Способ получения конъюгата гидразона

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ОМИТЕТ .ОТНРЫТИЯМ ГОСУДАРСТВЕННЫПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГННТ СССР СА РЕТЕ Н ПАТЕНТУ(57) Изобреванных прои алкалоидо коньюгата,сн,-сн Я Из,обр получениизводных разона обще онъюгата а имен мулы он н 4202656/23-0422.05.87867/18327.05.86ПБ30.04.90. БюЗли Лилли энБеннет КоулмНиколс ШБ)547,945,1.07(Заявка КР Р 001 И 33/54,тент Великобр07 С 7/00, 1 л. Р 161 Компани ЩБ)эн Лагузза,и Синтиа ПОЛУЧЕНИЯ КОНЪЮГАТА ГЩ ние касается конъюгодных винбластинов в частности получеидразона общей ф-лы ение относится к способуновых коньюгированных проинбластиновых алкалоидов,1561825 А 5 Я С 07 1) 519/04(т 01 И 33 где К - ОСН или ИН И=НС-;. К,-Н илиС О- СНД -С О -ИН-И=СН-; т=1 - 1 О,причем МИН-И=СН-, когца К - СГО 1 - СН Д,-СОИН-И=ОН-, а К,СО - СНД -С 01 ИН-И=СН-, когда К - ИН-И==СН СР - остаток иммуноглобулинаили его фрагмента, обладающих противоопухолевым действием, что можетбыть использовано в медицине, Цельизобретения - создание новых болееактивных веществ указанного класса.Синтез ведут взаимодействием соответствующего винка-гидразина, гдеК - НИ-ИН или ОСН.К 1 - Н илиСГО СНД, СОИН ИНгэ причем КИН-ИН, когда К, - СОД СНД -СТОИНИ-НН, и К, ф СО) - СН 1 -СЯ-ИН-ИНкогда К - ИН-ИН, с альдегидной группойокисленного иммуноглобулина илиего фрагмента. В этом случае гндразидный.конъюгат при дозах 30,375 мг/мг обеспечивает подавлениероста опухоли, в то время как с известным гемисукцинатным конъюгатомне происходит полного подавления роста при дозах до 10 мг/кг винка-эквивалента. 6 табл.где К - ОСН илиИНИ=СН-группа;9К - Н - СОСИСН-СОИНИ=СН-группафш = 1-10, причем Е не можетбыть - ИНИ = СН-, когда Н- СО(СН ) СОИНИ-СН-, а Кф йеможет быть СО(СН)СОИНИ-СН-,когда К - ИНИ-СН-, СР - остаток иммуноглобулина или егоАрагмента, 10 обладающих противоопухолевым действием,.Цель изобретения - получение новых канъюгатов гидралона, обладающих Аармакологическими преимуществами перед конъюгированными аналогами.П р и м е р 1. Получение 4 -деокси-дезацетиллейрозидин-карбаксигидразид-И-"-сукцинимида.Раствор готовят из .1320 мк 4 -де окси-дезацетиллейрозидин-карбоксигидразида в 25 мл пиридина. 175 мг ангидрида янтарной кислоты прибавляют к раствору и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 25 в атмосАере азата примерно в течение 24 ч. Затем из реакционной смесив вакууме удаляют летучие компоненты, а образующийся осадок поглощает метилендихлорид в комбинации с достаточным количеством метанола для полного растворения полученного осадка, Органический слой дважды промывают равным по объему количеством воды, а затем высушивают, При упариваниилетучих компонентов в вакууМе получают осадок, содержащий И 2-сукцинаил 4 - деокси-дезацетиллейрозидин-карбоксигидразин, который растворяют в 25 мл пиридина, к которому прибавлено 40 350 мг ангидрида уксусной кислоты, В результате образуется смешанный ангидрид янтарной и уксусной кислот, который одновременно циклизуется, давая 4 -деокси-дезацетиллейрозидин- З-карбоксигидразюц-.И 2-сукцинимид, Реакционную смесь упаривают досуха в вакууме, а полученный осадок. растворяют в метилендихлориде, Экстракт метилендихлорида промывают дважды равным по объему количеством воды, а затем высушивают. При упаривании двух- хлористого метилена получают 4-деокси-дезацетиллейроэидин-карбокси .,гидраэид-И 2 -сукцинимида, который хро матограАируют на колонке из силикагеля этилацетатом, содержащим в качестве элюента возрастающие количества метанола (0-50%) . Фракции, которые(как установлено тонкослойной хроматографией) содержат требуемое сукцинимидное производное, соединяют и выпаривают в вакууме твердое вещество.1Получено 190 мг 4 -деакси-дезацетиллейрозидин-карбоксигидразид-И-сукцинимида со следующими Аизическимихарактеристиками:ИК-спектр.(в хлороформе); 3470;1736; 1615 и 1572 смЯМР (СВС 1,): 10,90; 7,88; 7,49;712 э 6 э 48; 6 э 051 5 э 80; 4 е 10; Зз 76;Сульфатную соль получают путемрастворения свободного основания вбезводном этаноле при рН 8,0 ЗатемрН устанавливают 3,9, используя свежеприготовленный раствор 2%-ной серной кислоты в этаноле, При упариванииреакционной смеси досуха получают4 -деокси-дезацетиллейрозицинкарбоксигидразид-И 2-сукцинимидныйсульфат,Следуя указанной методике, 4-дезацетилвинбластиновый гидразид (2,4 г)растворяют в 125 мл пиридина, к которому прибавлено .385 мг ангидрида глутаровой кислоты. Полученный такимобразом И-глутароилавый 4-дезацетилЧЬВ-карбоксигидразид выделяют поуказанной методике и очищают хроматографией на силикагеле с использованием аналогичной системы растворителя,как описано выше, Полученное глутароильное соединение взаимодействуетс ангидридом уксусной кислоты, образуя смешанный ангидрид, который одновременно циклизуется с выходом 4-дезацетилВ-З-.карбоксигидразидРглутаримида. Указанное соединениеочищают хроматограАией на силикагелес использованием указанной системырастворителя. Получают 460 мг И 2-глутаримидного производного, котороеимеет следующие Аизические характеристики: Масс-спектр, н/е = 864 (СзН 6 И 6 О,).ИК-спектр (СНС 1 ): 3475; 1714и 1616 см-",рКа (66%-ный водный раствор ДМФПМР): 5; 1,7; 12,9,ЯМР (СОС 1): 9,96; 8,91; 8,04;7,52; 7,14; 6,58; 6,08; 5,83; 4,15;СульАатную соль получают па указанному методу, Из 290 мг исходногоматериала получают 210 мг соли.15618 фЪСнО1 Следуя указанному методу, но1,опять заменяя 4-дезацетил.В-З-карбоксигидразид на 4-деокси-дезацетиллейроэидин-З-карбоксигидразид,используя вместо ангидрида уксусной кислоты хлористый ацетил, получают И-сукциноил-дезацетилЧЬВ-карбоксигидраэиц. При хроматографии сукцинимицного продукта 10выходит дне Аракции, одна из которых представляет. ожидаемый 4-дезацетил-Л,В-З-карбоксигидразид-Ивсукцинимид, а другая - его 4-ацетилпроизводное, образуемое в качествепобочного продукта во время процессациклизации, 4-дезацетилЛ.В-З-карбоксигидразид-Р -сукцинимид имеет следующие Аизические характеристики:Масс-спектр, ш/е=850 СН ОИ 60 з). 20ИК-,спектр (КБг): 3480;.1734и 1616 см.ЯМР (СИС 1 ): 9. 69: 9.47; 8,22;7,49; 7,1", 6,53; 6,07; 5,82; 5,71;и 0,89.Сульфатную соль получают по указанному способу, Выход 250 мг из350 мг исходного материала.11 р и м е р 2. Готовят раствор ЗОпутем растворения 2,5 г 4-дезацетил 4-гемисукцината 4-сукциноил-Ч 1 В)в 50 мл хлороАорма, Добавляют 870 мгИ-метилморфолина, 11 о завершении растворения реакционную Смесь охлаждаютв ледяной бане и подают ток азота.Добавляют 985 мг изобутилхлорформатаи реакционную смесь перемешивают при0 С в течение 45 мин, Добавляют 1 млобезводного гидразина и реакционную Осмесь перемешивают около 10 мин.Затем реакционную смесь экстрагируютводой, водный слой отделяют и отбрасывают и органический слой сушат.Выпаривание растнорителя дает остаток, содержащии 4-дезацетил-Л.Вгемисукцинат гидразид, Раствор остатка в метиленхлориде хроматографируютна силикагеле, используя н качествеэлюента смесь этилацетата и метанола 50100:О - 50:50), Сооответствующие фракции дают 950 мг очищенного гидразида4-дезацетил-У 1 В-гемисукцината;ш/е=882,СульАатную соль получают путем55растворения основания н безводномэтаноле (25 мл), доведения рН примерно до 4 с помощью 2 Х-ного растворасерной кислоты в этаноле 24,5 г беэ 25 6водного этанола, 0,5 г 18 М Н ЫО+) и удаления растворителей н вакууме,ИК-спектр: 3400; 3009; 1738; 1680 и 1616 см.ЯМР (С 1)С 1); 9,9; 8,35; 8,05; 7,55;7 э 10 бз 85; бэ 10; )э 85 5945 ь 5 эЗОьПредлагаемые конъюгаты включают окисленные гликопротеины, предпочтительно иммуноглобулины, и из этого класса предпочтительно моноклональное антитело (МоАЬ), представляющее, собой гамма-глобулин, такой как 18 С или 18 М, Фрагменты иммуноглобулина (18), содержащие углевод, так же как исходный иммуноглобулин, из которого получают эти Арагменты, могут быть использованы для образования новых конъюгатов такого же типа.Предпочтительный класЦ гликопротеинов (иммуноглобулины) представляет собой соединения, которые реагируют или по крайней мере распознают анти- гены на клетке-мишени, т,е. они имеют свойства распознавания антигенов. В особенности предпочтительными являются те гликопротеины, которые распознают антигены на поверхности клетки-мишени,Предпочтительным видом антителадля использования н изобретении явля;ется иммуноглобулин, представляющийсобой гамма-глобулин, В особенностипредпочтительными являются виды 18 С,18 А, 1 РЕ и .ЕРМ.Предпочтительными конъюгатами являются те, которые приготовлены измоноклональных антител, в особенности е, что распознают клетки рака человека, такого как аденокарцинома. чешуйчатая клеточная карцинома, переходная клеточная карцинома, меланома, нейробластома, мелкоклеточная карцинома, лейкемия, лимАома и саркома.Гликопротеин (ГП) указанного типа может быть окислен периодатом или другим подходящим окисляющим агентом так, что связь между соседними диалами н поверхностном углеводе разрывается и образуются альдегидные группы по обе стороны исходной связи Н - С - ОН гп о Н - С - ОНЧасть структуры углевода - диальдегидный продукт.Число полученных диальдегидныхединиц является результатом следующих факторов; количества используемого периодата, общих условий реакцийокисления (например, времени, температуры, растворителя, концентрациии т.д.)., числа соседних диодов углеводных единиц, присутствующих в протеине, и их доступности для периодатного реагента.Альтернативно или в сочетании спериодатом можно использовать ферментативное окисление, например, оксидазой галактозы. Это более селективныйи ограничивающий реагент, катализирующий превращение 6-ОН группы остатков галактозы в углеводных цепях гликопротеина в альдегидные группы, Эта6-СНОН-группа должна быть незамещенной, чтобы обеспечить успешное окисление. Демаскирование блокирующейгруппы, такой как группа, в которой 25имеется остаток сиалиновой кислоты,может быть обеспечено с помощью фермента нейроминидазы. Число получаемых альдегидных остатков являетсяФункцией многих параметров. 30Альдегидсодержащие гликопротеины(ОСН) -СР затем конъюгируют с винкагидразидом,Число щ является функцией числаальдегидных групп, возникающих при 35описанном окислении. Обнаружены коньюгаты, содержащие 25 винкаостатков на антитело. Среднее значение(винкаостатков на антитело) примерно1 - 10 (т,е, ш=1 - 10), предпочтитель ное значение примерно 4 - 10.Конъюгирование винкагидразидовс окисленными гликопротеинами провоФдится по стандартным методикам. Раствор винкасоединения в растворителе, 45смешиваемом с водой, таком как диметилформамид, добавляют к охлащценномубуферному водному раствору окисленного гликопротеина. Предпочтительнаятемпература л 0 - 8 С, обычно используют буфер 0,1 н. ацетата натрия.Реакцию лучше проводить в темнотеи в инертной атмосфере. Реакция обычно заканчивается за 10 - 24 ч, образующийся конъюгат может быть очищенстандартными методами, таком как хроматография на сефадексе,Далее следует описание окисленияи конъюгирования специфических МоАЬ. П р и м е р 3. Конъюгирование сХАС 8-81 МоАЬ,Готовят раствор путем растворения200 мг ХАС 8-81 (1 мл=приблизительно 150000, 1,34 х 10 моль; клеточнаялиния депонирована как АТСС 11 В 9 кол"лекция культур американского типа,12301 РагЕ 1 аюп Бгхче, КосМ 111 е МВ20852) в 20 мл буфера 0,1 М ацетатанатрия, рН 5,6 (29,3 г ацетата натрия, 2,44 мл уксусной кислоты плюсдостаточное количество стерилизованной воды для изготовления 4 л буфера),Раствор хранят при 0 С в течение ночи(около 10% протеина не растворяется).Добавляют 685 мг метапериодата натрияза один .прием при энергичном перемешивании,Смесь перемешивают 2 1 мин при00 С в темноте и затем гасят реакциюпутем добавления 5-кратного избытка(на полное количество периодата)этиленгликоля (1,28 мл 12,5 М раствораэтиленгликоля в стерильной воде). Новую смесь перемешивают при 0 С в течение 5 мин в темноте и затем центриФугируют, получая прозрачную надосадочную жидкость и белый осадок. Надосадочную жидкость загружают в колоннус гелем сефадекс Г 25 (средняя зернистость) и продукт элюируют тем же буФером ацетата натрия. Элюат проверяютУФ-облучения при 280 мм. Периодат смывают с колонны и отбрасывают, Концентрацию окисленного продукта оцениваютв каждой фракции элюата при 279 нм.Выход 96%. Проведенный так же второйопыт дает 96,5%-ный выход.Растворы элюата, содержащие 4,72и 4,02 мг/мл окисленного продукта,смешивают и добавляют буфер 0,1 н.ацетата натрия для получения конечной концентрации протеина 2,77 мг/мл(полный объем 69 мл). Раствор охлаждают примерно до ОС,Раствор 4-дезацетил.В-З-карбоксигидразида в ДМФ (5,6 мл и53,7 мг/мл раствора) добавляют покаплям к охлажденному буферному раствору МоАЬ. Реакционный сосуд промывают азотом и закрывают. Реакционнуюсмесь перемешивают при охлаждениии в темноте магнитной мешалкой в течение 24 ч, Затем реакционный сосудоткрывают и центрифугируют прозрачную бледно-желтую реакционную смесь.Надосадочную жидкость хроматографируют на геле сефадекс 025, предварительно уравновешенном до рН 7,4,фосфатно-соленым буАером (0,01 МНРО, О, 15 М ИаС 1)1 который используют также в качестве элюента,Конъюгат (образованный гидразонной связью между 3-карбоксигидразидной группой и альдегидной группой вМоАЬ) элюируют сначала с последующимзлюированием непрореагировавшего 4"- 10де-зацетил-Ч 1.В-З-карбоксигидразида,Выход полученного конъюгата (из 4 колонн) составляет 173 мг в 224 мл(907-ный выход), Конъюгат содержитоколо 6 моль 4-дезацетил-И.В-З-кар- . 15боксигидразона на моль ХАСЯ -МоАЬ.Второй опыт проводят, используя200 мг КБ 1/4 МоАЪ, способный к распознаванию поверхностных антигенов 20клеток (аденокарциномы человека),в 20,0 мл ацетатного буАера и то жеколичество периодата и этиленгликоля,как в примере 3. Опыт дает 176 мгокисленного МоАЬ в 39,9 мл буАерапосле хроматограАии (88%-ный выход),Конъюгирование с 274 мг 4-дезацетилЖВ-карбоксигидразидом в ацетатном буфере, рН 5,6, дает 146 мг(833-ный выход) конъюгата, содержащего около 7,5 моль 4-дезацетил"Л.В-Зкарбоксигидразона на моль КЯ 1/4.По указанной методике получаютконъюгат путем взаимодействия 4-дезацетил-Ч 1.В-З-карбоксигидразида с 35альдегидными группами, образованнымиокислением поверхностных углеводов9.2.27 гликопротеина МоАЪ, способного к распознаванию антигенных свойств,на поверхности клеток меланомы человека. Опыт при использовании 200 мгИоАЪ, окисленного 685 мг метапериодата натрия в ацетатном буАере при рН5,6(0,1 М), дает альдегидсодержащийокисленный 9;2,27 МоАЬ с 92%-ным выходом (184 мг), Этот. продукт конъюгируют с 4-дезацетилЬ.В-З-карбоксигидразидом (279 мг). Конечный выход поли-дезацетил-Л.В-гидразона .окисленного альдегидсодержащего 9.2,27-коньюгата в виде раствора в Аосйатно-соленом буфере составляет 91 Х.Продукт содержит около 4,9 моль исходного винка на моль 9,2.27.По методике, описанной в примере 3, 55как представлено в табл. 1, получаютнесколько других конъюгатов антител,используя 4-дезацетил,В-З карбоксигидразид в качестве остатка винка.Таблица 1 Антитело е число молей на моль антиконечном ированном 4,2 (3) 5,7 (4) 5,5 (6) 4,1 (1) 6,2 (4) 4,2 (1) 6,0 (1) 5.14 10 6) 4,4 (3) 5,1 (4) 6,6 (2) 5,8 (7) 6,4 (2) 4,5 (4) 4,25 (2 1,9 (11 П р и м е ч а н и е, Чисх чказывает количество оп ско ов, исреднего ин конь ользованных при вычислении В этой группе обнаружен о гат, содержащий около 27 вин на антителоп Конъюгаты также могут быть получены с Арагментами иммуноглобулина 18,мономером 18 М или другими мономерами 1 я, содержащими углевод, полученными из исходного антитела путем,например, расщепления протеолитическим Аерментом или восстановительногоалкилирования, Предпочтительными протеолитическими ферментами для получения этих .Арагментов являются пепсини папани,Исследование конъюгатов по изобретению может быть проведено, используя известную технику, такую как аАинная хроматограАия. Действие конъюгатаможет быть оценено путем подсчетачисла жизнеспособных клеток после обработки конъюгатом сспензии опухолевых клеток или путем измерения по щения тритиро рации протеин яют путем измерени арата определ птической пло а при двух длин и 279 нм, и со ных значений со начениями12811 А 811 В 213 Н 114,95.5517 Ю 22 А 11324.9.4.4 И 24 Е 8.116 П 2Г 91,1 КЯ1.2 КЯ1.,4 КБ1.6 КБЕСЕнного уридина. Концен и лекарственного престн растворов конъю1ах волн, например поставления полу1561825 Таблица 3 Ч 1. М,Э,Д,мг/кг содержаниевинка Клеточная линия аденокарциномы М 14-меланома РТМ-меланома БС 1-меланома БКМЕ 1.28-меланома А 375)1 4-КБВ11. 285. 1414,95,55 ЧХООХВ свободного лекарственного препарата и неконъюгированного иммуноглобулина при тех же длинах волн, Конъюгат можно также подвергнуть оценке п чиччо против ксенотрансплантантов опухолей человека в атипических мышах.Новые конъюгаты эффективны в широком интервале доэировок. Например, для лечения взрослых людей, больных раком, дозы обычно находятся в интервале 0,01 - 10 мг/кг (остаток винка), чаще всего в интервале 0,03 - 9 мг/кг. Однако следует иметь в виду, что ко. личество принимаемого конъюгата определяется врачом в зависимости от условия и курса лечения.В следующих таблицах указано действие предлагаемых конъюгатов при лечении новообразований. 20В табл. 2 приведена минимальная . эффективная доза (винка эквивалент) в моделях меланомы конъюгата 9,2,27- дезацетил-ЧЬВ-гидразида.Та блица 2 Клеточная линия М.Э.Д мг/кг сомеланомы держание винка 35П р и м е ч а н и е. М.Э.Д. -. минимальная эффективная доза, которая демонстрирует )50 Х подавления роста опухоли в течение 28 дней, конъюгата 9.2.2 Х-дезацетил,В-гидразида в пе ресчете на содержание нинка за трехразовое внутривенное введение (2, 5 и 8 дни после имплантации опухоли).В табл. 3 показана минимальная эффективная доза (винка эквивалент) в моделях ксенотрансплантантов адено-, карциномы конъюгата К 81/4-дезацетил- ЧЬВ-гидразида. РЗ-ИСК - карцинома легкогочеловека ( 0,0625НТ- колорек-.тальная карцинома 0,25НтЧТЕ - к -лоректальная карцинома 0,25М.Э.Д. - минимальная эффективная доза, которая демонстрирует 50 Х подавления роста опухоли, конъюгата К 81/4-дезацетил-ЧЬВ-гидразида в пересчете на содержание винка за трехразовое внутривенное введение (2, 5 и 8 дни после имплантации опухоли).НТЧТЕ представляет собой отобранный 1.п чз.чо вариант клеточной линии устойчивый к терапии винка алкалоидами,В табл. 4 показана минимальная эффективная доза конъюгатов моноклонального антитела 4-дезацетил-ЧЬВ- гидразида в моделях человеческих опухолей на мышах.1:47 Н 12413 Н 1, То же, что в табл. 2 и 3.Винка-содержимое конъюгата - 4-дезацетил 7 ЬВ-гидразид.РЗИ СЬА - аденокарцинома легкого; НТ- аденокарцинома толстой кишки; РА 1)И - глоточная чешуйчатая клеточная карцинома; Ь 8174 - аденокарци- .нома толстой кишки; Т 222 - клеточная карцинома.)Животным вводили конъюгат три раза в период2 - 8 дней после имплантации, опухоли. Опухолиизмеряли 28 дней после имплантации. Ингибирование определяли по отношению к животным, обработанным РЬЯ в качестве контрольных.) Использовался тот же протокол, что в 1), но дозувводили на 3, 6 и 9 дни и опухоли измеряли через 2,3 или 4 недели. Т а б л и ц а 5 Лекарство Процент подавления ДЛВЛБ-гидразидК 81/4 конъюгатДАВЛБ-гидразидКБ/4 конъюгат 1,0 О;1 .1,0 0,1 3 0 100 28мг/кг викка или содержание викка. РЗИ-СЬАНТ Т 222Т 222РА 1)И .РЗИ СЬАГАЛИТ 222Т 222Т 222 В опыте голые мыши были заражены клетками РЗИ СЬА аденокарциномы человеческого легкого путем подкожного введения в день О. На 2, 5 и 8 день после этого группы по четыре или пять животных подвергали обработке путем внутривенного введения либо конъюгата либо описанного нинка производного. На 28-й день измеряли опухоль)1,03,0 1-2 1-2 0,5 )2,01-2 )2 0 1-2 )2,0 35 и определяли процент подавления путемсравнения массы опухоли обработанныхгрупп животных с необработаннымиконтрольными животными, Доза выраженав мг/кг содержания викка в конъюгате.40 Результаты эксперимента приведены втабл. 5,В табл. 5 показан опыт с аденокар",ционной РЗИ СЬА."Н 73375 100 100 конъюг мг/кг винка С-осн ние винка. од данных и доза енных гат п- :ОнНСОК ивность, которая не В табл. 5 ДАВЛВ-гидразид предстаЫ ляет собой 4-дезацетилвинбластин- карбоксигидразид, как приведено в британской заявке на патент Р ОВ 2 090 837 А, тогда как конъюгат ДАВЛВ 5 гидраэида - КБ 1/4 представляет собой конъюгат, полученный согласно методике, описанной в примере 3.Как видно из приведенных данных, 10 в основном полное подавление роста опухоли наблюдалось при уровнях дозировок конъюгата 1,0 мг/кг 9 тогда как при том же уровне свободный ДАВЛВ- гидразид .проявлял только минимальное действие, Таким образом, эксперимент показшвает, что лекарство - коньюгат иммуноглобулина согласно изобретению имеет очевидные преимущества по сравнению со свободным лекарством в конь югированной форме.Аналогичным образом сравнение этого же конъюгата с конъюгатом с тем же антителом, но приготовленным так, как описано в патенте СССР В 13624049 т.е. конъюгат сукцината, известный как конъюгат-.дезацетилвинбластин-гемисукцината с антителом КБ 1/4, проведено по той же схеме, которая описана в табл. 5, но в человеческой 30 колоректальной аденокарциноме. Измерение опухоли произвели на 35-й день, Результаты приведены в табл. Ь.В табл.б дана колоректальная аденокарцинома, НТчеловека.1 хТа блица Ьетвтэ МаюеааавэММаЮСаЭСайамив Лекарство Доза, мг/кг Процент подавления Как видно из полу гемисукцинатный конь до 10 мг/кг винка эк в лучшем случае толь полному подавлению роста опухолй 9 а предлагаемый гидразидный конъюгат показал в основном подавление роста опухоли при дозах 3 - 0,375 мг/кг.Таким образом, эксперимент показывает большую биологическую активность предлагаемых конъюгатов по сравнению с конъюгатами сравниваемого винка и антитела, коньюгированных другим способом, Конъюгаты проявляют среднюю токсичность, но обладают большим терапевтическим индексом, чем известные лекарства и конъюгаты, применяемые для лечения раковых заболеваний, и могут быть эффективно применены для лечения раковых больных,Формула иэ обретения Способ получения конъюгата гидразона общей формулы-МНЛ=СН-группаН -СОМНИ=СН-группа;причем К не может бытьН-, когда Н 1 - С 0(СН )- СН-, а К не можетСО(СН) СОХНИ-СНкогдаНИ СН-, СР - остатокоглоблина или его Йрагмента,ч а ю щ и й с я тем 9 что идразин общей формулы 1118 Составитель И.федосееваРедактор И.Петрова Техред Л,Сердюкова Корректор Л.Патай Заказ 985 Тираж 334 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб , д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 17где К - ЯНИН группа или ОСНОВ, К- Н,или СО(СН)СОСНИН , причемК не является ИНИН, когдаК, - СО(СН)СОСНИН и К, неявляется СО(СН)СОСНИН,61825- когда К представляет собой подвергают взаимодействию с альдегидной группой окисленного иммчноглобулина или его фрагмента.Я