Способ получения фракций нуклеиновых кислот

о 11638599 вторсиому свидетельств олнительное к авт. свил-ву 51) М. Кл. С 07 Н 21/О 2) Заявлено 11,08 присоединением 21) 2506145/23-0вки-ГосударСтвенный комитеСовета Министров СССРно делам изобретенийи открытий(45) Дата опубликования описания 28.12,78(72) Авторизобрет опов Московский ордена Ленина и ордена ТрудовогКрасного Знамени государственный университет нм. М.В.Ломоносова Заявител 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФРАКЦИЙ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТв с Изобретение относится к усовершенствованному способу получения Фракций нуклеиновых кислот - нативных биохимических препаратов, которые могут быть использованы в биохимии, вирусологии, биофизике и медицине.Известен способ получения дезоксирибонуклеиновых кислот (ДНК) и рибонуклеиновых кислот (РНК) путем пропускания смеси нуклеиновых кислот 10 через колонку с бензоилированной диэтиламиноэтилцеллюлозой (ДЭАЭ- целлюлозой) с последующей элюцией линейным градиентом ИаСС от 0,3 до 0,65 М в смеси с градиентом диметилсульфоокси-(5 да от 0,1 до 25 об. 111 . Недостат-. каь.н этого способа являются плохое деление ДНК на Фракции и использоание дефицитного реактива - диметилульфооксида.Известен также способ получения фракций ДНК путем пропускания раствора ДНК через колонку с бензоилированной ДЭАЭ-целлюлозой (БД-целлюлозой) и25 последующей элюцией фракций в линейном градиенте ИаСс до концентрации 1 М с использованием 1,8 кофеина 2Однако при этом способе невозможно получение нативных, неденатурированных фракций ДНК, поскольку кофеин30 дестабил ынуклеиноиспользукоФеин.Целью изобретения является упрощение процесса и улучшение качестваФракций ДНК - получение нативных, неденатурированных фракций ДНК,Это достигается путем пропусканияраствора ДНК через колонку с БД-целлюлозой и последующей элюцией смесьюлинейного градиента йаС с 0,1-1,5 Мв боратном буфере и линейного градиента этанола в концентрации 0,148 об.В с дополнительной элюцией смесью раствора ИаСс в концентрации1-1,5 М в боратном буфере с диоксаном в концентрации 28-30 об.Ъ.П р и м е р, Фракционнрование ведутна колонке 0,8 х 1,5 см с БД-целлюлозой(Воейг 1 пдв ). целлюлозу предварительно промывают раствором ИаСс в концентрации 1 М 8 боратном буфере, содержащем 30 об. диоксана, а затем боратньм буфером рН 7-7,5. Эта смесь элюирует полностью как нативную, так иденатурированную ДНК. На колонкунаносят 5 оптических ед. ДНК, выделенной, например, нз крови курицы,в боратном буфере. Элюцию фракций изирует вторичные структурвых кислот, к тому же здесьется дефицитный реагент638599 Нуклеотидный состав ДНК, Фракционируемых на БД-целлюлозе (молярные проценты) идный состав, мол. 4 аИоэ довез(,как ицаА Т 28,7 43,2 19,4 26,9 46,8 21,9 8,1 21,8 21,4 23,0 23,8 1 Фракция2 ФракцияИсходная 6,21,0 2 20,8 Согласно таб и Г:Ц указывают ных фракций. Дл пользуют препар перхромизмом 35 лице, равенства А: на нативность выд я фракционирования аты ДНК с высокимлен-(ис-.иСоставитель Л.Никулинаехред К.Гаврон Корректор Л.Веселовская актор Т,Клюкин Заказ. 7222/17 ЦНИИПИ ГосУдар по 113035, Тираж 517 твенного комит елам изобретен Москва, Ж,илиал ППП фПатент, г.ужгород, ул. Проектная,проводят линейным градиентом ИаС 1 от, 0,1 до 1,5 М с одновременным наложением линейного градиента перегнанного этанола от 0,1 до 48 обОбъем градиента составляет 100 мл. Скорость злюции 1 мл/мин, Профили ,элюции регистрируют с помощью проточного УФ-денситометра Яч 1 сод 21 КВ ), 8 Для полного выделения второй фракции проводят дополнительную элюцию 5 мл смеси 1 М КаС 0 в боратном буфере, содержащем 30 об, диоксана, Далее проводят освобождение фракций от 10 22,1 22,9 26,8 28,2 45 36ормула изобретения Способ получения фракций нуклеиновых кислот путем пропускания раствора дезоксирибонуклеиновых кислот (ДНК) через колонку с бензоилированной ди" этиламиноэтилцеллюлозой с последующей элюцией Фракций в линейном градиенте ИаС 1,о т л и ч а ю щ и й с я тем,что,с целью упрощения процесса и улучшения качества Фракций ДЙК, элюорганических растворителей путем выпаривания на ротационном испарителе. Для освобождения от солей проводят диализ против дистиллированной воды и необходимого буфера или осаждают Д)1 К этаноломНуклеотидный состав ДНК определяют хроматографией гидролизатов (86 НСООН, 175 С, 30 мин) на бумаге ватман 9 1 и в тонком слое целлюлозы (ГЙЭ). Получают две фракции нативной ДНК, отличных по нуклеотидному составу. 18,9 30,6 31,1 38,3 228 27 кЗ 28 ф 0 44 ю 7 цию проводят смесью линейного градиен та концейтраций НаСС 0,1-1,5 М в бо ратном буфере и линейного градиента этанола в концентрации 0,1-48 об. с дополнительной элюцией смесью раствора ИаСГ с концентрацией 1-1,5 М вборатном буфере с диоксаном с концентрацией 28-30 об,.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:1, у,а. Ьеоа 1, Й.В.КеИ, Р.Ь.ЬпзПе 1 те; "ГмсОопаОоп оХ пис 6 ес асЫ оп Ъепхозба 1- ей - парМйоЬСа 1 ед ЗЕАЕ-сеЕЯцеозе фУ. МоЕ. ВюЮ. 26, р.537-540, 19672. й А. СаИ 1 п, А.С.МасК 1 Юсп "Ггас 0 опа- (оп от ЭИА оп ЪепхоюйЫед ЭАЕ-сеИобозе АпаС.Восйет.,63, р 442-461 (4 976 ). Подписноета Совета Министров СССРй и открытийаушская наб., д.4/5