Способ получения гидантоил1-валил5-ангиотензина п

О П И С А Н И Е 258314ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советсних Социалистичесних РеспубикиЗависимое от авт. свидетельства ЛЪ Кл, 12 с 1, 6/О 1 Заявлено 29 Х 111.1968 (ЛЪ 1267217/23-4с присоединением заявки М ЧПК С 07 с ПриоритетОпубликовано ОЗ.ХДата опубликовани омитет по делам изобретении и отнрытипри Совете й 1 инистроеСССР УД 1 547.964.4.0. П. Паварс, П. Я. Романовский и Г, Красного Знамени институт органиАН Латвийской ССР Авторыизобретения И, Чипенсского синтез И. А, Гравардена Трудов аявитель СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДАНТОИЛт-ВАЛ ИЛо-АНГИОТЕНЗИ НАИзобретение относится к области получениягидантоил 1-валилв-ангиотензина П - новоговысококачественного аналога природного полипептидного гормона валил 5-ангиотензина П,который применяется в медицине так же, каки его производные,Известны многочисленные способы синтезаангиотензина П и его аналогов конденсациейзащищенных пептидов соответствующей длины карбодиимидным методом с последующимудалением защитных групп, Недостаткамивсех этих способов получения биологическивысокоактивных синтетических аналогов ангиотензина являются: использование такихдорогостоящих оптически активных Х-концевых аминокислот, как 1.-аспарагиновая, Р-аспарагиновая, 1.-аспарагин и др.; сложностьзащиты трифункциональных аминокислот;опасность рацемизации и а - эД-транспептидации во время присоединения производногоаспарагиновой кислоты и удаления защитныхгрупп.Предлагается способ получения гидантоилтвалил 5-ангиотензина П конденсацией гидантоиновой кислоты с и-нитробензиловым эфиром то-нитро-аргинил-валил-тирозил-валил-гистидил-пропил-фенилаланина (все аминокислоты 1.-ряда) в присутствии 3-гидроксисукцинимида карбодиимидным методом с последующим гидрированием. Целью изобретения является разработкаупрощенного синтеза нового высокоактивного аналога ангиотензипа П с использованием де.шевых и легкодоступных исходных материа лов. Это достигается применением в качествеК-концевой аминокислоты оптически неактивной и дешевой гидантоиновой кислоты (карбамоилглицина). Гпдантоиновую кислоту с хорошим выходом и в простых условиях можно 10 получать из глицина и цианата калия. Введение остатка гидантоиновой кислоты в молекулу С-защищенного гептапептида ангиотензина П методом М,М-дициклогексилкарбодиимида с добавкой Х-гидроксисукцинимида не тре бует применения дополнительных защитныхгрупп. Отпадает также опасность рецемпзации и а-+Д-транспептидации.Для удаления защитных групп производное окгапептида гидрируется над палладие вым катализатором, и полученный гидантоилтвалилз-ангиотензин П очищается на полимерной смоле Сефадекс Ст.Предлагаемый способ получения гидан.тоил 1-валяло-ангпотензина апробирован в ла.25 бораторных условиях.П р и м е р. и-Нитробензиловый эфир гидантоил-оо-нитро - аргинил - валил - тирозил-валилгистидил-пропил-фенилаланина.0,220 г (0,2 иМ) и-нитробензилового эфира З 0 со-нитро-аргинил-валил-тирозил - валил - гисти258314 Предмет изобретения Составитель А, АкиьиоваРедактор Л, А. Ильина Текред Л, Я. Левина Корректор О, И, Усова Заказ 84913 Тираж 499 Подписное ЦЕП 4 ИПИ Комитета по делам изосретеиий и открытий при Совете Министров СССР Москва Ж-З 5, Раушскаи наб., д, 4(5 Типограсрия, пр. Сапунова, 2 дил-пролил-фенилаланина, 0,036 г 10,3,яМ) гидантоиновой кислоты и 0,069 г 10,6 лМ) К-гидроксисукцинимида растворяют в 1,0 мл сухого М,И-диметилформамида; к охлажден. ному до - 30 С раствору добавляют 0,062 г 10,3 лМ) К,К-дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают в течение 15 мин при - 30 С, затем оставляют на 18 час при комнатной температуре. После выдержки отфильтровывают выпавшую И,К-дициклогексилмочевину, к фильтрату добавляют 30 лл насыщенного раствора хлористого натрия, осадок отфильтровывают, на фильтре трижды промывают по 10 лил дистиллированной воды и сушат в вакуумном эксикаторе над пятиокисью фосфора и гидроокисью калия. Полученный продукт на хроматографической бумаге марки С Ленинградской бумажной фабрики2 в системе и-бутиловый спирт - вода - уксусная кислота (4: 5: 1) при проявлении реагентом Эрлиха, дает одно пятно с К, 0,85.Выход 0,186 г 81%), т. пл, 170 - 174 С (разлагается), 11 =18-1-2 (с 1,6; диметилформамид).Найдено, %: С 56,61; Н 6,39; Х 17,32.С 5 вНтз 01 зЬ 1,. НзО.Вычислено, %: С 56,45; Н 6,46; Х 17,95, Гидантоил 1-валилв-ангиотензин П. 0,210 г (0,18 мМ) и-нитробензилового эфира гидантоил-со-нитро-аргинил-валил-тирозилвалил-гистидил-пролил-фенилаланина гидрируют в течение 36 час над палладиевой чернью в 5 мл раствора метанол - вода - уксусная кислота (6: 1: 1) при комнатной температуре. После гидрирования катализатор отфильтровывают, растворитель упаривают в вакууме. Полученный продукт очищают на полимерной смоле Сефадекс Ссв растворе н-бутиловый спирт - вода - уксусная кислота - пиридин с,30: 24: 6: 20). Фракции, содержащие гидантоилс-валила-ангиотензин П (идентификация при помощи бумажной хроматографиив вышеуказанньсх условиях, К, 0,57), объединяют, упаривают в вакууме, растворяют в5 воде и лиофилизируют. Полученный гидантоилс-валилв-ангиотензин П сушат в вакуумном эксикаторе над пятиокисью фосфора.Выход 0,120 г (65%), т. пл. 150 - 160 С(разлагается),= - 42.+4 Ес 0,4;20%-ная уксусная кислота).Найдено, %: С 54,83; Н 6,81; Х 17,91,С 4 зНвзОтсХт 4 СНзСООННзО,Вычислено, %: С 54,98; Н 6,93; еч 17,56.Аминокислотный состав; глицин 0,93; аргинин 1,01, валин 2,08; тирозин 1,08; гистидин1,00; пролин 1,00; фенилаланин 1,22.Гедантоил 1-валилв-ангиотензин П по своейпрессорной и миотропической активности превосходит природный гормон-валилв-ангиотензин П - в 1,3 - 1,4 раза,25 1. Способ получения гидантоил 1-валил-ангиотензина П, отличающийся тем, что гидантоиновую кислоту конденсируют с п-нитробензиловым эфиром со-нитро-аргинил-валилтирозил-валил - гистидил - пропил-фенилаланиЗО на (все аминокислоты 1.-ряда) в присутствииК-гидроксисукцинимида карбодиимидным методом с последующим гидрированием образовавшегося продукта и выделением конечногопродукта известными способами,З 5 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, чтогидрирование проводят в присутствии палладиевого катализатора.3. Способ по пп. 1 и 2, отлияающиася тем,что конечный продукт выделяют с применени 40 ем сефадекса сди последующей лиофилизацией.