Способ выделения фермента целлюлозы из содержащего его раствора

щ 59093 У Сеюз Советсиик Социалистических Республик(5) М. Кл.С 07 6 7/О С 12 Э 13/ соеаннением заявк 33 Приоритет осударственин Совета Мннист по делам изоб и отияыткоыитетов СССРетеиияя нь 47(43) Опубликовано 251278.6 влл (45 Дата опубликования опнса 5.127 72) Авторы изобретен Нцу Мэ Рыжако В. Фениксова Г. ВВаганова,А Калуусь и В. 3) Заявител е ный научно-исследовательский биотехническиинститут НИЯ ФЕРМЕНТА ЦЕЛЛЮЛАЗЫГО ЕГО РАСТВОРА) СПОСОБ ВЫДЕЛ ИЗ СОДЕРЖИЦЕ Изобретение выделения ферме робного происхо зоваться для по паратов, наприм я к способам епаратов микможет испольочищенных прелаэы5 тносит тных н ждения учения р целлю одним из известмер лиофильно.таком способе в85 к исходнойго раствора,Цель изобретда фермента цего раствора ихранении, а такжимости препарат ых способов, наприыход Фермента при еленин составляет тивности Ферментн Для этого, согласно предлагаемому способу, выделение Фермента целлюлазы из содержащего его раствора осуществляют осаждением Фермента на сорбент с последующей Фильтрацией полученного сорбата и сушкой его одним из известных способов, например в потоке теплого воздуха. Раствор Фермента перед добавлением сорбента охлаждают, а в качестве сорбента используют измельченную целлюлозу. Целесообразно раствор перед добавлением сорбента охладить до 5-15 С, аа измельченную целлюлозу с величиной частиц 10-100 мк вводить в количестве 0,1-10 г на каждые 50 единиц активности фермента.Предлагаемый способ заключ ся в следующем. ает Известен способ выделенчя Ферментов в том числе целлюлаэ, иэ раство- ровЯ . Согласно этому способу продуцент целлюлазы фРгсЬодеРтпа ниде, Твсдодет ата бпоитп,ео 1 исяитп сапйдцщ 1 выращивают на питательных средах. Культивирование проводят прн постоянной аэрации н температуре 28-30 С в течение 2-6 суток. По окончании культивирования мицелий гриба отделяют. Полученный. Ферментный раствор концентрируют в вакууме при 28-30 С до содержания сухих веществ 20. Затем к концентрату добавляют при постоянном перемешиванин сульфат аммония и жидкие парафины. Осадок флотируют в течение 4 ч. По окончании Флотации осветленный маточный раствор сливают, ферментный осадок суспендируют и смешивают с органическим растворителем, например этанолом, Полученную смесь сепарируют, при этом флотоагент удаляется из ферментного осадка вместе с органическим растворителем. ферментный осадок высушивают ния - повышение выхоеллюлазы из содержащегого стабильности при е снижение себесто590957 3Перед выделением фермента рН Ферментного раствора доводят соляной кислотой до 3,0-б,0, затем раствор охлаждают до 5-15 ОС, в охлажденный раствор задают измельченную целлюлозу с величиной частиц 10-100 мк в количестве 0,1-10 г на каждые 50 единиц активности Фермента, Суспеиэию 5 перемешивают в течение 0,2-2 ч и отфильтровывают. Сырой сорбат высушивают в потоке теплого воздуха и измельчают. Полученный препарат обладает стабильностью при хранении. Целлюлоза 10 является субстратом, иа который действует Фермент, поэтому в процессе гидролитического действия фермента сорбент полностью разрушается, а освободившийся Фермент атакует новые порции субстрата, добавленные в реакционную смесь.П р и м е р. Продуцент целлюлазы Тсяодеаа м мде выращивают на питательной среде следующего состава, :33Стекловичный жом 5Сульфат аммония 1Однозамещенный Фос-.Форнокислый калий 0,2Вода Остальное 25Культивирование проводят при постоянном перемешивании и аэрации в течение б суток при 2 ВС. По оконйчании Ферментации отделяют мицелий фильтрацией. В Фильтрат культуральной 30 жидкости при 25 фС добавляют 15-ную соляную кислоту в количестве 0,5 л на 1 мб После перемешивания рН фильтрата составляет 4,5, Затем Фильтрат охлаждают до 5 фС и добавляют 20 кг измельченной до величины частиц 100 мк целлюлозы. Суспензию перемешивают в течение 20 мин механической мешалкой и фильтруют через капроновую ткань. Полученный сорбат высушивают на ленточной сушилке при 50 С, Выход Фермента в данном случае составил 95- 100. Активность полученного по предлагаемому способу препарата при хранении его в течение года при 20 С нео изменялась.Предлагаемый способ позволяет довести выход ферментного препарата до 95-100, исключить использование органических растворителей и нейтральных солей на осаждение фермента, испольэовать в качестве сорбента отходы целлюлозно-бумажной промышленности, повысить степень очистки Ферментного препарата и стабильность его при хранении, .а также значительно снизить его себестоимость. Формула изобретения 1. Способ выделения Фермента целлюлазы из содержащего его раствора, например культуральной жидкости, предусматривающий осаждение фермента, ,.о т л и ч а и щ и Я с я тем, что, с целью повышения выхода Фермента и его стабильности при хранении, раствор, содержащий фермент, перед осаждением охлаждают и осаждение Фермента осуществляют на сорбент, представляющий собой измельченную целлюлозу, полученную суспензию Фильтруют и отделенный при этом сорбат сушат,2, Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что раствор охлаждают до 5-15 С.в3. Способ о п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что сорбент вводят в количестве 0,1-10 г на каждые 50 единиц активности Фермента.4Сорбент по и. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что величина частиц целлюлозы составляет 10-100 мк. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1, Авторское свидетельство СССР Р 495347, кл. С 12 Э 13/10, 30.0773.Составитель М. АндрееваРедактор Л, Письман Техред С.Беца Корректор С, ШекмарЗаказ 7313/49 Тираж 517 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035 Москва, ЖРаушская наб. д, 45 филиал ППП фПатент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4