N-нитрозо-n-(бэта-хлорэтил)-карбамоилпептиды или их хлоргидраты, обладающие противоопухолевой активностью

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 9( ЯОК 37 02 07 К 5 10 5 ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ еи)уя-Ргоа 1-ИН о можетЦель -быт соз спользовано в медици пептий соот илизоламина1 е вещетью веланоаген табл ем известные ы - хлорозот тостатическин или ВСИ 1.",ОСУДАРСТНЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Хиноин Дьедьсер еш Ведьесети Термекек Дьяра РТ (НБ)(57) Изобретение касается замещенных пептидов, в частности И-нитро -хлорэтил)карбамоилпептидов о формулы ГС 1 СН СН -И(Ю)-С(О)М где п = 1 и К - Ьуя-Рго-Ча 1-НН Тгр-Ьец-Ы-Аяр-РЬе-МН, Рго-Ча С 1 У-Ьуя-Рго-Ча 1-ЫН Тгр-С 1 у-Ча 1-БН ; и = 2, В. = Ьуя-Ргоили их хлоргидратов, обладающих тивоопухолевой активностью, ч дание новых более активных дов. Их синтез ведут обработк ветствующего ацетата Й-хлорэт цианатом в присутствии триэти в среде диметилформамида, Нов ства обладают лучшей активнос отношении лейкомии Ь 1210, ам тических меланом, легочных опуП.Я, Ж Лечение Соединение оза, мг/кг Дни 50 1 х 12,51 х 50 87 1 х 1331 х 25 40 44 33 45 80 250 110 Внутрибрюшинно, применение в отмеченный день после трансплантации.Время выживания обра- Время выживания необботанных мьппей - работанных мьппейВремя выживания необработанныхмьппей х 100. Выживание на 60-й день после. трансплантации. Т аблица 6 В -меланома Опухоль Льюиса Доза,мг/кг Средняя дли ЬЯ, 7 дельностьвыживания,дни Средняя дли Ы, 7тельность выживания, дни 21 О 26,0 Контроль Соединение 11100 22,0 31,5 21,5 27,0 5 х 20 29 35,0 ВСВУ 36 28,5 25,0 42,0 20 34,0 5 х 4 19 1 х 251 х 100,Зх 10Зх 504 х 10 1; 5; 9 1; 5; 9 1;2;5;61414851 21 22 ЬЬТ ение 1 ЬЯ,% Ь 8,% редняя в иемоств,онтроль 26,21,2 35 5,0 36 еЕЬ еличение выживаемос опухоли, % ЭФФект ингибирован НТ 50 мг/к Соединение формулы 11 40 Соединение формулы 57 НТ 17оединение 4 юрмулы 11НТ 22 соединение формулы мг/кг мг/кг 8 9 Испытуемое соединение оза внутрибр шинн опс 1 гр-Ьеи,210 ,280 10 Волко оставител едактор Н. Яцол хред И.Ходани Шек ор т Тираж 348 ПодпиГосударственного комитета Слам изобретений и открытийосква, Ж, Раушская наб.,Заказ 3845/26 а сноР по 113035Изобретение относится к новым биологически активным соединениям И-нитрозо-М-(бэта-хлорэтил)карбамоилпептидам или их хлоргидратам, обладающимпротивоопухолевой активностью, кото 5рые могут найти применение в медицине,Цель изобретения - поиск новыхпроизводных пептидной структуры,обладающих более высокой противоопухолевой активностью,П р и м е р 1, Альфа, эпсилон-бис-(бэта-хлорэтилкарбамоил)лизил, пролилвалинамид, 15736 г (1,6 ммоль) лизилпролилвалинамиддиацетата растворяют в 8 млдиметилформамида и раствор охлаждаютодо 0 С. Далее в раствор по каплямдобавляют 0,46 мл (3,2 ммоль) триэтил.20, амина и 0,34 мл (4 ммоль) бета-хлор; этилизоцианата, Реакционную смесьперемешивают при 0 С в течение 4 ч,после чего ему дают постоять и перегоняют в вакууме, Остаток смешивают с водой, выпавший в осадок продукт отделяют Фильтрованием и сушат,Таким образом получают 480 мг указанного соединения. Выход 54%; т. пл.183-185 С; Н= 0,75 (смесь н-бута- ЗОиола с пиридином, ледяной уксуснойкислотой и водой в соотношении 4;1:1;:1; тонкослойная хроматографическаяобработка с использованием Кизельгеля С).Вычислено, % С 4782; Н 7,11;И 17,74; С 1 12,83.С 1 НЗЭ БОС 11(552,5),Найдено, %; С 47,90; Н 7,60;И 17,41; С 1 13,26.Н= 0,82 (этилацетат, пиридинледяная уксусная кислота и вода всоотношении 60:20:б:11); В.г = 0,72(бутанол, ледяная уксусная кислота ивода в соотношении 41:1) .45П р и м е р 2Альфа, эпсилон-бис-И-нитрозо-М-(бета-хлорэтил).-,карбамоил 1 лизилпролилвалинамид,460 мг (1 ммоль) лизилпролилвалинамиддиацетата растворяют в 6 мпдиметилформамида, после чего в приготовленный раствор добавляют 0,28 мл(2 ммоль) И-нитрозо-бета-хпорэтилкарбамоил-п-нитрофенола, а затем270 мг (2 ммоль) 1-оксибензотриазола, По истечении 2 ч диметилформамидотгоняют в вакууме, остаток растворяют в 30 мп этилацетата и экстрагируют водои Этилацетатную Фазу сушат,упаривают. Остаток обрабатывают безводным диэтиловым эфиром, затем диэтиловый эфир декантируют и масловысушивают. Полученную таким образомтвердую пену чистят в колонке, заполненной силикагелем. Фракции собираюти растворитель отгоняют в вакууме,Остаток растирают в порошок в присутствии безводного петролейного эфираи отфильтровывают. Таким образомполучают 312 мг указанного соединения,Выход 517.К указанного соединения 0,80(смесь метанола с этилацетатом в соотношении 1 ф 3; тонкослойная хроматографическая обработка с использованием Кизельгеля С), Н = О,9 (бутанол, ледяная уксусная кислота и водав соотношении 4:1:1),К исходного продукта 0,88 (смесьэтилацетата с пиридином, ледяной уксусной кислотой и водой в соотношении240;20:6:11; тонкослойная хроматограФическая обработка с использованиемКизельгеля С).Г = 185 ( Б-нитрозогруппа, 397 нм).Вычислено, %1 С 1 11,59; И 20,61;С 43,17; Н 6,05.С Н 1 ИО уС 1 (611,51) еНайдено, %: С 1 11,18; Х 20.07;С 43,21; Н 6,02.П р и м е р 3. Альфа, эпсилон-.-бис-И-нитрозо-Н-(бета-хлорэтил).карбамоил-лизилпролилвалинаиид.К 552 мг (1 ммоль) альфа, эпсилон-бис-(бета-хлорэтилкарбамоил)лизилпролилвалинамида добавляют 10 мл997-ной муравьиной кислоты, послечего в течение 1 ч в эту смесь добавляют по каплям раствор 500 мгнитрита натрия и 3 мл воды. На сле"дующий день реакционную смесь выпаривают в вакууме. Остаток обрабатываютводой, фильтруют и промывают водой.Таким образом получают 460 мг указанного соединения. Выход 757,Е = 080 (смесь метанола с этилацетатом в соотношении 1:3, тонкослойная хроматографическая обработка с использованием Кизельгеля С).184 (И-нитрозогруппа, 39 нм).Вычислено, %; С 1 11,59; И 20,61; С 43,17; Н 6,05.С Н ИОС 1 (611,51) .Найдено, 7; С 1 11,41; И 20,10; С 43,16; Н 6,04.а1414851 Е = 0,10 (смесь н-бутанола с ледянои уксусной кислотой и водой в со- ВО отношении 4:1:1, продукт Кизельгель С); К = 0,64 (этилацетат, пиридин, " ледяная уксусная кислота и вода в соотношении 60:40:12:22); К = 0,1 (метанол и этилацетат в соотношении ЗФ 1)Вычислено,.; С 1 13,84; И 19,13; С 44,49; Н 6,83.С 1 НИОС 1 1 (512,44) . Поскольку в диапазоне нитрозогруппы имеет место поглощение самого пептпда, в данном примере нитрозную группу определяют по методу Лоо и Диона. Пример 4,а) Альфа-И-нитрозо-И-(бета-хпорэтил)-эпсилон-трет-бутилоксикарбониллизнлпролилвалинамид,614 мг (1 ммоль) эпсилон-трет-буток сикарб амоиллизилпр олилв алин амиддозилата растворяют в 10 мл безводногодиметилфорамида, после чего в приготовленный раствор добавляют 0,14 мл(1 ммоль) 1-оксибензотриазола и реакцию проводят аналогично изложенномув примере 2. Таким образом получают250 мг указанного соединения, Выход43 ,К укаэанного соединения 0,90(смесь хлороформа с метанолом в соотношении 9;1, тонкослойная хроматограФическая обработка с использованиемКизельгеля С); КО 92 (этилацетат,пиридин, ледяная уксусная кислота ивода в соотнощении 60:20,6: 11); Кгисходного соединения 0,80 (сиесьИ"бутанола с ледяной уксусной кислотой и водой в соотношении 41: 1; тонкослойная хроиатографическая обработка с использованием Киэельгеля О).Е 90 (И-нитрозогруппа, 39 ни).Вычислено, Е: С 1 6,15; И 17,02.С 4 Н 4 И 10 С 1 (576,10)Найдено, Х: С 1 600, И 16,61.б) Альфа-(И-нитроэо-И-(бета"хлорэтил) -карбаиоил -лиэилпролилвалин- Збамидгидрохлорид.200 иг альфа-(И-нитрозо-п-(бетахлорэтил)карбаиоил)-эпсилон-трет-бутоксикарбониллизилпролилвалинаиндасмешивают с 6 мл 0,17 н,раствора муравьинойкислоты в соляной кислоте ираствору дают постоять в течение 5 минс последующим его выпариванием. Остаток растворяют в воде и экстрагируютэтилацетатом. Водный слой лиофнлизируют. Таким образом получают 140 мгуказанного соединения. 4Найдено, %: С 1 13,72; И 18,81;С 44,51; Н 6,80.Е = 88 (Ч-нитрозогруппа, 397 нм).П р и и е р 5. Бета-хлорэтилкарбамаилтриптофилнорлейцил-альфа-аспарагилфенилаланинамид,615 мг (1 ммоль) триптофилнорлейцил-альфа-аспарагилфенилаланинамидгидрохлорида растворяют в 6 млбезводного диметилформамида, послечего в приготовленный раствор добавляют О, 14 мл (11 ммоль) триэтиламинаи 0,1 мл (1,2 ммоль) бета-хлорэтилизоцинатаи дальнейшую часть реакциипроводят аналогично изложенноиу впримере 1. Таким образом получают600 мг указанного соединения. Выход883. Т.пл. 201-202 С.Вычислено, Х: С 1 518; И 14,33;С 57,88; Н 6,14СЗН 4 И 7 ОС 1 (68419) вНайдено, Х: С 1 4,94; И 13,78;С 57,86; Н 6,12.В. = 070 (бутанол, пиридин, ледяная уксусная кислота и вода в соотношении 4 з 1 з 1:1) р Ку - .0,69 (этилацетат,пиридин, ледяная уксусная кислота ивода в соотношении 60:20:6:11).П р и и е р 6. И-йитрозо-И-(бета-хлорэтил)карбзиоийтриптофилнорлейцил-альфа-аспарагилфенщпаланинаиид.684 иг (1 ииоль) бета-.хпорэтилкарбамоил-триптофилнорлейцил-альфааспарагилфеиилаланинаиида используютдля реакции с раствором 300 иг нитрита натрия и 2 мл сложного эфира аналогично изложенному в примере 3. Такйи образом попучают 605 аг укаэанного соединения, Выход 353.Ву 0,80 (смесь н-бутаиола с,ледяной уксусной кислотой и водой в соотношении 4:1;1, Еизельгель С); К0,42 (этилацетат, пиридин, ледянаяуксусная кислота и вода в соотношении 120:20:б:11) К 0,72 (бутанол,пиридин, ледяная уксусная кислотаи вода в соотношении 4:1:1:1).Вычислено,: С 1 4 97; Я 1571;ИО 420 э С 55,52 Н 5 ь 5С ЗН И 110 вС 1 (713 20)Найдено,: С 4,73 р И 15,28ИО 3,87; С 55,50; Н 5,77.(1,5 ммоль) 1-оксибензотриазола, Таким образом получают 800 мг указанного соединения. Выход 757К= О, 80 (смесь н -бутанола, ледя Вной уксусной кислоты и воды в соотношении 4 ф 1;1, Кизельгель С).Вычислено, 7: С 1 4,58; И 15,32;Ю 3,92; С 55,52; Н 5,75.СН,ИО 8 С 1 (713,20).Найдено, 7; С 1 4,58; Б 1532;ИО 3,92; С 55,51; Н 5,73,Нитрозную группу определяют по методу, указанному в примере 6,П р и м е р 8. И-Нитрозо-И-(бэта я-хлорэтил)карбамоилтриптофиллейцил-альфа-аспарагилфенилаланинамид (111).а) 633 мг (1 ммоль) триптофиллейцил-альфа-аспарагил-бета-трет-бутилэфир)фенилаланинамида дают постоятьв 6 мл 2 н.раствора этилацетата всоляной кислоте, после чего добавляют в смесь диэтилового эфира, выпавшие в осадок кристаллы отфильтровывают и промывают диэтиловым эфиром. Врезультате получают 590 мг (выход93 ) указанного продукта,К = 0,70 (бутанол, пиридин, ледяная уксусная кислота. и вода в соотношении 4:1:1:1); К = 0,74 (смесьбутанола с пиридином, ледяной уксусной кислотой и водой в соотношении30:20:6:24; Кизельгель С); К = 0,66(бутанол, ледяная уксусная кйслотаи вода в соотношении 4:1;1)3 К л =.450,10 (этилацетат, пиридин, ледянаяуксусная кислота и вода в соотношении 12020:6:11)Ь) 921 мг (1,5 ммоль) триптофиллейцил-альфа-аспарагилфенилаланинамидгидрохлорида растворяют в 10 млабсолютированного диметилформамида,затем добавляют 373 мг (1,5 ммоль)И-нитрозо-бета-хлорэтилкарбамоил-Моксисукцинимида и 0,42 мл (3 ммоль)триэтиламина, После перемешиванияв течение 15 мин диметилформамид отгоняют в вакууме, Остаток растираютв воде, отфильтровывают и промывают водой, В результате получают 980 мг(выход 927) укаэанного продукта.К = 0,69 (смесь этилацетата спиридином, ледяной уксусной кислотойи водой в соотношении 30;20:6:11,Кизельгель С), К= О, 42 (этилацетат,пиридин, ледяная уксусная кислотаи вода в соотношении 120;20:6:11);К = 0,72 (бутанол, пиридил, ледянаяуксусная кислота и вода в соотношении 4;11:1).Вычислено, Й: С 1 4,97; И 15,71;Ю 4,20; С 55,52; Н 5,75,С 1 НИ 08 С 1 (713,20) .Найдено, 7.: С 4,58; М 15,32;Ю 3,95; С 55,49; Н 5,78.Пример 9,а) Альфа-Б-нитроэо-Б- (бета, хлор"этил)карбамоил-эпсилон-трет-бутилоксикарбонилглициллизилпролилвалинамид,1,30 мг (2,6 ммоль) эпсилон-третбутилоксикарбонилглициллизилпролилвалинамида растворяют в 13 мл абсолютированного диметилформамида, а затем в приготовленный раствор добавляют 650 мг (2,6 ммоль) И-нитрозо-бета-хлорэтилкарбамоил-И-оксисукцинимида и 0,36 мл (2,6 ммоль) триэтиламина. После перемешивания в течение15 мин реакционную смесь выпариваютв вакууме, Остаток растворяют в этилацетате и экстрагируют водой. Этилацетатную фазу сушат и выпаривают. Врезультате получают 1,29 мг (Выход803) ук аз анн ог о пр одук та,К = 0,87. (этилацетат, пиридинледяная уксусная кислота и вода всоотношении 60:20:6:11); Ку = 0,82(этилацетат, пиридин, ледяная уксусная кислота и вода в соотношении 60;:40:12:22),Вычислено, 7.; С 1 12,45; И 19,67;С 42,24; Н 6,67.СНБ 8 ОС 1 ъ (569,59).Найдено, 7: С 1 12 01; И 18,87;С 42,22; Н 6,69.Е = 84 (Н-нитрозная группа,396 нм) а 20П р и м е р 10, И-Нитрозо-И-(В-хторэтил) карбамоилпролилвалинамид,1,37 г (5 ммоль) пролилвалинамидацетата суспендируют в 15 мл безводного диметилформамида и добавляют при 25перемешивании и охлаждении снегом1,4 мл (10 ммоль) триэтиламина и1,25 г (5 ммоль) сложного И-нитрозо-Н-(В-хлорэтил)карбаминовая кислота-И -оксисукцинимидного эфира. Послеперемешивания в течение 15 мин при .0 С реакционную смесь разбавляют ледяной водой и осажденное соединениеотфильтровывают и промывают холоднойводой на фильтре. Продукт сушат в35эксикаторе над РО,Выход 0,91 г (537).К. = 0,8 (смесь хлороформа и метанола в соотношении 8:2, Кизельгель С).Т. пл. 130 С (разложение) . ( а( ) 849,04 (с = 1, МеОН); ( ф) - 54,25(с = 1, МеОН),Вычислено, 7: С 44,85; Н 6,33;С 1 10,19; И 20,13.С ННОС 1 (347,8).Найдено, 7: С 144,83; Н 6,35;:С 1 9 ф 86; Б 19176Е = 88 (400 нм).П р и м е р 11.-Б-Нитрозо-И-(В-хлорэтил) карбамоил-Я-трет-бутилоксикарбонилтриптофилглициллизил 50пр олилв алин амид.К смешанному раствору из 1,2 г(1,74 ммоль) трет-бутилоксикарбонилтриптофилглициллизилпролилвалинамидаи 10 мл безводного диметилформамидадобавляют при ОфС 0,24 мл 1,74 (ммоль) 55триэтиламина и 400 мг (1,6 ммоль) Б-нитрозо-Б-(В-хлорэтйл)карбамоил-Б-оксисукцинимида. Через 0,5 ч реакционную смесь выпаривают, Остаток растворяют в этилацетате и экстрагируютводой. Органический слой высушиваютнад безводным сульфатом натрия и выпаривают, Выход 1,2 г (857.).К = 0,25 (смесь хлороформа иметанола в соотношении 9 1).Вычислено, 7. И 17 09; С 1 4,33.СНюО,С 1 (819,37) .Найдено, 7: И 16,72; С 1 4,01.П р и м е р 12.-(И-Нитрозо-И-(В-хлорэтил) карбамоил) триптофилглициллизилпролилв алинамидацетат,819 мг (1 ммоль) Ы-(И-нитрозо-И)-В-хлорэтил)-карбамоил-трет-бутилоксикарбонилтриптофилглициллизилпролилвалинамида дают отстояться в течение5 мин в 10 мл 0,12 н, муравьинойкислоты с хлористоводородной кислотой, затем раствор упаривают в вакууме, Остаток растворяют в воде, экстрагируют этилацетатом, Водную фазулиофилизируют, затем лиофилизированный продукт очищают хроматографиейна колонке, заполненной силикагелемв соотношении 60:20:б:11 смесью изэтилацетата, пиридина, ледяной уксусной кислоты и воды. После упариванияэлюентной смеси, остаток растворяютв воде и лифолизируют, Таким образомполучают 480 мг (637) соли.К = 0,25 (смесь этилацетата, пиридина, ледяной уксусной кислоты иводы в соотношении 60:20:6:11).Вычислено, 7: С 52,36; Н 6,54;М 17,97; С 1 4,55.С НБ ОС 1 (779,27).Найдено, 7: С 52,34; Н 6,54;Н 17,00; С 1 4,46.П р и м е р 13. с-И-Нитрозо-Б-(В-хлорэтил)карбамоил-Е-трет-бутилоксикарбониллизилтриптофиллейциласпарагилфенилаланинамид,1,4 г (1,73 ммоль) Е-трет-бутилоксикарбониллизилтрипФофиллейциласпарагилфенилаланинамида растворяютв 15 мл безводного диметилформамидапри 0 С, В процессе перемешивания ксмеси добавляют 0,24 мл (1,73 ммоль)триэтиламина и 433 мг (1,73 ммоль)И-нитрозо-М-(В-хлорэтил)карбамоил-И-оксисукцинимида. После перемешиванияв течение 1,5 ч реакционную смесь выпаривают в вакууме, остаток растираютв порошок с водой и фильтруют, Сыройпродукт растворяют в этаноле, осаждают водой и фильтруют. Таким образомполучают 1,8 г продукта, Выход 677 аа1 О дукт растирают в порошок со смесьюпростого эфира и петролейного эфира иФильтруют. Получают 360 мг (58%) продукта, эквивалентного конечному продукту примера 4П р и м е р 17. Осуществляют аналогично примеру 4, но вместо И-нитрозо-(В-хлорэтил)-карбамоил-и-нитрофенола используют (И-нитрозо-В-хлорэтилкарбамоил)-М-оксифталевый имид,таким образом получают 400 мг (64%)конечного продукта, эквивалентногоконечному продукту примера 4,П ри м е р 18. Осуществляют аналогично примеру 4, но вместо М-нитрозо-(й-хлорэтил)карбамоил-и-нитрофенола используют (Н-нитрозо-В-хлорэтилкарбамоил)пентафторфенол. Получают 510 мг (83%) конечного продукта,эквивалентного конечному продуктупримера 4.Проводят биологические испытанияпредлагаемых соединений, при этомпроводят сравнение с известчыми цитостатическими агентами; 1,3-бис-(хлорозотицин),Фармакологическая активность предлагаемых соединений демонстрируетсярезультатами испытаний с использованием в качестве испытуемых соединений О/,й-бис-Б-нитрозо-Б-(й-хлорэтил)карбамоил лизилпролилвалинамида(соединение 1) и Ы -И-нитрозо-И;(В-хлорэтил)карбамоиллизилпролилвалинамид гйдрохлорида соединение 11).В табл. 1 показано влияние соединений 1 и 11 на внутрибрюшинно имплантированную мышам Ь 1210-лейкомию,Соединения 1 и 11 более активны,чемВСАТ и хлорозотицин, используемые вкачестве сравнительных веществ,Опухолевый прививочный материал10 асцитных клеток, внутрибрюшинно.Животное-хозяин - самки мьппей видаСЭР, Лечение 3 дня. Токсичность -на 5-й день 4/6 остаются в живых,Критерий - Т/С 7, 125 - значительнаяпротивоопухолевая активность,В табл. 2 приведены фармакологические свойства соединения 11 (токсическая доза 133-200 мг/кг внутрибрюшинно; вещество применяют намышах, зараженных Ь 1210),Приведенные данные доказывают,чтоновые пептидные производные соепине 1414851В. = 0,83 (смесь бутанола, пиридина, ледяной уксусной кислоты и водыв соотношении 4: 1: 1: 1) .Вычислено, %: Б 14,87; С 1 3,76.С Н,И,О С 1 (491,50)Найдено, %: И 14,74; С 1 4,12.П р и м е р 14. 1 -1 И-Нитрозо-И-(В-хлорэтил) карбамоиллизилтриптофиллейциласпарагилфенилаланинамид,10941 мг (1 ммоль) -Б-нитрозо-И-(й-хлорэтил) карбамоил 3- Е -трет-бутилоксикарбониллизилтриптофиллейциласпарагилфениланинамида растворяют в10 мл 0,12 н, муравьиной кислоты сХлористоводородной кислотой. Растворвыпаривают в вакууме через 10 мин.Остаток очищают на колонке с силикагалем со смесью метанола, этилацетатаводы в соотношении 2,5:1;0,5. Таким 20образом получают 580 мг (69%) указанКого продукта,К = 0,66 (смесь бутанола, пирндина, ледяной уксусной кислоты и воды всоотношении 4:1;1:1). 26Вычислено, %; С 55,62; Н 16,30;М 16,64; С 1 4,20.С Н И О.С 1 (841,36) .Найдено, %; С 55,64; Н 6,28;И 15,65; С 1 3,96.ЗОП р и м е р 15. с(-И-Нитрозо-И(В-хлорэтил)карбамоил 1- Г-трет-бутилоксикарбониллизилпролилвалинамид(используя И-нитрозо-(В-хлорэтил)арбамоил-И-оксисукцинимид).К раствору из 614 мг (1 ммоль)Н-лиз (БОК)-провал-ЫН-тозилата и 10,млбезводного диметилформамида добавляМт 0,28 мл (2 ммоль) триэтиламина и237 г (0,95 ммоль) М-нитрозо-(Я-хлорэтил)карбамоил-И-оксисукцинимида,После перемешивания в течение 30 минраствор упаривают в вакууме, Остатокрастворяют в этилацетате и дважцыэкстрагируют водой. Этилацетатную фа 45зу сушат над сульфатом натрия и упаривают в вакууме, Получают 526 мг(86%) продукта.К = 0,92 (смесь этилацетата, пиридина, ледяной уксусной кислоты иводы в соотношении 60:20:6;11),Найдено, %: М 16,63; С 1 6,02,П р и м е р 16. Осуществляют аналогично примеру 4 с той разницей, чтовместо Б-нитрозо-(В-хлорэтил)карбамо55ил-и-нитрофенола используютИ-нитрозо-(й-хлорэтил)карбамоилпентахлорфенол и раствор экстрагируют насыщенным ИаНСО, вместо воды, Конечный про 1414851В табл. 5 представлено влияниесоединения 11 на выживание мышей,зараженных лейкемией Ь 1210. Влияние соединения 11 на твердую опухоль (табл. 6), Б - опухоль (подкожно). Дозировка 100 мг/кг или 5 х х 20 мг/кг внутрибрюшинно (лечение начинают на следующий день после трансплантации) оказалась неэффективной.Легочная меланома Льюиса и мела- нома Вц -опухоли, дающие на мышах метастазы (.ш.). Внутрибрюшинное применение, начиная со дня, следующего после трансплантации.Опухолевые ксенографты человека.НТ 18 (амеланотическая меланома),Контроль - среднеезначение ТД100 мг/кг 22,5 дн,50,0 дн.(Д1,0) 5 х 20 мг/кг 56,25НТ 22 (слизистая карценома толстойкишки).Контроль 17,0 дн.100 мг/кг 24,0 дн,(0,29)5 х 20 мг/кг 21,5 дн. (0,26)НТ 17 (аденоматоэная карценоматолстой кишки).Контроль 16,5 дн.100 мг/кг 14,75 дн. (0,0)5 х 20 мг/кг 5,0 (00)Время лечения; при достижении объема опухоли примерно 8 мм . Метод лечения: внутрибрюшинно,ТД = удвоение объема опухоли,ТД ке-ТД КОСЭ = задержка роста =тд ф где Ке - обработанные, КО - контроль,Влияние пептидо-нитрозомочевиновых производных на рост экспериментальных твердых опухолей и опухолевых ксенографтов человека. ния 1 и 11 значительно более активны и менее токсичны, чем ВСИУ и хлорозотицин, используемые в качестве контрольных агентовИсследование связи между эффектом и химической структурой соединений, аналогичных соединению 11, на мышах, зараженных лейкемией Е 1210, приведено в табл. 3.Влияние соединения 11 в комбинации с фармацевтическими агентами на мышей, зараженных лейкомией Е 1210, приведено в табл. 4. Изученные соединения; И-нитрозо-И-(В-хлорэтил)-карбамоиллизилпролилвалинамид НС 1; И-нитрозо-И-(Я-хлор 5этил)карбамоилглициллизилпролилвалинамид НС 1.Объекты: экспериментальная твердаяопухоль: мышиная опухоль Б 180, легочная опухоль Льюиса и мышиная меланома Вб, опухолевые ксенографтычеловека; амеланотическая меланомаНТ 18, колоректальная аденокарциномаНТ 17, колоректальная аденокарциномаНТ 22 (слизистая), панкрезтическаякарцинома НТ 27,Эксперименты на экспериментальныхтвердых опухолях Б 180,Опухоль разрезают на мелкие кусочки и эти кусочки подкожно трансплантируют под шкурку спины мышей разновидности СЕРР, Лечение начинают содня следующего после дня трансплантации, Размер опухолей измеряют кронциркулем, а объем рассчитывали по их диа 25 метру. Соединение 11 (внутрибрюшинно)применяемое с дозами 100 мг/кг или5 х 20 мг/кг (одна доза в пять дней) неоказывает влияния на рост опухоли.Легочная опухоль Льюиса.З 0 Эту епухоль трансплантируют в виде клеточной суспензии в бедреннуюмьппцу инбридных мьппей С 5781 при числе клеток 10 . Растущая опухоль индуцирует регулярные метастазы легких.35Лечение начинают в день, следующийпосле дня трансплантации, Наблюдаютвыживаемость обработанных и контрольных животных.В -меланома.Опухоль транспзтантируют под шкУРУ40спины инбридных мьппей С 5781 в видекусочков опухолей, Рост опухоли индуцирует метастазы легких, Лечениеи оценку действия проводят методом,45 аналогичным описанному для случаялегочной опухоли Льюиса.Результаты, относящиеся к ЕЕТи В -меланомам приведены в табл. 7.Согласно полученным результатам50 соединение 11 умеренно удлиняет время жизни животных включая ЕЕТ и Вбмеланомы. Степень эффекта ингибирования практически равна эффектуВСАТ,Изучение опухолевых ксенографтовчеловека.Кусочки серийно трансплантируемыхопухолей (взрослая тимектомия, полное облучение с 8,5 Су, перестройкаОбъем обработан-ных" опухолей к 21-му дню - объем обработанной Эффект ингибирования .100 " Од" х 1007 опухоли Объем контрольной опухоли на 21-й день - объем контрольной опухоли в 0 день 30(1003 означает полное ингибирование роста опухоли). 35Результаты экспериментов показывают, что пептидонитрозомочевинные производные значительно ингибируют рост амеланотических меланом,тогда как их влияние на рост опухолей тол стой кишки и поджелудочной железы несколько ниже (табл. 8),Опухоль-ингибирующий эффект И-нитрозо-(й-хлорэтил)карбамоилпептидных 4фрагментов на лейкемию мьппей Ь 1210приведен в табл. 9.Н=С 1 - СН 2 СН 2 И-С=О ,10 НЦ,- не определялась. 50 мозгового вещества с помощью 510сингенных медулярных клеток) трансплантируют под шкурку спины искусственно иммунодепрессированных мышейразновидности СВА/Са,5Внутрибрюшинное введение лекарст:ва начинают тогда, когда опухоли дос,тигают диаметра 0,7"1,0 см и можнонаблюдать их прогрессирующий рост.Диаметры опухолей измеряют кронцирку/лем и их объем рассчитывают на осно"ве их диаметра. (У = К/бхР, Р - средний диаметр). Степень эффекта ингибирования опухоли определяют на основании разности объема опухоли измеренного на 21-й день после трансплантации в контрольной и обработаннойгруппе (каждая экспериментальнаягруппа включает по крайней мере шесть 2опухолей),Оценку опухоль-ингибирующего эффекта относительно Ь 1210 проводят следующим образом, 10 клеток лейкемии Ь 1210 внутрибрюшинно трансплантируют мышам. Лечение начинают в первый день после трансплантации, Соединения, подлежащие изучению, вводят в виде физиологического раствора (ИаС 1) или 2 Ж-ного буффера твин 80, содержащего 57. диметилсульфоксида,Выживаемость Выживаемостьобработанных контрольныхмышей - мьппейВыживаемость контрольныхмышейКритерий: 1 Ь 8,Е - значительный опухоль-ингибирующий эффект,Таким образом, на основании представленных данных можно заключить,что предлагаемые соединения являютсяэффективными цитостатическими агентами и что эти новые соединения являются более эффективными цитостатическими агентами, чем известное ВСАТ ихлорозотицин,Причем аналог по структуре; 1, Е =-бис-(2-хлорэтил)карбамоил-Ьуя-Рго-Ча 1-ИН, не обладает цистостатическойактивностью.Определение токсичности предлагаемых соединений, проведенное на мышахвида С 57 В 1, х РВА показывает, чтоони могут быть отнесены к категориисреднетоксичных соединений.формула изобретенияИ-Нитрозо-И-(бета-хлорэтил)карбамоилпептнды общей формулыЫОс-сн,сн,нссннп в,где и = 1;К - Ьуя Рго Ча 1 ИН Тгр Ьец Ы АярРЬе БН Рго Ча 1 БНС 1 у Ьуя Рго Ча 1 ИНТгр С 1 у Ьуя Рго Ча 1 ВН, илии = 2; К - Ьуя Рго Ча 1 ИНнли их хлоргидраты, обладающие противоопухолевой активностью,+2,5 растворНаС 1 Обе мьппи больны./ МЯТ обработанной группых 100.БТ контрольной группы Т аблица 2 Дозировка (внутри- П,Б, %брюшинно), мг/кг 80 Зх 103 х 501 х 1331 х 200 150 60 Токсично 40 47,0 783 30 4 ро 783 200 815 142 13 О 12,0 гОО 70 47)0 83 10,5 175 47,0 783 29,5 492 13,0 217 14,0 233 8,5 . 142 47,0 783 20,5 342