Способ получения гиалуронидазы

Оп ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советскин Социалистицескин Республик") Заявлено 30,09,76 121) 240присоединением заявки51) М, Кл. А 61 К 35/4 3/28-13 ооударстаеннын нояоататСоввтв Мнннотров СССРоо делац нзобретеннйи открытий 3) Приоритет 3) Опублико(53) УДК 577,154 ,365 (088,8) 8,Бюллетень 3 а опубликования описания О 3 72) Авторы изобретени Марус П, Левицкий и Заявитель оматолог аесский научно-исследовательский инст ОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИАЛУРОНИДАЗЬ Изобретение относится цевтической промышлен мико-ф к получению 8 КТИВН ЫХ использо ол огическ могут быт вещес аны в медицин врстве честве ример.49 ачелюстныхх у 62 свежееэ полу 25 слюн ных препаратов.Известен способ получения гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота, включающий в себя измельчение ткани, кислотный автолиэ в течениео18-20 ч при 38 С ацетоновое осеждение, растворение осажденного фермента в дистиллированной воде, отгонку ацетон под вакуумом, стерилизацию и лиофилиэацию )1 Недостатком этого способа является то, что испольэуемье в качестве сырья для получения гиалуронидаэы семенники крупнаго рогатого скота не являются на иболее богатым источником этого ферме та, что приводит к недостаточно высокой удельной активности конечного ферментного препарата, Кроме того, использование процедуры ацетонового оса дения значительно усложняет и удорожаетнроизводство гиалуронидазных препаратови делает его опасным в пожарном отно.шении. Получаемые таким способом пренараты гиалурониаазы отличаются уаелО-ной активностьюНаиболее близким к изобретению является способ получения гиалуронидаэыпутем измельчения животного сырья,то экстрагирования солевым раствором хлористого натрия и очистки 2 ,Недостатком этого способа являетсянизкая уаельная активность получаемойгиалуронидаэы и незначительный ее вьвт 5 ход, менее 10%,Целью изобретения является повышение чистоты и выхода целетого проаукта,Эта цель достигается тем, что в качестве сырья используют подчелюстныею железы собак, а очистку производятанализом против аистиллированной водыи отстаиванием при 0-6 С в течениео3-4 нед,Предлагаемый способ позволяет существенно увеличить чистоту гиалурони дазы, значительно повысить ее выход,Получаемый препарат содержит значительно меньше балластных белков и поэтомубудет цавать значительно меньше аллергических осложнений, которые возни кают при применении других препаратов,33 Способ получения гиалурониааэь 1 путемизмельчения животного сырья, экстрагирования солевым раствором хлористого натрия и очистки, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью новьшенин чисто ты и выхода целевого продукта, в качестве сырья используют подчелюстные железы собак, а очистку проводят анализом против дистиллированной водь 1 и отстаиванием при 0-6 С в течение 5 3-4 нед,Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1, Технология мясньх и технических продуктов, Справочник, "Пищевая промышЭц ленность", М 1973, с, 516-317. 2. Гуров В; А. Производство органопрепаратов, М., Пищевая промышленностью,.1976, с, 80, 3. 62 Д 5 забитых собак различных пород непосредственно после снятия шкуры, гомогениэируют с прмощью электрической мясорубки, После этого этапа получают всего 490 г гомогената, содержащего 8554,5 Е фермента с удельной активностью 0,140.К гомогенату добавляют 2,45 л 1,5%-ного растворо хлористого натрия, Экстракцию проводят в течение 30 мин при периодическом встряхивании и 5 С.оПолученный экстракт центрифугируют при 6000 Я в течение 30 мин прио4 С, К осадку вновь прибавляют 800 мл 1,5%-ного раствора хлористого натрия и проводят повторную экстракцию, Полученные надосадочные жидкости соединяют и диализируют против дистиллированной воды в течение 24 ч при 5 С.Диализат центрифугируют в течениео30 мин при 4 С, После этого получают 3000 мл раствора гиалуронидаэь 1, содержащего 14833,2 Е фермента с удельной активностью 0,216, Выход прецарата на этом этапе составляет 173%, а чистота препарата повышается в 1,5 реза, Затем указанные выше 3000 мл нааосадочной жидкости оставляют дляеотстаивания в течение 3-4 нед прио0-6 С. Полученный гиалуронидазный пре. парат центрифугируют при 6000 ц в течение ЗО мин при 4 С.Получают 2900 мл раствора гиалуронидаэы, содержащего 14841,2 Е фермента с уаельной активностью 0,458. 56 4Составитель С, МалютинаРедактор Т, Девятко Техред Н. Бабурка , Корректор Д. МельниченкоЗаказ 5052/2 Тираж 703 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж-З 5, Раушская наба, 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4