Способ определения активности полифенолоксидазы

Номер патента: 1161858

Автор: Суслов

ZIP архив

Текст

СОЮЗ СОВЕТСНИХаэмленктии СПУБЛИН А 19) (1 Ц 1(51) С 01 52 Е иГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬГЬЙОПИСАНИЕ ИЗО К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Научно-исследовательский инсттут биологии при Иркутском государственном университете им. А.А.Жданова(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПОЛИфЕНОЛОКСИДАЗЫ,включающий обработку пробы субстратом, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью одновременного определения в той же пробеактивности пероксидазы, в исследуемую пробу вносят о -дифенол в количестве 10 -10 моль/л, поддерживают в пробе рН равным 5,5-6,0, измеряют изменение во времени окислительно-восстановительного потенциала пробы, увеличивают рН пробы до 7,5-8,0, вносят перекись водорода.в количестве 0,3-3 об,7.,/ вновь измеряют изменение во времени окислительно-восстановительного потенциала, а активность полифенолоксидазы и пероксидазы определяют по величинам первых производных зависимостей окислительно-восстановительных потенциалов от времени, полученных соответственно.в первом и втором опытах.ВФЗаказ 3964/46 Тираж 897 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4 3Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения активности оксидаэ.Известен способ определения активности полифенолоксидазы, включающий 5 обработку анализируемой пробы раствором эскулетииа с последующимизмерением люминесценции полученного раствора 111Недостатком способа является невозможность определения активности 1 О пероксидазы и полифенолоксидазы одновременно.Цель изобретения - одновременное определение активности полифенолоксидазы и пероксидазы в одной пробе. ЯПоставленная цель достигается , тем, что согласно способу, включающему обработку пробы субстратом, в исследуемую пробу дополнительно вносят 0 -дифенол в количестве 10 - 10 "моль/л 2 О .поддерживают в пробе рН равным 5,5 - 6,0, измеряют изменение во времени окислительно-восстановительного потенциала пробы, увеличивают рН до 7,5-8,0, вносят перекись водорода в р 5 количестве 0,3-3,0 об,7., вновь измеря ют изменение во времени окислительновосстановительного потенциала, а активность полифенолоксидазы и пероксидазы определяют по величинам первых производных зависимостей окислительно-восстановительных потенциалов от времени, полученных соответственно в первом и втором опытах.Предложенный способ осуществляют следующим образом.В электролитическую ячейку помещают платиновый и хлоросеребряный электроды, соединенные с потенциометром, а также исследуемую жидкость с рН = = 5,5-6,0. Содержимое ячейки тщатель 40 но перемешивают, вносят в нее 0,01 М раствор о -дифенола и при помощи самописца, соединенного с потенциометром, записывают кривую изменения по 45 тенциала платинового электрода во времени. По достижении максимума на кривой в раствор вносят щелочь до достижения рН = 7,5-8,0, вносят перекись водорода в количестве 0,3 . - 3,0 об.7. раствора в ячейке и вновь записывают кривую изменения потенциала электродаво времени.Записьпрекращают по достижении второго максимума.Кривые подвергают графическому дифференцированию и по полученным значениям первых проиэводных, используя заранее построенные калибровочные кривые, определяют концентрации ферментов.П р и м е р. 1,0 мл гомогената картофеля вносят в ячейку, содержащую 9 мп раствора с рН = 5,5-6,0, помещают в ячейку платиновый и хлоросеребряный электроды и включают мешалку (1000-1200 об/мин). После установления равновесного потенциала ( 1-2 мин) добавляют 1 мл 110М раствора о -дифенола с одновременным пуском самописца КСП, соединенного с прибором "рН". Происходит быстрое возрастание величины окислитель- но-восстановительного потенциала, отвечающее образованию о -бензохинона при окислении о -дифенола полифенолоксидазой, По выходе на максимум раствор подщелачивают 1-2 каплями 12 н. КОН до рН = 7,5-8,0 и добавляют 0,1 мп 307-ной Н 02 . Записывают кривую изменения потенциала за счет пероксидазного окисления о -дифенола. Запись прекращают после достижения второго максимума и начала спада потенциала.Полученные кривые подвергают графической обработке, представляющей собой вычисление величинМ сй где Е - потенциал электрода, мВ,- время, с.По вычисленным значениям используя калибровочные кривые, построенные по растворам с известным содержанием фермента, определяют концентрации полифенолоксидазы и пероксидазы.Использование предложенного способа позволяет сократить время анализа с 15-20 до 6-8 мин, т.е. в 2-2,5 раза.

Смотреть

Заявка

3662776, 14.07.1983

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ ПРИ ИРКУТСКОМ ГОСУДАРСТВЕННОМ УНИВЕРСИТЕТЕ ИМ. А. А. ЖДАНОВА

СУСЛОВ СЕРГЕЙ НИКОЛАЕВИЧ

МПК / Метки

МПК: G01N 27/52

Метки: активности, полифенолоксидазы

Опубликовано: 15.06.1985

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-1161858-sposob-opredeleniya-aktivnosti-polifenoloksidazy.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения активности полифенолоксидазы</a>

Похожие патенты