Дитартрат 5, 7-0-бис-(диэтиламиноэтил)усниновой кислоты, обладающий противоопухолевой активностью

Дитартрат 5,7-0-бис-(диэтиламиноэтил)усниновой кислоты формулы

где R НООС-СНОН-СНОН-СООН,
обладающий противоопухолевой активностью.

Предлагается новое соединение природной лишайниковой кислоты, а именно к дитартрат 5,7-0-бис-(диэтиламиноэтил)усниновой кислоты формулы I
где R НООС-СНОН-СНОН-СООН, обладающее противоопухолевой активностью, которое может найти применение в медицине как ингибитор роста злокачественных новообразований.
Известна усниновая кислота формулы II
обладающая противоопухолевой активностью, это соединение удлиняет продолжительность жизни мышей с лимфоцитарной лейкемией р 388 (до 59%), существенно ингибирует рост карциносаркомы Льюиса мышей.
LD₅₀ для мышей 90-110 мг/кг, для крыс 100-130 мг/кг. Однако усниновая кислота в максимально переносимой дозе МПЛ 20 мг/кг не чувствительная к таким штаммам, как карциносаркома Уокера (26,1%), альвеолярный рак печени РС-1 (29,2% ). Кроме того, вещество нерастворимо в воде и может быть использовано только в виде раствора в органическом растворителе, например в диметилсульфоксиде, что препятствует внедрению вещества в практику.
Из водорастворимых веществ, содержащих две диэтиламиноэтоксигруппы при ароматическом ядре наиболее близким является дитрартрат-7,8:5",6"(2".2"-диметилпирано) изофлавона формулы III

где R HOOC-CHOH-CHOH-COOH, который обладает значительной противоопухолевой активностью в отношении лимфосаркомы Плисса (81,1%), саркомы 37 (84,7%), саркомы М-1 (83,0%), лимфосаркомы Плисса, резистентной к рубомицину (89,6%) и к лейкоэфдину (82,0% ), но неактивно в отношении слизистого рака печени РС-1 (20,4%), карциносаркомы Уокера (39,0%).
По назначению из используемых в медицине веществ наиболее близким к соединению формулы I является колхамин формулы IV

В условиях эксперимента в максимально переносимой дозе 2,0 мг/кг он слабо ингибирует рост опухолевой лимфосаркомы Плисса (38,0%), саркомы 37 (36,4% ), карциносаркомы Уокера (37,0% ), альвеолярного рака печени РС-1 (24,0% ), не ингибирует роста саркомы 180 (0,0%). Колхамин обладает другим спектром противоопухолевого действия.
Целью изобретения является получение водорастворимого производного лишайниковых кислот, обладающего значительной противоопухолевой активностью в отношении слизистого рака печени РС-1, карциносаркомы Уокера, резистентных штаммов лимфосаркомы Плисса.
Поставленная цель достигается новым соединением дитартратом 5,7-0-бис-(диэтиламиноэтил)усниновой кислоты 1, растворяющимся в воде и обладающим поверхностной и противоопухолевой активностью.
3,5% -ный водный раствор вещества 1 снижает поверхностное натяжение до 60,0 дм/см на границе раствор-воздух, что облегчает проникновение вещества в клетки.
Соединения 1 получают при нагревании усниновой кислоты и диэтилхлорэтиламина в присутствии К₂СО₃ в растворе ацетона с последующей нейтрализацией полученного основания раствором винной кислоты. Выход целевого продукта 95,3%
Индивидуальность соединения подтверждена данными элементного анализа, ИК, УФ- и ПМР-спектрами, которые прилагаются.
П р и м е р 1. Получение основания.
1,2 г (0,0034 моль) усниновой кислоты растворяют при нагревании в 75 мл сухого ацетона, затем добавляют 1,0 г (0,0074 моль) диэтилхлорэтиламина, 1,3 г предварительно прокаленного тонко измельченного К₂СО₃ и 1,0 г КОН. Смесь нагревают при температуре 45-50^оС в течение 1,5-2,0 ч, после чего горячий раствор отфильтровывают, ацетон отгоняют. Остаток последовательно обрабатывают серным эфиром (150-200 мл) для удаления не вступивших в реакцию исходных веществ, а затем хлороформом. Полученный раствор промывают водой до рН 7-8, сушат над MgSO₄(Na₂SO₄) и после удаления растворителя получают 1,14 г основания, выход 95,3%
Основание 5,7-0-бис-(диэтиламиноэтил)усниновая кислота крупные кристаллы (пластинки) темно-желтого цвета с т. пл. 131-132^о, растворимо в ацетоне, хлороформе, спирте, диметилсульфоксиде, нерастворимо в серном эфире, воде.
Вычислено, C 65,6; H 8,75; N 5,11.
C₃₀H₄₈O₇N₂
Найдено, C 65,15; H 8,68; N 5,40.
УФ-спектр: _макс^C2^H5^OH (227,3 нм (lg 4,27), 270,2 нм (lg 4,32).
ИК-спектр: _макс^KBr 695, 740, 780, 8450, 930, 950, 970, 1000, 1040, 1070, 1115, 1145, 1180, 1200, 1240, 1280, 1360, 1385, 1450, 1470, 1535, 1570, 1600, 1620, 1700, 2645, 2730, 2815, 2875, 2935, 2970, 3300-3600 см^-1.
ПМР-спектр (CDCl₃): 1,00 тр, 1,08 тр; 1,64 с; 1,72 с; 2,22 кв (J₁ 7 Гц, J₂ 14 Гц), 2,48 c, 2,65 кв, (J₁=7 Гц, J₂=14 Гц), 3,00 тр, 3,82 тр, 4,10 тр, 5,62 с.
Получение тартрата.
1 г (0,0012 моль) основания растворяют в воде, содержащей 0,38 г (0,0025 моль) винной кислоты, после удаления воды получают дитартрат 5,7-0-бис-(диэтиламиноэтил)усниновой кислоты в виде мелких кристаллов желтого цвета с т.пл. 105-106^о.
Вычислено, C 53,77; H 7,07; N 3,3.
C₃₈H₅₄O₁₉N₂
Найдено, C 53,23; H 7,00; N 3,41.
УФ-спектр: _макс^C2^H5^OH 230, нм (lg 4,85), 271,7 нм (lg 4,72).
ИК-спектр, _макс^KBr 680, 740, 790, 825, 840, 880, 900, 940, 990, 1025, 1080, 1135, 1190, 1225, 1250, 1310, 1385, 1405, 1440, 1545, 1600, 1620, 1740, 2630, 2820, 2880, 2935, 2975, 3340, 3405.
П р и м е р 2. Токсичность вещества,
Острую токсичность вещества 1 изучали в виде 2%-ного водного раствора (рН 7,0) по общепринятому в токсикологии методу на интактных мышах массой 18-20 г и интактных белых беспородных крысах массой 120-130 г обоего поля при однократном внутрибрюшинном введении. Полученные результаты обрабатывались статистически, LD₅₀ для мышей 300-350 мг/кг, для крыс 360-400 мг/кг. При вскрытии павших животных микроскопически отмечено расширение сосудов толстой и тонкой кишки.
Хроническую токсичность вещества 1 излучали МПД при ежедневном внутрибрюшинном введении в течение 5 дней, МПД для мышей составила 60 мг/кг, для крыс 75 мг/кг. В этих дозах не наблюдали выраженного токсического действия на животных и их гибели. При вскрытии животных видимых изменений со стороны внутренних органов не выявлено.
П р и м е р 3. Противоопухолевую активность вещества 1 определяли при ежедневном внутрибрюшинном введении 2%-ного водного раствора в МПД в течение 5 дней. Лечение животных после трансплантации опухолей начинали для мышей через 48 ч, для крыс с момента появления измеримых опухолевых узлов. Контрольные и опытные группы содержали по 12-18 животных. Противоопухолевую активность вещества оценивали по торможению роста опухолей, определяемому непосредственно после окончания лечения. Результаты исследования обрабатывались статистически с вычислением t (критерия по Стъюденту).
Соединение 1 в МПД (60 и 75 мг/кг) значительно тормозило рост карциносаркомы Уокера 74,8% (Р < 0,05), альвеолярного рака печени РС-1 70,4% (Р > 0,05), саркомы 180 61,3% (Р < 0,05) и слаботормозило рост лимфосаркомы Плисса 41,2% (Р < 0,05), саркомы 45 32,2% (Р < 0,05), саркомы 37 41,5% (Р < 0,05).
Кроме того, соединение 1 проявляет выраженную противоопухолевую активность в отношении резистентной к проспидину лимфосаркомы Плисса 70,8% (Р < 0,01), а также удлиняет продолжительность жизни мышей с перевиваемой лимфоцитарной лейкемией Р-388 на 120,4%
У соединения 1 выявлено различие в спектре противоопухолевого действия в сравнении со структурным аналогом усниновой кислотой. К аналогу не чувствительны карцинома Уокера (26,1%), альвеолярный рак печени РС-1 (29,2%). Обладая меньшей токсичность (300-400 мг/кг против 90-130 мг/кг), вещество 1 более, чем в 2 раза удлиняет продолжительность жизни мышей со штаммом Р-388 (120,4% ) по сравнению с исходной усниновой кислотой. Кроме того, аналог не растворим в воде, что затрудняет его применение.
Различие в спектре противоопухолевого действия выявлено и с веществом формулы III, которое также как и структурный аналог формулы II мало чувствительно к карциносаркоме Уокера (39,0% ) и альвеолярному раку печени РС-1 (20,4%).
Широко используемый в медицинской практике колхамин в МПД обладает слабым ингибирующим действием на приведенные штаммы, а именно на карциносаркому Уокера (30,1%), альвеолярный рак печени РС-1 (24,0%), не ингибирует саркому 180, резистентные штаммы лимфосаркомы Плисса.
В сравнении с колхамином дитартрат 5,7-0-бис4(диэтиламиноэтил)усниновой кислоты малотоксичен: МДП в хронических опытах при внутрибрюшинном введении 60-75 мг/кг против 2,0 мг/кг для колхамина. В отличие от колхамина соединение 1 значительно ингибирует рост карциносаркомы Уокера, альвеолярного рака печени РС-1, саркомы 180, резистентной к проспидину лимфосаркомы Плисса.
Таким образом, на основе природной лишайниковой кислоты (усниновой кислоты) получено ее новое малотоксичное водорастворимое производство детартрат 5,7-0-бис-(диэтиламиноэтил)усниновой кислоты, обладающее выраженной противоопухолевой активностью.
Использование: в качестве противоопухолевого средства в медицине. Сущность изобретения: продукт дитартрат 5,7 0 бис-(диэтиламиноэтил) усниновой кислоты, БФ C₃₈H₅₄N₂O₁₉ 105-106 C LD₅₀ 300 350 мг/кг для мышей ингибирует рост карциносаркомы Уокера (26,1%), альвеолярный рак печени РС-1 (29,2%), лимфосаркому Плисса (70,8%), удлиняет продолжительность жизни мышей со штаммом Р-388 (120,4%). Реагент 1: усниновая кислота Реагент 2: дихлориэтиламин. Условия процесса: нагревание при 45 50°С в присутствии прокаленного K₂CO₃ и КОН. Реагент 3: винная кислота.