнатной температуре. Общий метанольный экстракт фосфолипидов осаждают водным раствором хлористого бария. Полученный осадок растворяют в эфире и дважды переосаждают раствором хлористого бария в метаноле. Бариевую соль кардиолипина растворяют в смеси эфира и этанола и при помощи раствора хлористого натрия переводят в натриевую соль кардиолипина, К получеНному раствору добавляют равный объем метанола, а затем кардиолипин осаждают из раствора в видебариевой соли путем добавления водного раствора хлористого бария, Процесс переосаждения кардиолипина и перевода его в натриевую форму повторяют. Полученный раствор натриевой соли кардиолипина в эфире обезвоживают сернокислым натрием. уПаривают в токе неокисляющего газа. Осадок растворяют в абсолютном этаноле. Процессы осаждения и отделе09092 Формула изобретения ЦНИИПИ Закаэ 8632/5 Тираж 673 Подписное филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная,4 ния осадков солей кардиолипина проо,водят при температуре +3 до +5 С. Вцелях уменьшения процессов окисления весь технологический цикл получения кардиолипина проводят в атмосфере неокисляющего газа (углекислого газа или азота),П р и м е р, 1 кг обезжиреннойткани сердечной мышцы крупного рогатого скота измельчают на гомогенизаторе при 8000 об/мин с ацетоном,охлажденным до температуры -3 -10 С.К полученному гомогенату добавляютацетон до общего объема 2,0 л (далее все объемы указаны на 1 кг сердечной ткани), и проводят экстракцию в реакторе с мешалкой при 150- (5200 об/мин и температуре -3 -10 С нтечение 3 ч в атмосфере неокисляюшего газа. Ацетон удаляют фильтрацией. Весь процесс проводят трехкратно. 20Осадок заливают 2,0 л метанола ыэкстрагируют Фосфолипиды н течение3 ч в реакторе с мешалкой при 150200 об/мин в атмосференеокисляющего газа при комнатной температуре. Метанол отделяют фильтрацией,Процесс проводят три раза. Все триметанольных экстракта объединяют, Изохлажденных до +3 +5 ОС экстрактовосаждают кардиолипин, добавляя 60 млводного раствора 20-ного хлористого бария (в дальнейшем все процессы.осаждения и отделения осадков проводятпри 3-5 С) . Формирующийся 12-18 чосадок отделяют центрифугированиеми промывают 0,5 л метанола, Промытый35метанолом осадок бариеной соли кардиолипина растворяют в 100 мл эфира,К полученному эфирному раствору добавляют два объема метанола, содержащего 0,2 хлористого бария, раэмешиваютфв течение 30 мин и центриФугируют. Операцию повторякт. Осадокбариевой соли кардиолипина растворяют в 100 мл эфира и 20 мл этанола и добавляют 12 мл 18-ного раствора хлористого натрия. Водно-спиртовой слой удаляют. К эфирному раствору добавляют 20 мл этанола и 120 мл18-ного раствора хлористого натрияРазмешивают в течение 40 мин, послечего водно-спиртовой слой удаляют,операцию повторяют. Укаэанными операциями переводят бариевую соль кардиолипина в натриевую,К 100 мл эфирного раствора натриевой соли кардиолипина прибавляют33 мл метанола (1/3 от объема эфира), Осадок удаляют центрифугиронанием, К эфирно-метанольному раствору натриевой соли кардиолипина добавляют 67 мл метанола (так, чтобы соотношение эфир метанол было 1:1) и осаждают кардиолипин н виде бариеной соли добавлением 20 мл водного раствора 20 хлористого бария. Осадок Формируется за 12-18 ч, после чего его промывают 100 мл метанола, центрифугируют и растворяют в 100 мл эфира. К полученному эфирному раствору бариеной соли кардиолипина добанляют 200 мл (2 объема) метанола, содержащего 0,2% хлористого бария. Раэ - мешинают 30 мин и центрифугируют.Операцию повторяют, Осадок растворяют и 100 мл эфира, 20 мл этанола и прибавляют 120 мл 18-ного хлористого натрия. Размешивают 40 мин и нодно- спиртовой слой удаляют . Операцию повторяют. Полученный эфирный раствор натриеного кардиолипина обезноживают при помощи сернокислого натрия (безводного) и упаривают н токе неокисляющего газа при 30 С. Осадок при этом процессе составляет 0,48-0,52 г, Готовый продукт растворяют в 100 мл абсолютного этанола, хранят н темном месте при 3-8 С в атмосфере неоокисляющего газа.Предлагаемый способ позволяет увеличить выход целевого Продукта ,0,5 г иэ 1 кг сердечной мышцы),.уменьшить количество примесей до 7-10, упростить технологию произ - водстна и сократить технологический процесс с 12 суток до 6 суток. Способ получения кардиолипина путем экстракции ацетоном измельченной ткани сердца крупного рогатого скота, обработки метанолом, осаждением целевого продукта раствором хлористого бария и выделения в виде натриевой соли, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения качества выхода целевого продукта и упрощения технологии производства, экстракцию ацетоном проводят н атмосФере инертного газа при температуре от -3 до -10 С и осаждение бариевой соли кардиолипина проводят при температуре от +3 до +5 С.Источники информации принятые во ннимание при экспертизе1. Регламент получения кардиолипинового антигена для реакции Вассермана У 36-75, 11.06.75.