Способ получения хлоргидрата гистидилпролинамида

ОП ИСАЙ ИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ .СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(32) 24.03.7 осударственнаий комитетСовета Ииниотров СССРоо делам иэооретенийи открытий(43) Опубликова 5,0 4. 45) Дата о публи ко ва писания 0404,7 ИностранцыДьерди Келлер и Хартмут Нидрих(ГДР) е странное предприятие Виссеншафтен дер ДДР (ГДР) 71) Заявител Академ(54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХЛОРГИДРАТГ ИСТИДИЛПРОЛИНАМИДА Изобретение относится к улучшенному способу получения хлоргидрата гистидилпролинамида - промежуточного продукта в синтезе биологически-активного соединения - тиреотропина.Известен способ получения хлоргидрата гистидилпролинамида путем конденсации карбодиимидным способом пролинамида,с бутилоксикарбонилгистидином в среде органического растворителя пои 0 С 11. Согласно известному способу необходима очистка защищенного дипептида на силикагеле, что приводит к значительной потере целевого продукта (выход "ф 58). Наиболее близким к изобретению является способ, по которому на гистидин, имеющий две различные защиты (бутилоксикарбонильную и бензильную) пд амино- и иминофункциональным группам 2, конденсируют с пролинамидом при температуре ОС с исполь зованием карбодиимидного метода. Выход защищенного дипептида в этом случае составляет 92Недостатком этого способа состоит в том, что различные защитные группы отщепляют по очереди (бутилоксикарбонильную действием Н В в уксусной кислоте, бензилгидрированием), что свяе и г и(72) Авторы изобретения михае зано с дополнительными операциями поочистке и с потерей выхода.Цель изобретения - упрощение способа получения хлоргидрата гистидилпролинамида, повышение выхода целевого продукта.Поставленная цель достигается т м,что хлоргидрат пролинамида,конденсруют в органическом растворителе с 10 активированным эфиром ди-трет-бутилоксикарбонилгистидина, процесс проводят при температуре 0-50 С.Предпочтительно в качестве активированного эфира ди-трет-бутилоксикар- ( бонилгистиднна используют л -нитрофениловый эфир и процесс проводят притемпературе 20 фС.П р и м е р, а) Гистидилпролинамиддигидрохлоридд-гис-про- КН 2 НСЕе. 2) 1,14 г (10 мМ) Н-проЯНэи 5 г (10,5 мМ)бок-гис (бок) -тт-нитрофенилового эфира (где бок-трет-бутилоксикарбонил)растворяют в 15 диметилформамида, перемешивают смесь в течение 72 ч при 25 комнатной температуре, растворитель отоняют при пониженном давлении (темератур бани не выше 45 фС).Полученный сироп растворяют в25 мл 2 н,раствора НС 1 в ледяной уксусной кислоте и перемешивают в течение .602496 4 ФОрмула изобретения аСоставитель В. ВолковаРедактор Н. Потапова Техред А.Алатырев Корректор Н.яцемирская Заказ 1761/20 Тираж 559 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 70 мин при комнатной температуре.Раствор по каплям приливают к 150 млсухого, эфира и оставляют на 3 ч. Эфирный слой отделяют декантацивй от выпавшего маслянистого осадка дипептидгидрохлорида и отбрасывают. Маслянистый осадок растирают с 50 мл эфирадо получения твердого порошка, Эфиротделяют декантацией, Операцию повторяют трижды. Затем порошок растворяют в 20 мл абсолютированного метанолаи продукт высаживают 150. мл абсолютиронанного эфира. После многократного перетирания с эфиром, описанным вышеспособом получают твердое вещество, 5которое сушат в течение 2 дней н вакууме над КОН. Выход : 2,89 г белого,сильно гигроскопического порошка (90от теоретического вы 1 ода н расчетена Н-про- ИН 2) Прн хроматографиронании на б( 1 ц 1 о 0 е Ка та:Й е т, СЬЬЧн системе м-бутанола, ледяной уксуснойкислоты, воды и уксусного эфира (1:1::1:1 по объему) продукт дает одно пятно с Я 0,17. 25Результаты определения хлора потенциометрическим титронанием 0,01 н.АцС 1;Вычислено,: 11,7 С 1,Найдено,: 11,3 С 1аЕ =-595 (С = 1 Н 20)н) Пироглютамилгистидилпролинамид,(пглю;гис-про- ИН 2ТВН)К смеси 2,86 г (8,9 мМ) Н-гис-про-И 5. НСсн 35 мл ДМФА, охлажденной доОфС, добавляют 2,5 мл (17,8 мМ) триэтиламина и 3,6 г (8,5 мМ) пентахлорфенилоного эфира пироглютаминонойкислоты. Перемешивают смесь в течение72 ч, выпавший н осадок хлоргидраттетраэтиламина отделяют фильтрованием.Маточник упаривают при пониженномдавлении при температуре 45 фССухойостаток растворяют н 5 мл смеси хлороформа и метанола н соотношении 2:1и помещают раствор н хроматографическую колонку с силикагелем (60 х 3 см), 45заполненную смесью хлороформа и метанога н таком же соотношении. (Скорость элюирования 40 мл/ч; фракциисобирают по 10 мл и исследуют с помощью тонкослойной хроматографии). Элюирование начинают смесью хлороформаи метанола в соотношении 2;1, затемэто соотношение меняют на 1;2. Фракциисодержащие. только, ТЯН, объединяют,растворитель отгоняют н вакууме, су хой остаток растворяют в 20 мл дистиллированной воды и подвергают сублимационной сушке, Фракции, содержащиепримесь других продуктов вновь подвергают хроматографированию,Хроматографию в тонком слое проводят на силикагеле в системе Хлоро-.фоРм: метанол: аммиак (концентФйро-"ванный водный раствор) (3:2,2:1 пообъему); Ку продукта 0,76.Выход 2,4 г гигроксопичного порошка, 68 н расчете на дипептидгидрохлорид,Если расчет вести на суммарнуюформУлУ С 1 е Н 2 МеО 1,5 Н 20 (389,4),полученную по результатам анализа, то,общий ныход в расчете на пролинамидсоставляет 63.Анализ:Вычислено,: С 49,30; Н 6,47;М 21,59Се Нее М О1,5 НО (389,4)Найдено,: С 49,81 у Н 6,32; Ы 21,27Угол вращения(осее = - 474 (С = 1,95 Нас)Гс" = -62 ф(С = 1, Н О) 1. Способ получения хлоргидрата гистидилпролинамида путем конденсации пролинамида с защищенным по амино- и иминогруппам гистидином в органическом растворителе, с последующим"снятием защитных групп и выделением целевого продукта, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что в качестве защищенного гистидина используют активированный эфир ди-трет-бутилоксикарбонилгистидин, процесс проводят при 0-50 С.2. Способ по п, 1, о т л и ч а мщ и й с я тем, что в качестве активированного эфира ди-трет-бутилоксикарбонилгистидина используют и -нитрофениловый эфир.3, Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что процесс проводят при 20 С.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:1. Патент США 9 3737422, кл. С 07 С 103/52, 1973.2. З,К. С)1 апу апсЕ оЦет, ЬупМеа 1 б о Ру 1 о(йцатпуЕЛЕьЪЫМрт ойЕпатпЕсЕе апс(цпмько,с сЕаее ГтацтпепЬхЕсои" Ю,йесЕ. СЛетпЕЬЬ ц,1971, 14, 6, р 481.