Способ определения активности глутаматдегидрогеназы в биологических объектах

(29) 12 43 я) С 01 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ А ВТОРСНОМУ Св ЕЛЬСТВ нТИЕСКИХ х о чно обр азец ство ь/л р (НАД эвестного Изобретохимии,охимии,я диагно глутама0,5 мл2,0 мл 0буфераопытныйют 0,1 мл а, В коНАД той ,4-0,5 трольнуе концеоль/л бмата. По проб раци арбо ие относится област вносятитного сти к клиническои быть использовано част мож ики заболеван ретения - пов ез глуи кон сле этого раэцы доб ение то ль изо льныи о ической ляности спос иоло жидкостири комнат ацией существляется сле последу темпера пос пеи ин разом.В опытный27,6-32,2 ммомидинуклеотид0,5 моль/л би10,0-10,5, со ре в течени оптической- 15 миности и ут 0,5 мл ра никотина ,0 мн 0,4 го буФера рН 3 ммоль/л образец бе ль/л раства (НАД) и карбонатно держащего мере ни 365 нм и(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНГЛУТАМАТДЕГ 2 ЩРОГЕНАЗЫ В БИОЛОГИОБЪЕКТАХ(57) Изобретение относится к бмии, в частности к клиническоймии, и может быть использованодиагностики заболеваний. Цельюретения является повышение тоспособа. Для этого в опытныйберут 0,5 мл 27,6-32,2 ммолраникотинамиддинуклеотида 2,0 мл 0,4-0,5 моль/л бикарбонатного буфера рН 10,0-10,5, содержащего 63 ммоль/л глутамата. В контрольную пробу вносят 0,5 мл НАД той же концентрации и 2,0 мл 0,4-0,5 моль/л бикарбонатного буфера без глутамата. После чего в опытный и контрольный образцы добавляют 0,1 мл биологической жидкости с последующей инкубацией при комнатной температуре в течение 10- 15 мин и измерением оптической плотности при 365 нм. Активность ГДГ определяют по приросту восстановленного никотинамиддинуклеотида (НАДН). За единицу активности принимают количество Фермента, которое эа 1 мин уве- аФ личивает содержание НАДН в пробе на 1 мкмоль. Результат рассчитывают на 1 л сыворотку крови и выражают в ЕД, Способ прост в исполнении, не требу- ( ет болыпих объемов исследуемой биологической жидкости, в два раза точнее Б П р и м е р 1. В сыворотке кровиольного определяли активность глутаатдегидрогенаэы (ГДГ). Для этого в15 73419 Составитель Н.ВалееваТехред М,ХоданичКорректор М.МаксимишинецРедактор Н.Яцола Заказ 1641 Тираж 511 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям н открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Проиэводственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 опытную пробу вводили 0,5 мп НАД с концентрацией 27,6 ммоль/л, 2,0 мл 0,5 моль/л, буфера рН 10,0 с глутаматом ( до конечной концентрации в пробе 5 0,13 ммоль. В контрольный образец вносили те же компоненты, кроме глутамата. Затем в обе пробы вводили по 0,1 мл сыворотки крови, инкубировали при комнатной температуре в те О чение 10 мин и определяли оптическую плотность раствора при 365 нм, Из по" Казаний экстинкции опыта вычитали по" казакия контроля и рассчитывали активНость ГДГ по приросту восстановленно го никотинамиддинуклеотида (НАДН). За единицу активности принимали количество фермента, которое за 1 мин увеличивало содержание НАДН в пробе на 1 мкмоль. Результат рассчитывали 2 О на 1.л сыворотки крови ивыражали в единицах (ЕД), Полученная активность ГДГ составила 10,7 ЕД.П р и м е р 2. Активность ГДГ определяли в сыворотке крови больного М.25 Для этого в опытный образец вносили 0,5 мл НАД в концентрации 32,2 ммоль/л и 2,0 мл 0,4 моль/л бикарбонатного буфера рН 10,5 с глутаматом в концентрации 63 ммоль/л. В контрольном об разце в инкубационную смесь не вносили глутамат. После чего в опытную и контрольную пробы вносили по О, 1 мл сыворотки крови и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 минОптическую плотность измеряли при 365 нм. Активность фермента составила 11,2 ЕД.Предлагаемый способ прост в исполнении, может быть использован для определения активности фермента в небольших объемах биологической жидкости, обладает высокой точностью (в два раза точнее известного способа), что позволяет выявить активность неизвестной ранее множественной формы Фермента нервной системы и проводить диагностику ряда заболеваний, в том числе прогнозировать течения неврозов. ф о.р м у л а и з о б р е т е н и я Способ определения активности глутаматдегидрогеназы в биологических объектах путем введения в инкубационную смесь раствора буфера, субстрата, никотинамиддинуклеотида с последующей инкубацией при комнатной температуре и определением оптической плотности раствора, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, в инкубационную смесь добавляют 0,4-0,5 моль/л бикарбонатного буферного раствора рН 10,0-10,5, никотинамиддинуклеотид в концентрации 27,6-32,2 ммоль/л, а инкубацию проводят в течение 10-15 мин.