Способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов

Союз СоветскиХ Социалистицеооа Республик(51) М, Кл, С 12 с 1 13/00 явкис присоединением асударстеенный камитеСоеета Министроа СССРпо делам изобретенийи откро 1 тий 32) Приоритетпубликовано 15.07,74 53) УДК 663.18(088.8 юллетень2 Дата опубликования описания 18.12,7 72) Авторы изобретения С. Э. Ансберга, А. М. Ирге а и Р. Э. Страздын(71) Заяви Латвийский филиал Всесоюзно института 4 ИРЕА 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОЗИДФОСФАТО И САХАРОФОСФАТОВИзобретение относится к способам получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов и может быть использовано в различных областях биохимии и медицины.По основному авт, св,413188, известен апособ лолучения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов,путем биологического фосфорилирования фосфорилирующей смеси, состоящей из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого калия, хлористого магния, воды при рН 6,5 - 7,0 в присутствии биологического катализатора с последующей очисткой продукта.С целью повышения ферментативной активности биологического катализатора и чистоты получаемых продуктов дополнительно с экстрактом водорослей в фосфорилирующую смесь вводят плазмолизированные пивные дрожжи в соотношении 1: 2.Способ заключается в следующем.В качестве биостимуляторов - ферментов применяют экстракт водорослей, приготовленный размельчением водорослей (в соотношении сухие водоросли - вода, как 1: 3) с последующим выдерживанием в течение 3 ч при температуре 4 С.Полученный экстракт водорослей прибавляют в фосфорилирующую смесь, состоящую из сахара, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого калия и магния, пивных дрожжей, то луола, сахара и воды при 37 С и рН 6,5 - 7,0 Реакция продолжается 0,5 - 2,5 ч. Для пре кращения реакции фосфор илирования используют 10%-ный раствор трихлоруксусной кислоты при - 7 С. Для осаждения нуклеозидфосфатов применяют метиловый или этиловый спирт в 7 - 10-кратном объеме.10 Для получения сахарофосфатов в качествебиостимуляторов применяют экстракт водорослей. Препарат получают в виде кальциевых и бариевых солей.В дальнейшем способ поясняется примера ми его исполнения. Пример 1.200 мг аденозина растворяют в 7,6 мг воды. Прибавляют ИаНРО2 Н 20 (натрий 20 фосфорнокислый двухзам.) и КН."РО 4 (калийфосфорнокислыи однозам.) в процентном соотношении 3,5:1; 0,014 КС 1 (калий хлористый), 0,014 г МОС 1 6 НеО (магний хлористый), 0,4 г технического сахара, 0,6 мг то луола, 7,6 мл пивных дрожжей, экстракта зеленых водорослей, Содержание белка 20 мг.Время ферментации 3 ч при температуре36 - 38 С при рН 6,5 - 7,0, Для прекращения реакции прибавляют 2 г трихлоруксусной кис лоты при 0 С, Отцентрифугируют осадок. К436084 Составитель М. Ларина Техред Е. Борисова Корректор А, Дзесова Редактор Л. Цветкова Заказ 3322/6 Изд. Мо 1814 Тираж 456 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 фильтрату прибавляют 10-кратнь 1 й объем метилового спирта. Оосадок разделяют на ионообменной колонке.Выход: 0,156 г 96/о АТФ (аденазинтрифосфорная кислота).Пример 2,200 мг аденозин-монофосфорной кислоты растворяют в 7,6 мл воды.Прибавляют КаНРО 412 НзО (натрий фосфорнокислый двухзам.) и КНзРО (калий фосфорнокислый однозам.) в процентном отношении 2,5:0,7; 0,014 г КС 1 (калий хлористый), 0,014 г МдС 1, 6 НзО (магний хлористый), 0,4 г технического сахара, 0,6 мл толуола, 7,6 мл пивных дрожжей экстракта зеленых водорослей (приготовленного в день работы). Содержание белка 20 мг.Время фермептации 3 ч при температуре 36 - 38 С при 6,7 - 7,0 рН. Для прекращения реакции прибавляют 2 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. Отцентрифугируют осадок. К фильтрату прибавляют 10-кратный объем метилового спирта, Осадок разделяют на ионообменной колонке.Выход: 0,12 г 95/о АТФ.Пример 3.200 мг 15 ГМФ (гуанозин монофосфорная кислота) растворяют в 7,6 мл воды.Прибавля 1 от 1 х 1 агНРО 412 НО (натрий фосфорнокислый двухзам.), КН,РО 4 (калий фосфорнокислый однозам.) в процентном отношении 2,5:0,7; 0,014 г КС 1 (калий хлористый), 0,014 г МоСг 6 НзО (магний хлористый), 0,4 г технического сахара, 0,6 мл толуола, 7,6 мл пивных дрожжей, экстракта зеленых водорослей (приготовленного в день работы). Содержание белка 10 мг.Время ферментации 2.,5 - 3 ч при температуре 36 - 38 С при рН 6,5 - 7,0.Для прекращения реакции прибавляют 2 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. Осадок отделяют центрифугированием. К фильтрату прибавляют 10-кратный объем метилового спирта, Осадок разделяют на ионообменной колонке.5 Выход 0,1 г 90% ГТФ (гуанозинтрифосфорная кислота), 0,1 г 90% ГДФ (гуанозиндифосфорная кислота).П р и м е р 4. К 54 г сахара прибавляют10,5 г фосфорнокислых солей, 100 г пивных 10 дрожжей, 300 мл воды, экстракта зеленыхводорослей (пирготовленного в день работы).Содержание белка 180 мг.Раствор перемешивают 2 - 3 мин, затем выдерживают в течение 15 мин при температу ре 36 - 37, после чего добавляют 13,5 мл толуола.Время ферментации 1,0 - 1,5 ч, Процессферментации прекращают прибавлением 50 мл 50/,-ного раствора трихлоруксусной 20 кислоты, Центрифугируют, К центрифугатудобавляют 21 г Ва(СНзСОО)з и насыщенный раствор Ва(ОН) до слаборозового окрашения по фенолфталеину. Реакционную смесь центрифугируют.25 Вариевую соль дифосфата фруктозы промывают 1 раз 50%-ным спиртом, 1 раз 96-градусным спиртом. Сушат в вакууме эксикаторе.Выход: 50 г бариевой соли 1,6 - дифосфа та фруктозы. Предмет изобретенияСпособ получения нуклеозидфосфатов исахарофосфатов по авт. св. Мз 413188, отли ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышенияферм ентативной активности биологического катализатора и чистоты полученных продуктов, дополнительно с экстрактом водорослей в фосфорилирующую смесь вводят плазмоли зированные дивные дрожжи в соотношении1: 2.