Способ получения монофосфата нуклеозида

(22) Заявлено 14.11,72 Ф)1851054 (23) Приоритет - (32)ГееуМаратееннвй наиетет Свветв Мнннетрав СССР ее денем нвабретеней н етееепей(31) (33) (43) Опубликовано 05,05.75 Бто (45) Дата опубликооання опис нь 17ания 14.05,Иностранцы1 асним Афзал Квайя (Пакистан) и Рол ение:, Робин Иностранная фирм ИКН Фармасьютикалз Инк (СШ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОФОСФАТА НУКЛЕОЗИДА Изобретение относится к способу иолу чения моиофосфата нуклеозида, который м найти применение в медицине.Известен способ получения нроиэводнь 1- ф -П-арабинофуранозялпиримидянов из 1-,9 -Д-рибофураиознлпиримидинов путем защиты первичной гидроксильной группы, чминогруппы и 3-гидроксильной группырйбозного 6 стазжа ацильными группами оет последующим действием на полученное соединенив и-толуолсульфонилхлоридом в пирядн-не и дальнейшей обработкой образовавшегося соединения метанольным раствором амватакПредлагается основанный на известнойреакции сгэсобполучения монофосфатануклеозида обаай формулы 7,3 заключающиЯся в том, что 8-галоид,5- -циклоаденозинмонофосфат переводят в 2 0 ь ОГГалоид 35)в циеломоиофосфат (0 Гффофф Шепляемая защитная группа; который обре, бетывают раствором, .фюЬМержащим уксусдюФ кислоту и ацетат натриядля йолучеуия 2-0 М- Я ацвтил 8 оксиаденозин-иик, .ломонофосфата, на последний действуют мвтанольным аммиаком с образованием 2-0- -ОГ-оксиаденозин5; пикломонофосфата ф и 8-2-ангидро-окси- ф -Д-врабинофуранозиладвнинцикломонофосфата, полученное ангидросоединение обрабатывают жидким сероводородом для образова;ния 8-меркапто- Я -Д-арабинофуранозил аденинцикломойофосфата, который вос- станавливают до 9- Я -Д-арабинофуранозил:аденин"5-цикломонофосфйта.н Олпепляемая группа может представлять собой такой остаток, как тозил, мезил, аннзил, брозил, низил или трииэопропилбвнзол, сульфонил, предпочтительно тозил. Раствор уксусной кислоты и ацетата натрия может включать уксусный ангидрид, а 2 О-С- К -ацетил-оксиаденозин- -35 Ъцикломонофосфат целесообразно обра.,батывать затем мвтанольным раствором : аммиака для получения ангидропроизводногй,, 6-Меркаптопроизводнов превращают в9 Я -Д-арабинофуранозиладенин,5-цикло+мовофосфат восстановлением в присутствииникеля Ренея в качестве катализатора. процесс протекает по схеме: .йй 2льфоксил, гае Х - водород, гидроксил, сид или ангидро (ангидрид);- водород или ацил С18 - водород или гидрокси1 10л 1 оСйачвта бромированием 3, 5-циклоаденоэинмонофосфата ( И ), который является природным соединением, получают 8-бром ьД", ф-циклоаденозимонсфосфат 1, Ц 1 ), Затем . соединение П 1 обычно тозилируюти получают 2-О-тозил-бромаденозин-5 -3,5-цикломонофосфат ( Р ), Если в положении 2 присовциняется .цругая группа (ОГ), т. е. не тозил, то образуется соединение 2 ф-б- -ОГ-бромаденозин,5-цикломонофосфат ПосЖ этого соедийенив. 1 У обрабатыва ют раствором уксусного ангщрида, ацетата натрия и уксусной кислоты. Далее иа образовавшийся 2-О-тозил 6- Ц -ацетил- -оксиаденозин,5-цикломонофосфат (-Ч ) действуют метанольным аммиаком Ипирто 1 Ь вым раствором аммиака) (в несколько при емов) и получают 3-О-тозил-оксиаденозн- -3 ,5-цикломонофосфат ( ЧЪ ) и 8-2-ангщуд ро-окси- ф -Д-арабинофуранозиладенин- -3,5-цикломонофосфат ( Щ ). Соединение 2 в Щ можно получить обработкой продукта 17 ацвтатом натрия, уксусной кислотой, а ангидропроизводное И 1 - из соединения 71 действуя на него натрием и Ж , Я -диметилформамидом (ДМфА), Затем ан -,З 1 гидропроизводное УП обрабатываютжйдким сероводородом для образования 8-меркайто- -9-,3 -Д-арабннофуранозиладеиин,5- -цикломонофосфата ( ИП ), Последний конверсируют предпочтительно восстановле- фф нием в присутствии никеля Ренея в качестве катализатора и получают целевой 9-"Д-арабинофуранозиладенин-.3 5 цикломоно фосфат (1), Соединение У 1 Ц можно перевести в вещество 1 также путем обработки Зф пе толуолсульфонилхлоридом в пиридине илиокислением Й -бромсукцинимидом или йодом,Приведенные в схеме соединения можно представить общей формулойй 1 В- водород или осаточная группа, иа 2пример тозил, меэил, анизил, брозил, низил или триизопропилбензоМсульфонил 1У - водород, щелочной металл или аммоний.В случае, когда 3 -ОН, 8 и офозначают Й, а Х-Н или Я Ц 1обозна ;,чает ацил чишь в случае, когда Х-СИ,1 обозначают водород а л - остаточную группу. Заместители Х, Я и К можно варьировать.П р и и е р 1, Получение 2 Г-адзил- ,-8-бромадвнозинрб.-цикломонсдосфатанатрия ( 1 У ).40,9 г (190 ммоль) соединения"1 П растворяют в 250 мл 1 н, едкого натра и в перемешиваемый раствор вливают в тече,ние 15 мин раствор 76,26 г (400 :ммоль) толуолсульфохлорида в 600 млдвоксана. Реакционный раствор перемешивают, :4.час при комнатной температуре 1 смесь выливают в 5 л ледяной воды при энергич- ном церемешивании. Выпавший осадок от,фильтровывают, промывают 2 л ледяной воды и сушат путем отсасывания. Высу,шещпяй осадок суспендируют и 800 млхлороформа, энергично перемешивают, фильтруют и промывают избытком 3 л хло,роформа. Белый порошок сушат в вакуум.эксикаторе над пятиокисью фосфора до утра и получают 55,6 Й 94%) соединения ДГ и виде хроматографическч однороднсйо 1 материала.В ИК-спектре обнаружена сиьная поло- , са поглощения при 1179 см 1 (арилсуль., фанил). В ПМР-спектре аномерный протон , (определение в Д О) с центоом щж 1 о 5,82 в виде сийглета, При влектрофореэе на бумаге в фосфатном буфере (рН 7,2) дикло-АМП движется как однозарядное пятна ,УФ-спектр: - Н, О 266 нм (15080)," 11 ЬК 6живают при температуре кипения с обратным холодильником при отсутствии влагив течение 3,75 час (температура бани125 С), пофле чего реакционную смесьоохлаждают и упаривают досуха в вакууме)Остаток обрабатывают метанолом, этано-Флом и диоксаном, затем упаривают дляудаления последних остатков уксусной кислоты и суспендируют в смеси 600 млметанола и 400 мл этанола, Твердые куски 10в суспензия измельчают и выпавший осадокфильтруют (для промывки берут 200 мл ме-танола). Высушенный продукт ( 7 ) даетОднородное пятно прн хроматографииованиив нескольких системах. Выход 22,61 г, 15УФ пектр:УРН 1290 нм; ЯРН 11макс макс272,5,и 309,5.б) 2 О-тозил-оксиаденозии,5-цикломонодосфат аммония ( У 1 ).и2,168 г (4 ммоль) полученного на последней ствдии соединения ( T ) растворяют в 60 мл метанольного аммиака и расчвор выдерживают ОО час при комнатнойтемпературе, после чего упаривают досуха ввакууме. Остаток суспендируют и растираютс 40 мл этанола и оставляют до утра в холодильнике. Затем отфильтровывают выпавший осадок, промывают 200 мл этаиола исушат, получая 1,7 г соединения Щфильтрат и пром; явную жидкость упариваютв вакууме, а остаток перекристаллизовывают из метанола (этанола) и получают эщеО;065 г соединения У 1 . Общий выход(85,3%),Н+Уф-спектр:265 и 288 нм;максв) 8-2 Ангкдр; 8-окси- ф -Д-арабинофуранозпладенин,5-циклофосфат ( И 1 )Метод 1, 1,551 г (Э ммоль) соединенияЦ растворяют в 50 мл метанольного раствора аммиака и раствор выдерживают 6 часпри 80 С в баллоне. Продукты реакции ад.осорбируют в колонке с кремнеземом (Мал-.личкродт - 1 СО меш.; размеры колонки2,7 см х 70 см), элюиру:от хлороформом400 мл), а затем смесью метанол - хлорьформ в объемном соотношении 1; 1, ПродуктЩ цроявлчется но второму главному пику,Соответствующие фракции собирают и упаривают. Остаток растворяют в 40 мл метанала, охлаждают и получают кристаллическуюаммонийную соль соединения УЦ, Отфильтровывают 0,44 г образовавшейся соли,фильтрат подкисляют 2 н, соляной кислотойдо рН 2 и получают 0,16 г продукта УПв виде свободной кислоты. Общий выходЭ,60 г или 59,3%, Найдено, %: С 36,85;М 21,22, С 1 ОН 1 ОИ 506 Р. Н 3,13; П р и м е р 3. Получение 8-меркапто- -9-ф -Д-арабинофуранозиладенин,5- -цикломонофосфата (соединение УИ 1 ),Метод 1. Приготовляют суспензию 1,30 г (4 ммоль) соединения 7 Ц в 15 мл диметилформамида и 25 мл пиридииа и затем вносят в нее 40 мл жидкого. сероводорода (готовят в баллоне), Содержимое выдержи-.; вают 16 час при 100 С (температура баии), охлаждают и упаривают в вакууме досуха. Остаток адсорбируют в колонке и кремниевой кислотой (Маллинкродт - 100 меш.; размеры колонки 5 х 40 см), затем элюируют 950 мл хлороформа и смесью хлороформ - метанол в объемном соотношении 1:1. В Уф-области имеются два главных пика абсорбции, Фракции, соответствующие первому пику собирают и упаривают. Полу чают 0,9 г беллотто порошка (вещество ИП ),. а при трехкратной керекристаллизации из смеси метанол-этанол - 0,835 г (57,7%) вещества, Часть вещества растворяют в воде и водный раствор подкисляют до рН 2. Полученную кристаллическую свободн ю кислоту (УП 1 ) сушат 4 час при 80 С в вакууме. Вычислено, %: С 36,71; Н 3,08;М 21,40.В ИК-спектре отсутствует, полоса поглощения, соответствующая арилсульфонильной группе при 1179 см 1, В ПМР-спектре (определение в ДМСОI МаОД) - аномерный протон в виде дублета с центрам при6,5, что указаывает на арабинознуюконфигурацию с 2-ангидро-связью и 2-протон с триплетом, расположенным йрид 5,95,УфспектрЯ 259 и 286 (плечо) нммакс3 257 нм,Метод 2. 17,1 г (33,1 ммоль) соединения 71 растворяют в 200 мл метанольного раствора аммиака в баллоне из нержавеющей стали и нагревают 9 час при753", Содержимое охлаждают и упаривают в вакууме досуха, Остаток растворяютв 80 мл воды и фильтруют, фильтрат смешивают с 80 мл этаиола, подкисляют 2 н.соляной кислотой (рН 2) и оставляют доутра в холодильнике, Затем фильтруют, промывают смесью метанол-этанол (50%;2 х 25 мл) и сушат. Получают 5,09 г(47,01%) соединения УЦ, идентичногосоединению, полученному по методу 1.(10620) и 308 нм (26170);294 нм (23970).рН 11ПМР-спектр (в Д 0) обнаруживает аномерный протон в виде дублетас центром прн 8 87,0,Метод 2. В баллоне из нержавеющейстали готовят суспензию 7,7 г (23,3ммоль) соединения УП в 110 мп диметилформамида, затем приливают 55 млжидкого сероводорода, Содержимое реактора выдерживают 20 час при 110 оС, охлаж-дают, выпавший осадок отфильтровываютпри . помощи 100 мл этанолв, промывают100 мл эфира, сушат при отсасывании иполучают 5,39 г почти чистого продуктаЧЦ в виде белого порошка. Эго веществорастворяют в 30 мл воды и фильтруют. Кфильтрату добавляют 30 мл этанола, затем.подкисляют 30 мл 2 н. соляной кислоты(рН 2), выпавший осадок вещества И 11выдерживают 1 час при комнатной темпе- рратуре и отфильтровывают. Осадок промывают 5 мл водного этанола (50%), послечего сушат 4 чвс при 60 оС и 0,1 ммрт. ст,. Получают 3,85 г хроматографически однородного вещества Щ 1 . Фильтратпри дальнейшем подкислении дает еше0,20 г этого вещества,Смешивают первоначальный фильтратреакционной смеси и промывную жидкость,упаривают и адсорбируют в колонке с су- Фхой кремниевой кислотой (размеры колонки4,5 х 18 см). Затем элюируют 150 мл50%-ного метанольного хлороформа и10%-ным метанольным аммиаком (собирают фракции по 10 мл), Далее собирают афракцию, соответствующую чистому соединеник 7111 и упаривают. Остаток растворяют в метаноле прн помоши 2 н. едкогоаммония и осаждают подкисленнем, получая 1,3 г чистого вешества 7 П 1. Обший Ивыход 5,15 г или 61,2%.П р и м е р 4, Получение 9--Д-арабинсфуранозиладенин,5 -циклофосфата (вещество 1).3,04 г (8 ммоль) "оединения Щ 11 расз Иворяют в 250 мл метанола, содержашего10 мл 2 н, едкого аммония. И полученный раствор вносят 36 г никеля Ренея нсмесь выдерживают 18 чвс при температуре кипения (с обр тным холодильником) йф 1"(температура бяни 75 оС), Затем к ализатор отфильтровывают 4 орез слой цели 1 э,промывают 100 мл метансля, содержа дим10 мл 2 н, едкого аммония, фильтратвместе с промывной жидкостью упариваклдосуха, я остаток растворщот в 30 мл метанола и нескольких каплях 2 и. едкогоаммония, Раствор отфильтровывают и подкисляют, Выпадает 205 г свободной кислоты (вещество 1). Фильтрат упаривают иполучают еше 0,24 г. Общий выход 2,24 иили 31% Остаток перекристаллизовываютпутем растворения в воде и подкисления, .после чего сушат 4 час прн 80 С и 1 мморт. ст.Найдено. %: С 36,20; Н 3,52;Й 21,27.О М10 12 6 5Вычислено, %: С 36,48; Н 3,67;й 21,09,Уф-абсорбция: 3 256 нммакс,(15200);,3 Р 258 нм (15400),макс Предмет изобретения1, Способ получения монофосфата нуклеозида, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что 8-галоид,5-циклоаденоэинмонофосфат пе реводят в 2-О-ОГ-галоид,3-цнкломонофосфат (ОГ-отшепляемаа зацитнвя группа), который обрабатывают раствором, содержащим уксусную кислоту и ацетат натрия,для получения 2-О-ОГ- М -ацетил--оксиаденозин,5-цккломонофосфата, напоследний действуют метанольным аммиаком с образованием 2-О-ОГ-Ьксивденозин,5-цикломонофосфата и 8-2-ангщцЖ-8-окси- ф -Д-арабинофурвносйлвденин,5-цикломонофосфата, полученное ангидросоединение обрабатывают жидким серово-дородом для образования 8-меркапто- ф ь-Д-арабинофуранозиладенин,5-иикломонофосфата, который восстанавливают до9- Ц -Д-арабинозиладеннн,5-цикпомонофосфата.2, Способ по и. 1, о т л и ч а .ю ш и йс я тем, что отшепляемея группя можетпредставлять собой такой остаток, как тозил, мезил, анизил, броэил, низил илн триизопропилбензолбульфонил, предпочтительнотозил.3. Способ по п. 1, о т л и ч а ю ш и Вси тем, что раствор уксусной кислоты иацетата натрия включает уксусный ангидрид,а 2-СМОГ 6 К вцетилоксияденоэии3,5 цнкломонофосфат обрабатывают эатем метанольным раствором аммиака дляполучения ангндропроизводного,Составитель Е,Союлойаредактор ЗГОрбунова Техред И.Каранйаишва Корректор Б.Брыксина Изд. И ЦО Тираж 529 Подписное Заказ 4927 ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров ССГ" ио делам изобретений и открытий Москва, 13035, Рзушскан наб., 4 филиал ППП франт, г. Ужгород, ул. Проев"наи, 4 4. Способ по и. 1, о т л и ч а ю ш и й с я тем, что 8:меркаптопроизводное прев ращают в 9 ,9 Д арабинофуранозиладенини 123,5 -цикломонофосфат восстановлением в присутствии никеля Ренеи в качестве катализатора.