Способ получения протеолитического фермента

(51)М. Кл, С 07 О 7/02// А 61 К 37/48 Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытий(088,8) Дата опубликования описания 30. 03. 80(72) Авторы изобретения Е. Д. Казаков, М. П. Попов, О. В. Козырева, Ю. И. Гончаров и Р. И. Захарова Московский ордена Трудового Красного Знаменитехнологический институт пищевой проминленностии Московский опытный завод Ферментных препаратов(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОГО ФЕРМЕНТА Изобретение относится к производству ферментов и предусматривает использование нового источника протеолитических ферментов при комплексной. переработке сырья (пшеничные отруби) в промышленности микробиологического синтеза. Пшеничные отруби широко используются в. качестве питательной среды при культивировании микроорганизмов. Способ позволяет предварительно выделить из отрубей собственнье протеолитические ферменты. Получаемый предлагаемым способом препарат протеолитического фермента может применяться в пищевой, медицинской и 15 микробиологической промышленности, а также лабораторной и медицинской практике,Высшие растения используются для получения разнообразных ферментов и 20 белковых препаратов. Так, из пшеничных отрубей получают фермент-амилазу посредством экстрагирования отрубей пшеницы водой 1.Известен также способ выделения 25 протеолитических ферментных препаратов из семян пшеницы, заключающийся в экстрагировании на холоду семян пшеницы буферным раствором пирофос 4 ата натрия (рН 7,0) с последующим 30 центрифугированием и высаливаниемчротеолитических ферментов сульфатомаммония 2 .Этот способ позволяет выделитькислые протеаэы с оптимумом действияпри рН 3,8 Их активность в непроросшем зерне пшеницы очень мала. Способимеет чисто научное значение и предназначен для изучения свойств этихферментов. Способ не предусматриваетполучения фермента в значительных количествах для практического использования.Целью изобретения является получение высокоактивного препарата протеолитического фермента, имеющего оптимум действия при рН 6,3-6,7, для использования в пищевой промышленностии медицине,и расширение сырьевой базы,Это достигается тем, что в качестве сырья используют пшеничные отрубии экстракцию фермента проводят 0,150,75-нюа раствором соды с последующим осаждением путем подкисления экстракта кислотой до рН 5,3-6,0,Предпочтительно процесс проводятследующим образом: пшеничные отрубиэкстрагируют 6-10 вес.ч. 0,15-0,30-ного раствора соды в течение 3-5 минпри интенсивном перемешивании или пу649215 ф-фф 4чф 1 -акостью по 250 л. В диффузор загружают 40 кг отрубей и заливают их 0,30.-ным раствором соды с температурой40 оС . При периодическом перемешивании, экстракция продолжается 40 мин. ой Для удаления грубых взвешенных частиц экстракт пропускают через марлю5и направляют в сборник. Фермент осажо- дают путем подкисления раствора лиы- монной кислотой (в другом варианте -соляная кислота) до рН 5,7. Образовавшийся осадок отделяют от жидкостина сепараторе и высушивают в сублимационной сушилке. Выход ферментногопрепарата 7,25 с активностью 1 мгтирозина в 1 мин на 1 г препарата.15 Высокий выход препарата связан сбольшим содержанием балластных веществ, поскольку перед осаждениемфермента не проводилось центрифугирование экстракта,Формула изобретения Составитель А. БочаровРедактор Е. Месропова Техред Н,Ковалева Корректор В. Бутяга Тираж 495 Заказ 503/48 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП фПатентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 тем настаивания в диффузорах в течение 30-40 мин с последующим прокачиванием раствора соды через батарею диффузора, После центрифугирования или фильтрования экстракта фермент осаждают, подкисляя экстракт кислот до рН 5,7. Полученный осадок высуши вают в сублимационной сушилке.Использование предлагаемого спос ба позволяет получить из дешевого с рья новый ферментный препарат. При этом все отходы производства (остав шиеся после экстракции и осаждения фермента отруби и жидкость) могут и пользоваться для приготовления пита тельных сред на предприятиях Микроб ологического синтеза. Способ позволяет. более рационально и комплексно испольэовать пшеничные отруби в промышленности микробиологического син теэа,П р и м е р 1. 80 г отрубей экст О рагируют 0,8 л раствора соды 0,25- .-йой концентрации,.при интенсивном перемЕшивании (до 3000 .об/мин) в течение 3 мин при 20 С. Суспензию центрируют прч 4000 об/мин, и 400.мл цент рифугата используют для осаждения фермента. Для этого центрифугат подкисляют лимонной кислотой до рН 5,7. Протеолитические фермеьты полностью переходят в осадок. Надосадочная жид- ЗО кость не обладает ферментитивной активностью. Осадок отделяют на центрифуге и высушивают в вакуумсушильном шкафу при комнатной температуре, Выход сухого препарата 3,6, его ак- З 5 тивность 3 мг тирозина в 1 мин на 1 г препарата при использовании в качестве субстрата 0,5-ного раствора бычьего альбумина.П р и м е р 2. Экстракцию пшенич О ных отрубей проводят в диффузорах емСпособ получения протеолитическогоФермента из пшеницы путем экстрадициии осаждения, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью получения высокоактивного Ферментного препарата и расширения сырьевой базы, в качестве сырья используют пшеничные отруби, экстракцию фермента осуществляют 0,150,75-ным раствором соды, а осаждение - подкислением экстракта кислотойдо рН 5,3-6,0,Йсточники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент ФРГ Р 1792362,кл. С 07 О 7/022, опублик. 1973.2. Береш И. Д. Исследование протеолитических Ферментов проросшего зерна пшеницы . Автореф. дис . на соиск .учен. степени канд . биол . наук. Москва, 1972.