Способ получения карбоциклических пуриновых нуклеозидов

(57) Изобретение нию карбоцикличе леозидов ф-л 1 и тносится к получеих пуриновых нук 1 Изобр полччениполучение новыханалогов, сбротив вирусов ся к способузидных аналоение новь относ нукле лопен новое ов, име именно уклеозидщих ц карбо ов клических п)й Аормулы)лсчный).4-метилпилписило ы гинскса (10 г 37,ов о но 5 т анил)ина,ммоль) вводного дим т 1 3 дихлор где основание аденинин-ил, сбладаюсвируснсй активпуриновое 9-ил, иэа щих проти гдисилокса,1,3,3-тетраизспро 1 13 мл, 41 ммспь) н 3 г,пмидаз м ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИ(72) Йесио, Танияма, Такуми ХамаРиюдзи Марумото и Наоки Ямамото(54) С 110 СОБ И 031 УЧЕНИЯ КАРБОЦИК 3 ИЧЕКИХ 1 УРИНОВЬХ НУК 3 ЕОЗИДОВ где У - пуриновое основание аденин- ил, гуанин-ил, обладающих противо- вирусной активностью. Цель изобретения - разработка способа получения соединений, обладающих активностью против вирусов РНК. 11 олучение ведут3 тиокарбснилировачием в положении 2 или 3 соединения Вор-лы 11, где У указано, а имеющиеся в пуриновом основании амино- и гидроксигруппы защищены один из Ки К -ОН, а другой - Н, при комнатной температуре с последующим восстановлением гидридом трибутилолова в присутствии М,о -азсбисо изобутиронитрила при 80 - 100 С и снятием защитных групп. Цель изобретениядидезоксинуклесидныхладающих активностьюРНК.11 риме р 1 со9-(1 Н, 28, 3 Н, -К.) -ксил,6-тетраизснрдиоксициклонентан-С-аналог ннсзннарастворяют В О мл бтилАсрмамнца, дсбавля165 ммоль) и смесь перемешивают прикомнатной температуре в течение 25 ч.,Реакционную смесь по каплям добавляютк Р л воды, осадок собирают фильтрацией, промывают водой, далее быстропромывают диэтиловым эфиром, сушат иполучают указанное в заглавии примера соединение в виде белого порошка(17,2 г). Часть полученного продуктаперекристаллизонывают из дихлорметанаи получают кристаллы, т.пл. 135-138 С.С-аналог инозина известен из СЬешхса 1 апй Рйогаасепс 1 са 1 Ва 11 ес 1 п 24,2624 (1976),15П р и м е р 2 (ссылочный). Синтез9-(1 К, 28, ЗК, 4 К)-4-метил-фенокситиокарбонилокси,6-(тетраизопропилдисилоксанил)диоксициклопентан 1-илгипоксантина.20Соединение, полученное н ссылочномпримере 1 (11,2 г, 22,3 ммоль), растворяют в 300 мл безводного ацетонит. рила, добавляют диметиламинопиридин(15,8 г 53,5 ммоль) и фенокситиокарбонилхлорид (5 г 29 ммоль) и смесьперемешивают при комнатной температу"ре 7 ч, Растворитель удаляют при пониженном давлении, а остаток растворяют н 250 мл хлороформа, Раствор 30промывают 0,5 М раствором первичногокислого фосфорнокислого калия (250 мл,2 раза) а затем водой (200 мл), сушат безводным сульфатом натрия и кон центрируют при пониженном давлении.Получают сироп желтого цвета. Его35очищают хроматографией на силикагеле(90 г, растворитель: хлороформ и смесьхлороформа с метиловым спиртом и отношении 60:1) и получают указанноев названии примера соединение в видестеклоподобного вещества светло-желтого цвета (13,0 г).Спектр ЯМР (60 МГц, СРС 1) 9, м,д,:1,0-1,23 (28 Н, м); 2,13-2,43 (ЗН, м, д 5Н 4, Н 5);,3,93-4,10 (2 Н, м, Н);(1 Н, с);.8,13 (1 Н, с),П р и м е р 3 (ссылочный)-, Синтез 9- (1 К, ЗЯ, 4 К)-4-метил,6-(тетраизопропилдисилоксанил)диоксициклонентан-ил 1 гипоксантинаБезводный толуол (30 мл) добавляют к соединению, полученному н ссылоч-55ном примере 2 (13,0 г, 20 ммоль),с последующим концентрированием припониженном давлении. Остаток растворяют н 300 мл безнодного толуола и газообразный азот .барботируют в раствор в течение 20 мин, После добавления гидрнда трибутилолона (11 мл,о40 ммоль) раствор нагревают при 80 Си добанляют кристаллический Ы,о -азобисизобутиронитрил (АИБН) (820 мг)четырьмя частями с 15-минутными интервалами. После 3 ч нагревания приперемешивании растворитель удаляютпри пониженном давлении. Полученноемасло очищают хроматографией на силикагеле (80 г, растноритель: хлороформ и смесь хлороформа с метилонымспиртом н соотношениях 60:1 - 30:1)и получают указанное н названии примера соединение в ниде бесцветногостеклоподобного вещества (10,4 г).Перекристаллизацией части полученного продукта из этилового спирта подуочают беспветные .иглы, т.пл, 200-202 С.,Спектр ЯМР (60 МГц, СВС 1 з), м.д,:0,93-.1,20 (28 Н, с); 1,97-2,53 (5 Н,4,43-5,27 (2 Н, мэ Н Нз)787 (1 Нхс); 8,20 (1 Н, с) .П р и м е р 4 (ссылочный). Син"тез 9- (1 К, ЗК, 4 К)-4-(монометокситрифенилметилокси)-метил-гидроксилциклопентан-ил-(1-метоксиме-:тил)гипоксантина.Соединение, полученное в ссылочномпримере 3 (19,8 ммоль), растворяютн 240 мл безводного диоксана и к раствору быстро добавляют гидрид натрия(880 мг, 21,8 ммоль) при охлаждениильдом и перемешинании, а затем смесьперемешивают при комнатной температуре 1,5 ч, После этого быстро добавляют к смеси метоксиметилхлорид(2 мл, 21,8 ммоль) при охлаждениильдом, Всю смесь перемешивают при .комнатной температуре 3 ч,Растноритель удаляют при пониженном давлении, а масляный остатокрастворяют в 200 мл хлороформа. Раствор промывают буфером 0,1 М бикарбоната триэтиламмония (ТЭАЬ) (рН 7,5,2 раза по 100 мл) и далее водой(200 мл), сушат безводным сульфатомнатрия и концентрируют при пониженном давлении, Полученный сироп очищают хроматографией на силикагеле (колокка 5,3 х 7,0 см, растворитель: ацетоновая вода, 55 - 80%), что даетбесцветное стеклоподобное соединение(8,5 г).Это соединение (8,0 г) растворяютн 32 мл тетрагидрофурана (ТГФ) и до 5 15618 бавляют тригидрат Атористого тетрабутиламмония (ТБЛФ ЗН О) (10 г) и смесь перемешивают при комнатной темпера туре полчаса. Растворитель удаляют при пониженном давлении, а оставшееся масло растворяют в 100 мл воды, Раствор промывают диэтиповым эАиром (2 раза по 100 мл) и из него устраняют соль тетрабутипаммончя обработкой 10 на ионообменной смоле Доуэкс(пиридиновая Аорма, 60 мл).Элюент и промывочные воды (240 мл)объединяют и концентрируют, а концент 16рат обезвоживают азеотропно тремяпорциями пиридина. Остаток растворяютв 100 мл пиридина, добавляют хлористый монометокситрифенилметил (ЕФЕТФМХ)(5,4 г) и смесь перемешивают при 2037 С 4 ч. Растворитель удаляют припониженном давлении, а масляный остаток распределяют в 0,1 М буАерномрастворе бикарбоната триэтиламмония(50 мп) и в .хлороАорме (100 мл), органический слой промывают водой(100 мл), сушат безводным сульфатомнатрия и концентрируют при пониженном давлении, а концентрат обезвоживают азеотропной дистилляцией с то-. 30луолом. Получают бесцветный сироп.Фракцию 0,1 М буАера бикарбоната триэтиламмония и промывочные воды объединяют и концентриРуют, при этом восстанавливают монометокситрифеннлметилированное соединение. Это соединение очищают на смоле НР(190 мл;растворитель. "вода и ЗОХ-ная смесьэтанол - вода) и после концентрирования и азеотропной дистилляции с пиридинбм монометокситрифенилметилируютаналогично описанному. Оба полученных при этом соединения объединяют,очищают хроматограАией на силикагеле(80 г; растворитель: смесь хлороформа и метанола в отношении 100:1, 60:1,50:1) и получают бесцветный стекловидный продукт (6,1 г). Раствор частиэтого продукта в дихлорметане, еслиего приливать по каплям к н-гексайу, 50дает белый порошок,Спектр 51 МР (60 МГц, СЭС 1) , м.д3,40 (2 Н, м, Е 16); 3,45 (ЗН, с,СН)ОСН); 3,80 (ЗН, с)р 4,30-4,57 ББ)растворяют в 490 мл этилового спиртаи при нагревании с обратным холодильником быстро добавляют теплый 5 Мводный раствор гидроокиси натрия(130 мл)Нагревание с обратным холодильником продолжают дополнительно40 мин; Затем растворитель удаляютпрц пониженном давлении. Масляный остаток растворяют в 200 мл хлороформаи промывают водой (2 раза по 100 мп),затем О, 1 М буАером бикарбоната триэтиламмония (2 раза по 100 мл)И далее насыщенным водным растворомхлористого натрия (100 мп), сушатбезводным сульфатом натрия, концентрируют при пониженном давлении и по.лучают сироп. Очисткой этого сиропахроматографией на силикагеле (90 г;растворитель: смесь хлороАорметанопав соотношении 100:1 - 20:1) получаютбесцветный стеклоподобный продукт(3,2 г). Раствор части этого продукта в хлороАорме, добавляемый по каплям к н-пентану при перемешивании,дает белый порошок. Моп. вес 521,616.Вычислено, I." С 69,08; Н 6,38;И 10,74.С ОН И, 04 0,5 Н О.Найдено, Е: С 69,14; Н 6,09;И 10,54.Спектр ЯМР (100 МГц, СПС 1) Р,м,д,: 1,36-2,52 (5 Н, м); 3,00-3,40(ЗН, м, К , ОН)р 3,77 (ЗЕ 1, с) р 4,124,60 (2 Н, м, Н К); 4,80-5,28 (2 Н,ш. с, Н); 5,64-6,44 (2 Н, ш.с, К);6,76-6,94 (ЗН, м); 7,15-7,48 (12 Н, мЕш,с),П р и м е р 6 (ссыпочный), Синтез1- (1 К, ЗБ, 4 К)-4-(монометокситрифенилметилокси)-метил-оксицикпопентан-ил-карбамоип-(И-бензоилЬ-метилизотиокарбамоил)аминоимида-зола 1,Соединение, полученное в ссылочномпримере 5 (0,88 г, 1,7 ммоль) растворяют в 25 мп безводного ацетона ипри нагревании с обратным холодильни,ком в течение более 10 мин по каплямдобавляют раствор бензоилизотиоцианата (260 мкп, 1,9 ммопь) в ацетоне(8 мл). Растворитепь удаляют при пониженном давлении, а полученное стек.-.ловидное вещество светло-желтого цвета очищают хроматографией на силикагеле (15 г, растворитель: смесь хлороформа и метилового спирта в отношении 50:1 - 30:1) и получают светложелтое стекловидное соединение(0,87 г). К этому соединению (0,84 г,1,2 ммоль) добавляют небольшое количество ацетона и полученный сироппревращают в гомогенный .раствор доФ,бавлением 12,5 мл 0,2 .н. гидроокисинатрияи воздействием ультразвука,При перемешивании добавляют диметилсульфат (130,мкл, 1,4 ммоль), затемэнергичное перемешивание продолжаютпри комнатной температуре 1 ч, Реакционную смесь смешивают по частямс хлороформом (хлороформ добавляютдва раза по 15 мл), органичесКий слой 20промывают 0,1 М буфером бикарбонататриэтиламмония (3 раза по 15 мл),затем насыщенным водным растворомхлористого натрия (20 мл), сушатбезводным сульфатом натрия, концентнрируют при пониженном давлении, аостаток очищают хроматографией насиликагеле (15 г, растворитель: смесьхлороформа и метилового спирта в отношении 100:1 - 60:1), К полученному ЗОтаким образом стекловидному веществудобавляют небольшое количество дихлорметана, смесь по каплям добавляютк гексану полученный осадок собирают центрийугированием, сушат и получают целевое. соединение в виде порошка (400 мг). Мол. вес. 689,835.Вычислено, %: С 67,90; Н 5,70;В 10,15Сзз Н 11 зО40Найдено, %: С 67,45 Н 5,45;Н 9,89.Спектр ЯМР (100 МГц, СПС 1), м.д.:1 34-2,60 (5 Н, м); (2,52 (ЗН, с,3 СНз);. 3,04-3,44 (ЗН, м, Н 6)," 3,79 45( н, -).11 р и м е р 7 (ссылочный). Синтез9- (1 К, 38, 4 К)-4-монометокситрифенил-метилоксиметил-оксициклопентанилгуанина,Соединение, полученное в ссылочномпримере 6 (360 мг, 053 ммоль) добавляют к теплому 6 й; раствору гидроокиси натрия (18 мл) и смесь нагревают с обратным холодильником 1 ч. Продукт экстрагируют .из реакционнойсмеси .хлороформом экстракт промываютО, 1 н, буфером бикарбоната триэтиламмония (30 мл), затем насыщенным водным раствором хлористого натрия(30 мл), сушат безводным сульфатом натрия и подвергают хроматографиина силикагеле (8 г, растворитель:смесь хлороформетилового спирта в отношении .40:1 - 6:1). К полученномутаким образом стеклообразному веществу добавляют небольшое количествоацетона, смесь по каплям добавляютк бензолу, полученный осадок собираютцентрифугированием, сушат и получаютцелевое соединение (указанное в названии примера) в виде порошка(210 мг), Ме , нес, 555, 663,Вычислено, : С ьО И 5,99:И 12,60,С,НИ О 1,."Найдено %.6/,О, " 5,бо;И 12,42,Спектр НИР (100. МГ. пиметилсульсЪОксид с 1 )и р м.д, 0 ,60 (5 Н,м); 3,01 (2 Н, ш, с);."," 4,20 (1 Н,м);с, На); 10,60 (Н, ь,с. 2 Н;,Пример 8 (с,ыл пни9- (1 К, 38, 4 К)-4-оксиметил- "-ок;и.циклопентан-ил -гуанина.Соединение, полученное в сном примере 7 (180 мг, 0,33 ммсльрастворяют в 10 мл 80%-ной уксус:.;кислоты, раствор перемешивают при40 С в течение 4,5 чРастворительудаляют при пониженном давлении идалее два раза проводят азеотропнуюдистилляцию с водой. Добавляют воду(10 мл), смесь промывают эфиром (двараза по 10 мл) и удаляют воду при пониженном давлении, получают указач.ное в названии примера соединениев виде бесцветных кристаллов (41 мг),т.пл. 246-248 С.0/ =+7,7 (С=0,5,диметилформамид),макс (нанометры)(имидаз ол-ил) -тиокар бонил-дез ок-.сиаристеромицин, 5й /М -бензоил-0-(4,4 -диметокситрифенилметил)-2 -дезоксиаристеромицин (2,5 г) растворяют в 10 мл сухого дихлорметана, к раствору добавляют тиокарбонилдиимидазол (8,0 г) и 10мешивают при комнатной темпера 20 ч, Реакционную смесь концентлосуха и подвергают очистке,тиловый эфир уксусной кислоты).о5 цают стекловидное вещество светкелтого цвета, выход 2,2 г,Спектр 5 РР (90 МГц, СЭС 1)м,д.: 3,80 ,бН, 82 СНБО-), 8,35 (1 Н 20П р и м е р . Я -оензои"6 -О(4,4 -диметокситрлфенилметил)-2 ,3 дидезоксиаристеромицин,Производное 3 -тиокарбонила, полученное в примере 1 (2,0 г), растворяют в 20 мл сухого диоксана, к полу-,ченному раствору по каплям добавляютраствор гидрида трибутилолова (4,5 г)в сухом диоксане (10 мл) при нагреванин с обратным холодильником. Темвременем постепенно добавляют кристаллы с с -азобисизобутилонитрила(500 мг). Добавление по каплям заканчивают за 20 мин, а нагревание с об-.ратным холодильником продолжают 2 ч,Растворитель выпаривают при .пониженном давлении, масляный остатокочищают хроматографией на силикагеле(40 г, растворитель: хлороформ) и получают Ьесцветный порошок (1,1 г),Спектр ЯМР (90 МГц, СЭС 1)цм.д.: 3,80 (6 Н, , 2 СНО-); 4,80-5,20(1 О г), растворяют в небольшом количестве пиридина, к раствору добавляют 50 мл концентрированной аммиачнойводы и нагревают в герметичной трубке, рассчитанной на давление, при60 ОС 5 ч. Реакционную смесь концентрируют досуха, к остатку добавляют8 ОХ-ную уксусную кислоту (100 мл) инагревают при 60 С 2 ч с последующейконцентрацией реакционной смеси досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в воде (100 мл) и дважды промывают воцой, Водный слой концентрируют,досуха, остаток превращают в порошок в эфире и получают 2,3 -ди/ дезоксиаристеромицин (0,23 г). Мол. вес 251; 29.УФ-спектр:НО макс (нм): 260.Вычислено, Х: С 52,57; Н 6,82;И 27,87.С, Н, И О "НО.Найдено, Х: С 52,83; Н 6,95;Б 27,54.-Полученный таким образом 2 ,3 -дидезоксиаристеро"ицин растворяют в эквивалентной п весу 1 н, соляной кислоте. После концентрирования добавляют этанол и раствор концентрируют досуха.Эту процедуру повторяют несколько разОстаток лерекристаллизовывают из горячего э-:.лового спирта и получают кристалле .ли хлористоводородной кислоты, т и;. 173-175 С. Мол,ве 278, 73,Вычи.лена, Х:47,40; Н 6,15;И 25, 12; С 1 12,72/о" - Ь,79 =0,61, Н О). П р и и е р 4. Соединение, полученное в ссылочном примере 8 (2,5 г),обраЬатывают .по примерам 1 - 3 и получают кристаллический порошок 9(18, 4 К)-4-оксиметилциклопентанилгуанидиан (0,3 г), т.пл. 269 С,Мол. вес,249 27.УФ Я рНмакс (нм) 255, 280 (из-гиб пика);УФ 9 Н О макс (нм): 253,270 (изгиб);УФ фрН 10 макс (нм): 258 (изгиб),270.Вычислено, Х: С 53,00; Н 6,07;М 28,10.С ц Н 1501 фНайдено, Х: С 52,81; Н 5,86;И 27,83.0/р - 4,74 (С=0,57, диметилформамид),9- (18, 4 К)-4-Оксиметилциклопентан-ил 3 гипоксантин получают, еслитбвместо Б -бензоил-Ь -0-(4,4 -диметокситрифенилметил)-3 -0-1(имидазолил)-тиокарбонил 1-2 -дезоксиаристеромицина в примере 1 обрабатывают про-.1561826 Вычислено, %: С 70,04; Н 5,88;М 10,54. 55 изводное гипоксантина способом, попримерам 1 - 3, Мол. вес 234,25.Вычислено, %: С 56,40; Н 6,02;И .23,92.С и Н а 114 ОаНайдено, %: С 56,81Н 6,33;И 24,52,П р и м е р 5. 9- (1 Б, 4 К)-4-Оксиметилциклопентан-ил 1 гуанин,101. Синтез 9- (1 К, ЗБ, 4 К)-4-оксиметил- гидроксилциклопентан-ил 1гипоксантина.Соединение, полученное в ссылочномпримере 3 (12,4 г, 20 ммоль), растворяют в 200 мл толуола и в смесь добавляют йтористый тетрабутиламмоний(10,46 г, 40 ммоль) с последующим нагреЬанием при 75 С 2 ч. Реакционныйраствор концентрируют досуха и растворяют в воде, Раствор подвергаютобессоливанию 30 г активированногодревесного угля, неочищенный продуктперекристаллизовывают из смеси метилового спирта и этилового вфира и получают бесцветные кристаллы (4,6 г),т.пл. 170 С, Мол. вес 268,27.Вычислено, Х: С 49,25; Н 6,01;Ю 20,88.С Ниао, Н,О. 30Найдено, Х: С 49,08; Н 5,86;М 20,81.2. Синтез 9- (1 К, ЗБ, 4 К)-4 -Монометокситрийенилметилоксиметил-гидроксилциклопентан-илгипоксантина,Кристаллическое соединение (2,3 г,9,2 ммоль), полученноеописанным методом (1), растворяют в 100 мл пиридина с последующим добавлением монометокситрифенилметилхлорида (3,1 г 4010.ммоль), а затем перемешивают прикомнатной температуре в течение 5 ч.Реакционный раствор очищают хроматограйией на силикагеле (80 г, растворитель: смесь хлороформа и метилового 45спирта в отношении 40:1 - б:1) и полуГчают желаемый продукт в виде порошка(4,3 г).Часть полученного продукта перекристаллизовывают из смеси хлорооформа и эфира, т.пл. 244-246 С.Мол. вес 531,60. Н И Оф НоеНайдено, %: С 70,39; Н 5,77; И 10,38,. 3, Синтез 9 (1 Б, 4 К) -4-мономе токситрийенилметилоксиметилциклопентан 1-ил 7 гипоксантина.Соединение, полученное описаннымметодом (2) (4,32 г, 8,27 ммоль),растворяют в 70 мл толуола с последующим добавлением тиокарбонилдиимидазола (22 г, 12,4 ммоль) и перемешивают при комнатной температуре 5 ч,Реакционный раствор концентрируютдосуха, остаток очищают хроматографией на силикагеле (80 г, растворитель:.смесь хлороформа и метанола вотношении 100:1 - 60:1) и получаютпорошок бледно-желтого цвета (5,2 г).Полученный таким образом продуктрастворяют в 90 мл толуола и подвергают реакции с гидридом трибутилолова (3,4 мл, 12,4 ммоль) и р, Ы-азоби,сизобутилонитрилом (270 мг, 1,6 ммоль)методом по ссылочному примеру 3 с последующей очисткой хроматограйиейна силикагеле (100 г, растворитель;этиловый эйир уксусной кислоты и метиловый спирт в отношении 9:1) и получают желаемый продукт (1,63 г),Часть продукта перекристаллизовываютиз смеси раствора метилового спиртаи этилового эйира, т.пл. 175-177 С.Мол. вес 531, 60.Вычислено, %; С 72,21; Н 6,06;И 10,87,С НзоИао 0,5 НО.Найдено, %: С 72,69; Н 5,88;И 10,.92,4. Синтез 9-(1 Б, 4 К)-4-оксиметилциклопе нтан-ил гуанина.Желаемое соединение может бытьполучено по ссылочным примерам 4-8 сиспользованием соединения, полученного методом (3).П р и м е р 1 (тестовый)Материалы и методы,Клетки. Были использованы в данномисследовании линия клеток-носителейлимйотропного Т-клеточного вируса человека тип 1 (НПЛ) МТи линияклеток-продуцентов лимфотропногоТ-клеточного вируса человека тип 111(Н"П,Ч) Мо 1-4/НЫЛ, Клетки содер.жались в среде КМ 1, 1640 с с добавлением 10% йетальной телячей сыворотки,100 МЕ пенициллина и 100 мкг стрептомицина на 1 мл при 37 С в инкубаторев атмосйере углекислого газа.Вирус и вирусная инйекция. Линйотропный вирус Т-клеток человека (НТ)был получен из недостаточной культуры13 14 1561826 концентрации выращивали как в отсутствии, так и н присутствии различных,дидезоксинуклеозидов в инкубаторе прио,37 С в атмосАере углекислого газа втечение б дней,Оценка цитопатического действия,.индуцированного Н 1 Ч-НН.Ч/1.АЧ, Индуцированный Н 1 Ч-НТ 1 Л/1.АЧ цитопатическийэААект анализировали путем измеренияуменьшения численности жизнеспособных клеток. Выжившие клетки-подсчитывали методом исключения скрашиваниятрипановым синим погибших клеток,Оценка антигенной экспрессии Н 1 ЧНТ 1.Ч О.АЧ.Зараженные вирусом. Н 1 Ч-НПЛ клеткиМТс вирусоспециАическими антигенами подсчитывали непрямым иммуно-Алуоресцентным методом (ИФ), Фиксированные в метаноле клетки инкубировалис разбавленной антивирусной сывороткой человека (протин вируса НХЧ-НПЛ 111) н течение 30 мин при 37 С. Затемпрепараты промывали н течение 15 минфосфатным буАерным раствором, содержащим 0,15% хлористого натрия. Клетки окрашивали Алуоресцеинизотиоцианатои, сопряженным с кроличьими антителами против человеческого иммуноглобулина С (продукт Ра 1 орраМз А/.Б.СорепЬо 8 еп, Репшагк) 30 мин при 37 С 4и снова промывали АосАатным буфернымсоленым раствором. Под Алуоресцентным микроскопом было подсчитано более500 клеток и вычислен процент ИФ-положительных клеток. Формула из о бре тения г 2 имеет чказанные начения, а оном основ имеющиеся и пуринии амино- и гидзащищены; сигруппы один из К,оставитель И,федосееваехред Л.Сердюкова Корректор Л.Патай едактор М.Петрова Заказ 985 Тираж 301 ПодписноеНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский коибинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,10 клеток-продуцентов Мо 1 - 4 способом,описанным ранее н Чдго 1 о 8 у, 146, 272,1985 Титр этого вируса бх 10 цитопатических ед/мл. Заражение клетокносителей МТвирусом НТЕЧпроводили при кратности инАекции 0,002.Клетки смешивали с вирусным раствором и выращивали 1 ч при 3 С, Послеабсорбции зараженные клетки промывали и повторно суспензировали н свежей среде до концентрации Зх 10 клеток на 1 мл. Суспензии клеток такой Из приведенной оценки бало заключено, что предлагаемые соединенияимеют выраженную антивирусную активность (протин Н 1 Ч НТ 1.Ч -111/1,АЧ. В случае 2 ,3 -дидезоксиаристеромицина(пример 3) эААектинная концентрациясоставляет 50-100 мкмоль, а цитотоксичность наблюдается при 5001000 мкмоль соответственно, В случае 9-(18, 4 К)-4-гидроксиметилциклопентан-ил 1 гуанина (пример 5)эААектинная концентрация составляет100-200 мкмоль, а цитотоксичность 15 наблюдается при 500-1000 икмоль соответственно. 20 Способ получения карбсциклическихпуриноных нуклеозидов общей Аормулы 1.НО 64 125где У - пуриноное основание аденинил, гуанин-ил,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,соединение общей формулы 116 5 и К - гидроксильная группа, а другой - водород,подвергают в положении 2 или 3 5 тиокарбонилированию при комнатнойтемпературе с последующим восстановлением гидридом трибутилолова в присутствии о,М-азобисизобутиронитрила при 80 - 100 С и снятием защитных групп.