Способ получения октапептидов

(23).Приоритет . - (32)18. 01. 81 Гевудврствшшый квшнтет СССР а двяан звврвтвнвтрыт(53) УВК 547.964, .4.07(088.8) Дата опубликования описания 31. 01. 83(72) Авторы изобретения Иностранцы Ольга Ньеки, Лайош Кишфалуди,Эгон Карпати и Ласло Спорни(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОКТАПЕПТИДОВ Изобретение относится,к получению октапептидов, обладающих биологической активностью, которые могут найти применение в медицине для диагности ки и терапии. 5В пептидной химии широко используется способ получения пептидов путем отщепления защитных групп от соответствующих пептидных производных тиолизом (в случае динитрофенильной защит" то ной группы гистидина) 1.1 ).и каталитическим гидрированием (в случае,:например, бензилоксикарбонильной группы, нитрогруппы и т.п.) 12Использование известных методов позволяет получить новые соединения, обладающие интересными фармакологи" ческими свойствами.Цель изобретения " получение новых октапептидов, расширяющих арсенал о средств воздействия на живой орга- . низм.Поставленная цель достигается тем,. что согласно способу получения октапептидов общей формулы 2Х-Агд-Ча 6-Ту гтец-Нэ-Р го-У-ОАЭИ),где Х=Ьаг;т-остаток молочной кислоты, или-2-окси-метилвалериановойкислотыА-водород, этилузащищенный октапептид обще формулы2-Х-Агд(МО) -Чад-Туг(ВИ) -1 ец-Н 1 з(Опр)-Рго-У" Г.( 1)где 2 - бенэилоксикарбонил;Х и т имеют 1, указанные значения;Вл 8 - бензил;Опр - динитрофенил;Г - этил, бензил,обрабатывают 2-меркаптозтанолом дляотщепления динитрофенильной защитнойгруппы гистидина, а затем остальныезащитные группы отщепляют каталитическим гидрированием.,Синтез исходных защищенных октапептидов осуществляют ступенчатым наращиванием пептидной цепи с использованием пентафторфениловых эфиров соответствующих й- трет.бутилоксикарбониламинокислот.99381 П р и м е р 1. Первая стадия.Раствор 2,15 г (1 О ммоль) Вос-Рго-ОН в 10 мл безводного тетрагидрофурана охлаждают до ОоС и прибавляют к нему при перемешивании порциями в течение 10 мин 2,4 г (15 ммоль) карбонилдиимидазола. Затем смесь добавляют порциями в течение 15 мин при ОоС к раствору 1,8 г (1 О ммоль) бензилового эфира молочной кислоты в 10 мл безводного тетрагидрофурана, перемешивают 30 мин при 0 С, 2 ч при 3В приведенных примерах использованы следующие сокращения:1.ас - 1.-молочная кислота;НМУ - -2-окси-метилвалериановаякислота; 5РГР " пентафторфенил;Вос - трет.бутилоксикарбонил;ВкВ - бензил;2 " бензилоксикарбонил;Опр - динитрофенил. 10При тонкослойной хроматографии используют ппастинки с силикагелем=4:1:5 (верхняя Фаза) 257 н-бутанол:уксусная кислота:пиридин:вода = 30:6:20:248 н-бутанол:этилацетат:уксуснаякислота:вода = 1:1;1:1.Для обнаружения пятен используют 5раствор нингидрина и смесь хлортолидин/йодистый калий.Очистку конечных октапептидов осуществляют с помощью колоночной хроматографии на колонке, содержащей 0,5 лкарбоксиметилцеллюлозы (КМС), пред 35варительно уравновешенной 0,01 М раствором уксуснокислотного аммония.Очистку осуществляют в режиме градиентного элюирования с применением1,5 л О О М и 1,5 л Р,4 М растворовуксуснокислого аммония, которые подают через градиентный смеситель со скоростью 25 мл/ч. фракции, содержащиечистый конечный продукт, подвергают45лиофилизации. б 420 С и выдерживают в течение ночи в холодильнике. Затем отгоняют растворитель, остаток растворяют в 30 мл хлороформа, экстрагируют 1 н, раствором соляной кислоты (4 раза по 1 О мл), водой, 10.мл водного раствора кислого углекислого натрия и водой, Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают до постоянного веса. Остаток сушат над Р 205;Получают 3, 0 г Вос- Р го- а с- О Вг 6 (807. от теоретического выхода) Я(11= =0,32; Я у =0,57Вторая стадия. Е-Ьаг-Агд(МО ) -Уа ьл2 -Туг(ВгЬ) - Й-Яз(Опр) -Рго-.ас-ОВгЫ.2,35 г (7,5 ммоль) Вос-Рго-ас-ОВОЩЬ растворяют в 15 мл 3 н. раствора НС в диоксане, выдерживают 15 мин, добавляют 30 мл безводного эфира и упаривают досуха. Полученный в остатке хлоргидрат свободного дипептида НС 8.Н-Рго.ас-ОВг 1. Я( -- 0,37 растворяют в 20 мл диметилформамида, доводят рН раствора до 8 прибавлением триэтиламина и прибавляют 2,9 г (5 ммоль) Вос-Н 15(Опр)-ОРГр. Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре и рН 8,0, отгоня-. ют растворитель. Остаток растворяют в этилацетате, экстрагируют 03-ным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, 54-ным водным раствором кислого углекислого натрия и водой, Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием, отгоняют растворитель. Полученный в остатке защищенный трипептид Вос-Н 15(Опр)- -Р го.ас-ОВгй (Яр 0,77) растворяют в21О мл 8 н. раствора НСВ в диоксане, через 20 мин прибавляют безводный эфир, выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром, Полученный хлоргидрат свободного трипептида НС 6 Н-Н 15(Опр) -Рго.ас-ОВгВ (Я =0,10) растворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора прибавлением триэтиламина доводят до 8,0 и добавляют 2,78 г (75 ммоль) ВосЬ-ОРГр, Реакционную смесь перемешивают в .течение 1 ч при рН 8,0, отгоняют растворитель, остаток растворяют в этилацетате, экстрагируют 10-ным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, 54-ным раствором кислого углекислого натрия и водой. Затем органическую Фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток растирают с н-гексаном и от16 4кислоты и водой. Органическую фазусушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток растираютсо смесью этанола и эфира (1;) -и про"дукт отфкльтровывают, Полученный за",щищенный гептапептид Вос-Агц(МОФ)- -Ча 3-Ту г (Вг ) -1 1 е-Н 15 (Опр) "Р го.ас"-ОВк (й=0,65) растворяют в 10 мл8 н. раствора НС в диоксане, церез15,мин прибавляют безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободногогептапептида НС 6 Н-Агд(МО )-Ча-Ту 1.(й =0,40) отфильтровывают, промываютэфиром и сушат. Затем полученный продукт растворяют в 15 мл диметилформамида, рН раствора прибавлением триэтиламина доводят до 8,0 и добавляют1,8 г (5 ммоль) Е-айаг-ОР 1 р. Смесь пе"ремешивают 30 мин при рН=8,0, разбав- . ляют 60 мл хлороформа и экстрагируютводой, Органическую фазу сушат над безводным сульФатом натрия и упаривают. Остаток растирают безводным эфиром и продукт отфильтровывают.В итоге получают 2,12. г (29,63 от теоретического выхода, рассчитанногона гистидин) У-айаг-Ау(МО)-ЧаС-Туг(В 3) -1 е-Н 15(Опр) -Рго.ас-ОВг 1 Т. пл.204-213 ОС; (йэ 1=0,465) .Третья стадия. Н-айаг-Агс 1-Чаб-Туг 1 е Н 5 Ргоас-ОН. МО1,45, г (,1 ммоль) Х-айаг Агу-Ча 1- -Туг(Вгй) -1 Ре-Н 15(Опр) -Рго.ас-ОВЕ растворяют в 5 мл диметилформамида и смешивают с 2,3 мл (30 ммоль) 2-меркаптоэтанола. Смесь перемешйвают 1 ч прибавляют безводный- эфир, выпавший осадок растворяют в метаноле и вновь осаждают, прибавляя эфир. В итоге получают 1,14 г.(894 от теоретического выхода) Е-айаг-Агу(МО) -Чай-Туг(В 2.Т)- 1 Йе Н 5 Р го 1 ас ОВ 21 (й =060) .(+1Полученный продукт растворяют в 40 мл смеси метанола, уксусной кислоты и воды (5; 1:2). Раствор смешивают с 0,6 г 10-ного палладиевого катализатора на активированном угле, после чего через реакционную смесь при интенсивном перемешивании пропускают в течение 0 ц газообразный водород; Затем катализатор отделяют Фильтрованием, промывают смесью метанол-уксусная кислота-вода (5: 1: 1) и объединенный Фильтрат упаривают, Остаток растирают с безводным этанолом и продукт отфильтровывают.Получают .0,7 г (84 от теоретического выхода) Н-Ьа г-Агу-Ча 1-Т уге 5 9938 фильтровывают. Полуценный защищенный тетрапептид Восе-Н 15-(Опр)-Рго" -1.ас-ОВя (й=0,67) растворяют в10 мл 8 н. раствора НС 1 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный 5 эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного тетрапептида НС 1 Н3 е" -Н 15(Опр)-Рго-.ас-ОВяй (й( =0,52) отделяют, растворяют .в 20 мл диметилформамида, рН. раствора прибавлением 1 в триэтиламина доводят до 8,0 и прибавляют 3,24 г (6 ммоль) Вос-Туг(Ве)- -ОРтр. Смесь перемешивают, при рН 8,0 30 мин, упаривают, остаток растворя,ют в этилацетате и раствор смешивают 5 сс 0,22 мм й,й-диметиламиноэтанола, выдерживают 15 мин. Затем раствор экстрагируют 10-ным раствором лимсуной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, водой, 5 Ф-ным раствором кис лого углекислого натрия и водой, Органическую Фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток растирают со смесью н-гексан-эфир (8:2) и отфильтровывают. Полу ценный защищенный пентапептид Вос-Туг(ВВ)-1 е-Н 15(Опр)-Рго.ас-ОВе 2 (й-0,72) растворяют в 10 мл 8 н, раствора НС 2 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир и выпавший 30 осадок хлоргидрата свободного пентапептида НСь-Н-Туг(Вкй)-10 е-Н 15(Опр)- -.Ргоас-ОВя 6 растворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2;6 г (6,8 ммоль) Вос-Чаь-ОРГр. Смесь перемешивают 1 ч при рН 8,0 и. упаривают. Остаток растворяют в этилацетате и раствор экстрагируют как .описано выше. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают, Полученный защищенный гексапептид Вос-Ча 3-Туг(Вг 1) -18 е-Н5(Опр) -Р го- -1.ас-ОВг 1 (й=0,83) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС 1 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного гексапептида НС 1-Н-На 0- -Туг(Вг 1)-1 1 е-Н 15(Опр).-Рго.ас(й 51=0,65) растворяют в 20 мл диметилформамида,. рН раствора доводят до 8,0, прибавлением триэтиламина, и прибавляют 2,2 г (5 ммоль) Вос-Агя(МЯ -ОРГр. Смесь выдерживают 1 ч при рН 8,0, разбавляют 60 мл,хлороформа и экстрагируют 1 О/-ным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной-Н 15-Рго.ас-ОН, который подвергаюточистке по описанной. выше общей мето;дике. В итоге получают целевой продукт, имеющий следующие храктеристи-,ки: К =0,17; В=0,40; Р=0,21,Аминокислотный анализ: Рго 1,0 (1);Чай 1,0 (1); 2 е 1,03 (1); Туг 0,85(1)12 о -101,3 о(С 0 25;н,уксусная кислота). 10П р и м е р 2. Яаг-Агу-Ча 5-Туге-Нз-Рго.ас-ОИПервая стадия,4,3 г (20 ммоль) Вос-Рго-ОН растворяют в 20 мл безводного тетрагидрофурана, раствор рхлаждают до ОС и в течение 10 мин к нему прибавляют порциями 4,8 г (30 ммоль) карбонилимидаэола. Затем при 0 С по каплям прибавляют охлажденный до 0 С раствор 2,1 г 20(20 ммоль) этилового эфира молочнойкислоты в тетрагидрофуране. Реакционную смесь перемешивают 30 мин при 0 С,о2 ц при 20 С и оставляют на ночь. Затем тетрагидрофуран удаляют отгонкой. 25Остаток растворяют в 40 мл этилацетата и раствор экстрагируют 1 н. раствором соляной кислоты (2 раза по 15 ил)водой, 5 -ным раствором кислого углекислого натрия (2 раза по 20 мл) иводой, Органическую фазу сушат надбезводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток сушат в эксикаторедо постоянного веса.В итоге полуцают 222 г (36 оттеоретического выхода) Вос-Рго.ас-ОЕ в,"=0,77; в 1=0,36.Вторая стадия 2-Яаг-Агд(МО 2)-Ча=-Туг(Вг)-1 йе-Нз(Опр)-Рго-.ас-ОЕй1,8 г (6 ммоль) Вос-Рго.ас-ОЕ раст.- 4 Оворяют в 8 мл 7,5 н. раствора НСВ вдиоксане, через 15 мин прибавляют30 мл эфира и упаривают. Полученныйв остатке НС 1 Н-Ргоас-ОЕ (141=0,31)растворяют в 15 мл диметилформамида, 45рН раствора прибавлением триэтиламина доводят до 8,0, и добавляют 2,9 г(5 ммоль) Вос-Нз(Опр)-ОР 1 р, Смесьвыдерживают 1 ч, упаривают и остатокрастворяют в этилацетате, Полученныйраствор экстрагируют 10 -ным раство 50ром лимонной кислоты, 1 н. растворомсоляной кислоты, 5 -ным растворомкислого углекислого натрия и водой.Органическую фазу сушат над безвод- .ным сульфатом натрия и упаривают. По 55луценный,в остатке защищенный типептид Вос-Н5 (Опр) -Р го.ас-ОЕ 1 (ВГ=0,69) растворяют в 20 мл 7,5 н. раст 16 8вора НСФ в диоксане, через 20 мин прибавляют безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного трипептида НС 5 Н-Н 5(Опр)-Рго.ас-ОЕ (В= =0,18) растворяют в 15 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и добавляют 3,0 г (7,5 ммоль) Вос-Ь-ОР 1 р. Смесь выдерживают при рН=8,0 30 мин, упаривают и остаток растворяют в этилацетате. Полученный раствор экстрагируют как описано выше, Органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают со смесью эфир-н-гексан (2;8) и продукт отфильтровывают. Полученный защищенный тетрапептид Восе-Н 15 (Опр).-Р го.ас-ОЕ с (В 1- - 0,36) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС 1 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного тетрапептида НО 1 Не-Н 1 з (Опр)-Рго.ас-ОЕ (й(Я=0,27)Э растворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и добавляют 3,24 г (7 ммоль) Вос-Туг(ВгВ)-ОРГр, Смесь выдерживают 30 мин при рН=8,0 и упаривают. Остаток растворяют в этилацетате и раствор смешивают с 0,22 мл М,й-диметиламиноэтиламина, Через 40 мин раствор экстрагируют как описано выше. Органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с н-гексаном и продукт отфильтровывают. Полученный защищенный пентапептид Вос-Туг(Вгь)- -11;е-Н (О р)-Рт-ОЕй (К 21 -- 0,64) растворяют в 1 О мл 8 н. раствора НС 1 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного пентапептида НС 8 Н-Туг(Вг 1) -1 1 е-Нэ(Опр) -Р го.ас-ОЕ (8141=0,33) растворяют в 15 мл, диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2,1 г (5,5 ммоль) Вос-Ча 1-ОРГр, Смесь выдерживают 30 мин при рН=8,0, упаривают и остаток растворяют в этилацетате. Полученный раствор экстрагируют как описано выше, Органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают, Остаток растирают с н-гексаном и продуктотфильтровывают. Полученный защищенный гексапептид Вос-Ча 5-Туг(Вг 6) -10 е-Н5(Опр) -Р го.ас-ОЕС (В(1=0,76) растворяют в 10 мл 8 н, раствора НС 1 в диоксане, через 15 мин прибарляют, 9 99381 безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного гексапептида НС 1 Н-Чаь-Туг(ВгВ)" 1 Ре-Н з(Опр)-Рго- -1.ас-ОЕй (Риф=0,34) растворяют в 20 мл диметилформамида, рН-раствора 5 доводят до 8,0, прибавлением триэтиламина и смешивают с 3,96 г (6 ммоль) Вос-Агд(МО 2)-ОРЮр. Смесь выдерживают при рН 8,0 1 ч разбавляют 60 мл хлороформа и экстрагируют как описано выше. Органическую. фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с безводным этиловым спиртом и продукт отфильтровывают. Полуценный защищенный гептапептид 15 Вос-Агд(МО 2)-Ча 1;Туг(Вг)-1 е-Н 15 (Опр) -Рго-ас-ОЕй (Р 1=0 78) растворяют в 10 мл 8 н, раствора НС 1 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир, выпавший в осадок хлор гидрат свободного гептапептида рас НСЙ Н-Агд(МО 2) -ЧаО-Туг 1 В ь) -10 е-Н 1 в (Опр)-Рго.ас-ОЕй Р+0,56) растворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2,12 г (5,5 ммоль) 2-Ьаг-ОРГр; Смесь выдер-. живают 30 мин при рН 8,0 и разбавляют 60 мл хлороформа, Полученньй раствор экстрагируют как описано выше, 30 Органическую Фазу сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с эфиром, продукт отфильтровывают и перекристаллизовывают из этанола. ,35В итоге полуцают 1,21 г (17,53 от теоретического выхода, рассцитанного на гистидин) Е-айаг-Агд(М 02) -Чаб-Туг (ВхВ) - 11 е-Я 1 в(Опр)-Рго.ас-ОЕй. Т. пл.208-212 С; Р 11=0,5.40Третья стадия. Н-айаг-Агд-Ча 1:-Туг - 1 1 е-Нз- Р го.ас-ОЕ С.1,21 г (0,88 ммоль) 2-5 аг-Агд(802)- -Ча-Ту г1 е-Н 15 (Опр) -Р гоас-ОЕ растворяют в 5 мл диметилформамида и полученный раствор смешивают с 3 мл 2-меркаптоэтанола. Смесь перемешивают 1 ч, прибавляют безводный эфир, выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром, растворяют в метаноле и вновь осаждают, прибавляя эфир.В итоге получают 094 г(89 от . теоретического выхода) 2-айаг-Агд(МО 2)- -Ча ь-Туг(Вл К) -1 е-Н 15-Р го- ас-ОЕ й(Р =0 59)55олученный продукт растворяют в смеси, содержащей метанол, уксуснуюкислоту и воду (5:1:1). Раствор смешивают с 0,5 г 103-ного палладиевого 6 10катализатора на активированном угле и при интенсивном перемешивании через раствор пропускают в течение 20 ч газообразный. водород. Затем катализатор отфильтровывают, промывают смесью метанол-уксусная кислота-вода (5:1:1) и объединенный Фильтрат упаривают. Остаток растирают со смесью этанол-эфир и продукт отфильтровывают.В итоге полуцают 072 г (96 от теоретического выхода) Н-айаг-Агд-ЧаЧ-Ту ге-Н 5-Рго-ас-ОЕй, который подвергают очистке по описанной выше общей методике, В итоге получают це= левой продукт, имеющий следующие характеристики: Рф=0,24; Р 11=0,53; Р =0,36. Аминокислотный анализ: Рго 1,02 (1); Ча 1 0,97 (1); 11 е 1,08 (1); Туг 0,91 (1); Н 15 1,00 (1); Агд 1,07 (1); Ьаг 1,0 (1).С 20: -73,5 (С= =0,4; 1 н. уксусная кислота).П р и м е р 3. Ьаг-Агд-Ча-Туге-Н 15-Р го-НИЧ-ОН.Первая стадия. Н-НИЧ-ОВу.7,12 г (40 ммоль) Н-НМЧ-ОМа суспендируют в 1 О мл этилацетата и суспензию смешивают с 20 мл 4 н. раствора НС 1, в этилацетате. Смесь перемешивают 2 ц, затем доводят рН смеси до 7 прибавлением триэтиламина, выпавший осадок отфильтровывают, промывают этилацетатом (2 раза по 20 мл). Значение рН объединенного фильтрата доводят до 6,0 прибавлением триэтиламина и добавляют 8 мл (60 ммоль) бензилбромида и 8,4 мл (60 ммоль) триэтиламина. Смесь кипятят 8 ц, образовав шийся осадок отфильтровывают и Фильтрат экстрагируют водой, 1 н. раствором соляной кислоты 54-ным раствором кислого углекислого натрия и водой, Органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. В итоге получают 5,6 г (634 от теоретического выхода) Н-НИ 1-0 Вг 8, который очищают перегонкой в вакууме, Т. кип.184-86 ОС/5 мм рт, ст.; с 25 = - 139 (С=1; ацетон).Вторая стадия, Вос-Рго-НИУ-ОВл 1.2,7 г (12,5 ммоль) Вос-Рго-ОН растворяют в 15 мл безводного тетрагидроФурана, раствор охлаждают до ООС и прибавляют к нему небольшими порциями в течение 10 мин 3,2 г (20 ммоль) карбонилдиимидазола. Смесь. смешивают при 0 С с раствором 2,8 г (2,5 ммоль) Н-НИ 7-ОВг 1 в 10 мл тетрагидрофурана, перемешивают 30 мин при 0 С, 2 ч при11 99381 20 оС и оставляют на ночь в холодильнике. Затем тетрагидрофуран отгоняют, остаток растворяют"в 40 мл этилацетата. Полученный раствор экстрагируютн. раствором соляной кислоты (2 ра за по 15 мл ), водой, 5-ным раствором кислого углекислого натрия и водой. Органическую фазу сушат над без"водным сульфатом натрия и упаривают. Остаток сушат пРи 25 С до постоянно го веса. В итоге получают 3,19 г (653 от теоретического выхода) Вос-Рго-НМЧ- -ОВг й=0,90; Й(1=0,3315Третья стадия. Еаг-Агц(ЙО) -Чаб-Туг(Вг ь) -0 е-Н 5(Опр) -Р го-Н 4 У.-дВг2 р 52 г (6 ммоль) Вос-Рго-НМУ-ОВг растворяют в 8 мл 8 н, раствора НС 1 в диоксане, через 15 мин прибавляют 30 мл безводного эфира и упаривают.Полученный в остатке хлоргидрат сво.бодного дипептида НС 1 т Н-Рго-НМЧ-ОВг (й(4)=0,30) растворяют в 15 мл диметилаориаиида, рН раствора доводят до аа 8,0 прибавлением триэтиламина и прибавляют 2,9 г (5 ммоль) Вос-Нз(Опр).-ОРГр. Смесь выдерживают 1 ч при рН 8,0, упаривают и остаток растворяют в этилацетате, Полученный раствор экстрагируют 1 н. раствором соляной кислоты, водой, 53-ным раствором кислого углекислого натрия. Органическую фазу сушат над безводным серно- кислым натрием и упаривают. Полученный в остатке защищенный трипептидВос-Нз(Опр)-Рго-НМЧ-ОВг 1 (В=0,67) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС 1 в диоксане, через 20 мин прибавляют безводный эфир, выпавший в осадок хлоргидрат свободного трипептида НС 1 т Н-Нз(Опр) Рго-НМУ (В(41=0,18) растворяют в 15 мл диметилформамида, доводят рН раствора до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2,4 г (6 ммаль) Вос-е-ОРГр. Смесь выдер 45 живают 1 ч при рН=8,0 и упаривают.Остаток растворяют в хлороформе и раствор экстрагируют водой, 1 н. раствором соляной кислоты и 53-ным .раствором кислого углекислого натрия. Орга О ническую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток растирают с н-гексаном, гексан отделяют декантацией, а остаток растирают с эфиром и продукт отфильтровыва 55 ют. Полученный защищенный тетрапепти - Вос- Ре-Нз(Опр)-Рго-НИЧ-ОВгб (8=0,65) растворяют в 10 мл 8 н. 6 12раствора НСФ в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир, выпавший в осадок хлоргидрат свободного тетрапептида - НС 1 тН-0 е-Н к(Опр)-Рго-НМУ-ОВг (й=0,27) растворяют в 15 мл диметилформамида, доводят рН раствора до. 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 296 г Вос-Туг(Вг)- -ОРГр. Смесь выдерживают 30 мин при рН 8,0 и упаривают. Остаток растворяют в этилацетате, К полученному раствору прибавляют 0,22 мл й,й-диметиламиноэтиламина, выдерживают 10 мин и экстрагируют 101-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, 53-ным раствором киСлого углекислого натрия и водой. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток растирают с н-гексаном и продукт отфильтровывают. Полученный защищенный пентапептид Вос-ТугВг)- "- Ке-Нз(Опр)-Рго-НМЧ-ОВгВ (В у =0,75) растворяют в 10 мл 8 н, раствора НС в диоксане, через. 15 мин прибавляют безводный эфир, выпавший в осадок хлоргидрат свободного пентапептида НС Н-Туг(Вг 6) - Ге-Н 15(Опр) -Рго-НМЧ-ОВг (В(4"=0,60) растворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением .триэтиламина и смешивают с 2,6 г (6 ммоль) Вос-Ча 1- -ОРГр. Смесь выдерживают 1 ч при рН 8,0 и упаривают. Остаток растворяет в хлороформе и раствор экстрагируют 103-ным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, 54-ным раствором кислого углекислого натрия и водой. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и спаривают. Отсаток растирают с н-гексаном и продукт отфильтровывают, Полученный защищенный гексапептид Вос-Чаб.Туг(ВгИ- Ь-Нз(Опр)-Р го"НИЧ-ОВг (ВЗ 1 - - Ор 71) растворяет в 10 мл 8 н. раствора НС 1 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир, выпавший в осадок хлоргидрат свободного гексапептида НСС Н-Ча-Туг(Вгб е-Н 1 з(Ор)-Р о-НМ-ОВ К (В(4)=0,34)Храстворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2,64 г (6 ммоль) Вос-Агц(М 02)-.ОРГр. Смесь выдерживают 1 ч при рН 8,0 и упаривают. Остаток растворяют в хлороформе и раствор экстрагирует 103-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, 5 с,-ным водным