Способ получения препарата для перорального введения

)5 А 61 К 9/5 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН акт желудочно-кишечном тр е. Поставленная цель достигается тем, что наряду с немодифицированными природнымиполипептидами в качестве носителейиспользуют модифицированные природные полипептиды, например флатоилжелатину, Способ осуществляют. путемсмешивания 0,5-1 ОХ-ного растворалогически активного вещества последовательно с 2-107,-ным раствором белков соединительных тканей животных и1-107-ным раствором фталоилжелатиныпри 10-40 С в объемном соотношении1,0:0,1-5,0;0,1-5,0, после чего смесьлибо высушивают и измельчают, либоохлаждают до образования геля, который измельчают и обрабатывают дубильными веществами и антиоксидантами.2 табл,(21) 4.Ле биотво СССР2, 21.10.83ПАРАТА ДЛЯ ете оногояется тельнофили зирматериал т, лиок ветеринаИзобретение относи рии, в частности к сп ния препаратов для пе дения. ебам п ально еили пол гранул раз пылью тан инкубируюном сокеводят р 1в течени тракте.е р 1. К 10 дкости (вакц уса болезни тр вируса 7я белка 1 Х) соецинитель отношении 1 но-кишечно Пр иммл вирусосоинный штамм Ауески свиней 5 18 ТЦЦорул добавляют 5 Ено-тканных 4 при 20 С,ето сходныи лся на концентр ный растбелков в т,е. снижал1000 раз).Примдержащей носятова т ремешиваюткислоты,тельно опиакрил ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 638842/1 320.01.89(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПЕРОРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ(57) Изобретение относится кнарии, в частности к способамлучения препаратов для перорал:введения. Целью изобретения яповышение стабильности препар Целью изобретения является повыше е стабильности препарата в жепудоч емешивают, охлаждаюизмельчаот, высушивают .до частиц размером 0,1 мм нный гель измельчают до . мером 1,0 мм и обрабатывают ина; Полученный препарат инв течение 3-5 ч в желудочсвиней (рН 2;0). Затем досреды 7,5-8,5, инкубируют 30 мин и титруют в культу- почек поросенка СПЗВ. Титр кв этом случае опредеуровне 3,5-4,0 1 Р ТЦД орся на 3,5-4 порядка (в е р 2. К 10 мл вирусосожидкости (вакцинный штамм, БУКвируса болезни Ауески свинейисходный титр вируса 7,5 1 я ТЦД ц,концентрация белка 1%) добавляют приперемешивании 5%-ный раствор соединительно-тканных белков, затем 3%-ныйраствор фталоилжелатины (м.м. 4060 тыс., содержание связанных Фтало"ильных групп 4-5%) в соотношении1:0,5-0,5 при 20 С. Смесь охлажпают,лиофилизируют и измельчают. Получен. -ный препатат после инкубации в течение 3-5 ч в желудочном соке (рН 2,0)слабощелочной среде (рН 75-8,5) втечение 30 мин титруют в культуреклеток СПЭВ. Титр вируса БУКопределяют на уровне 7,0-7,5 18 Т 1 Иоумт.е, он фактически не снижался послеинкубации в желудочном соке, Повышение устойчивости вируса болезни Ауески, иммобилизованного таким образом,достигается на 3-4 порядка.П р и м е р 3, Выполняется по .примеру 2, только используют растворы различных концентраций исходного 25продукта, немодифицированных соединительно-тканных белков и фталоипжелатины. Результаты определения инфекционной активности вируса болезниАуески, иммобилизованного в зависимости от соотношения компонентов, ихконцентрации и температурных режимовспособа после инкубации в желудочномсоке в течение 3-5 ч; представленыв табл. 1.Из данных табл. 1 следует, что оптимальной концентрацией вирусосодержащей жидкости (исходный продукт) является 0,5-10%-ная концентрация (экс-перименты Р 3 7) оптимальной кон 40центрацией раствора соединительнотканных белков животных - 2-10% (эксперименты Р 8-12), оптимальной концентрацией раствора модифицированного полипептида (Фталоилжелатины) - 451-10% (эксперименты Р 13-17), Оптимальным соотношением компонентов(У:У:У) вирусосодержащая жидкость:раствор соединительно-тканных белков:раствор фталоилжелатины является1:0,1-5,0:0,1-5,0 (данные экспериментов У 18-27, табл. 1). Оптимальныетемпературные режимы способа 10-40 С6(эксперименты Р 28-31, табл. 1),П р и м е р 4Выполняется попримеру 2, только на заключительном55этапе получения препарата вместо вы"сушивания и измельчения смесь вирусосодержащей жидкости, растворов соединительно-.тканных белков и Фталоилжелатины охлаждают до образованиягеля, который затем измельчали и обрабатывали пылью дубильных веществ(таннином) и антиоксидантов (аекорбиновой кислотой), После инкубации полученного таким образом препарата вжелудочном соке (рН 2,0) в течение3-5 .ч и далее обработкой в среде срН 8,0 в течение 30 мин активностьвируса болезни Ауесни в культуреклеток составляла 6,5-7,0 18 ТЦЛж(мьП р и м е р 5. Исходный препарат интерферона получают путем индукциилейкоцитов селезенки (культивируемыхв среде 193) вирусом болезни Ньюкаст. -ла, штамм Н (10-100 Т 1 Д 0/клетк, ) и фитогемагглютинином (20 мкг/мл кле точной суспензии) в течение 20-24 ч. Затем культуральную жидкость центри-.фугируют (2-5 тыс. 8, 30 мин), лиофилизируют и полученный сухой препаратрастворяют до концентрации белка 0,1- 12%, Такой препарат интерферона контролируют по его противовирусной активности в культуре клеток ПСП или СПЭВпротив вируса визикулярного. стомати-: та - ВВС (штамм Индиана, доза 100- 1000 ТБД ). При этом титром интерферона является то наименьшее разведение препарата, которое предотвращает цитопатическое действие ВВС. В работе использовали исходные препарат ты интерферона с титром 2 ф 10В табл. 2 приведены данные по активности препарата интерферона, иммобилизованного согласно предлагаемого способа, с использованием немодифицированных белков соединительных тканей и модифицированного полипептида (фталоилжелатины) в зависимости от параметров компонентов и температурных режимов способа иммобилизации, после обработки желудочным соком свиней. Данные, приведенные в табл. 2,свидетельствуют о том, что наиболее оптимальными параметрами предлагаемого способа являются следующие: 0,510%-ный раствор исходного продукта(в этом примере - интерферон) смеши-вают последовательно с 2-10%-ным ра-створом соединительно-тканных белков и 1-10%-ным раствором модифицированных природных белков (фталоилжелатионы) при 10-40 С в соотношении Ч Ч:Ч 1:0,1-5,0:0,1-5,0, после чего либовысушивают и измельчают, либо охпаж1637308 дают до образования геля, который измельчают и обрабатывают дубильными веществами и антиоксидантами.Таким образом, как в примере с использованием в качестве исходного . продукта вируса вакцинного штамма ВУКболезни Ауескитак и в примере с препаратом интерферона показана высокая воспроизводительность и зффективность предлагаемого способа. последующей обработкой дубильными ве-ществами, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения стабильности препарата в желудочно-.кишечномтракте, биологически активное вещество используют в концентрации 0,510., а белки соединительных тканейживотных в концентрации 2-103, вполученную смесь при 10-40 С дополниотельно вводят 1-103-ный раствор фталоилжелатины при следующих объемных соотношениях, мас.ч.:Раствор биологичес 15 -ки активного вещества 1,0Раствор белков соединительных тканейживотных20 1-10 Х-ный растворфталоилжела тины Формула изобретения Способ получения препарата для перорального введения, включающий смешивание раствора биологически активного вещества с раствором белков соединительных тканей животных, охлаждение до образования геля с 0,1-5,0 0,1-5,0 Таблица 1 Активность вируса болезни Ауески, иммобилизованного с использованием нативных н модифицированных природных полипептидов, в зависимости от параметров компонентов н температурных режимов способа иммобилизации ТемпеКонцентрация компонентов, 7. Титр зьруса болезни Ауески (БУК)после инкубацни препаратов в желудочном соке свиней в течение3-5 ч и последующей выдержки в течение 30 мин в среде рН 8,0 (1 а ТЦДзо 7 ыл ) Эксперимент, р СоотношенияЧ:Ч:Ч вирусосодержащая жидкость:раствор соедннителььоратураполучения Раствор не- модиЪиннрованных белВирусо- содержащая жидкость (титр вируса болезниАуески) Т 1111 Бо/мл Раствормодифицированногополипептидз (фталоилжелатины) смеси, С ков соединительныхтканей житканных белков:раствор фта- лоилжеланотных тины 20 20 1:0;0 1:4:0 03,5 1 2 (прототип)3 4 5 6 7 8 910 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 0,3 0,5 5,0 10,0 11,01 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 5 5 5 5 5 1 2 5 1 О 11 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 Э 3 3 3 3 3 3 3 3 3 0,5 1 3 10 11 Э 3 3 3 3 Э 3 1:0,5:0,5 1:0,5:0,5 1: 0,5: 0,51:0,5:0,5 1:05:05 1:0,5:05 1; 0,5: 0,5 1: 0,5:0,5 1:05:0,5 1:0,5:0,5 1:0,5:0,5 1:0,5:0,5 йО 5:05 1:0,5:0,51:0,5:0,5 1: 0,5: 0,5 1:0,1:0,5 1 й 05:05 1:5,0:0,5 16 ОйО 5 1 йО 5 йО 051: 0,5:О, 1 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 5,0 6,0 7,0 4,5 4,0 4,5 5,5 7,5 6,5 6,0 55 7,0 7,5 6,5 5,5 5,5 6,0 7,5 6,0 5,5 4,5 6,01637808РОдоЛжение табл. 1 Титр вируса болезни Ауески(БУК)посленнкубации препаратов в жмудочном соке сви-,ней в течение3-5 ч и последующей выдержкив течение 30 минв среде рН 8,0(титр вируса болезниАуески)Т 17(,ои смеси, ОС ков соеди"нительныктканей житканныхбелков:раствор фталонлжелавотных тины 7,5 5,5 5,0 6,0 5,0 5,5 3,0 25 1 2627 1 28 1 29 1 30 1 31 1 20 20 20 10 8 40 41 1;0,5;0,6 1:05:50 1:0,5:6,0 1:0,5:0,5 1:0,5:0,5 1: 0,5:0,5 1: 0,5:0,5 5 3 5 3 5 3 5 3 5 3 5 Э 5 3 Таблица 2Активность препарата интерферона, иммобилизованного с использованием нативных и модифицированных полипептидов в зависимости от параметров компонентов и температурных режимов, после обработки желудочным соком свиней Соотношения Ч.:Ч:Ч препарата. интерферона:раствор соедини- тельно-тканных белков;раствор .фта- лоилжелатины Концентрация компонентов, Х Титр интерферона (разведение) после инкубации в желудочном соке свиней в течение 3-5 ч и последующей выдержки в течение 30 мин в среде с рН 8,0 Эксперимент, Ф Температура смеси,С репарантерфеона аствородифициованного олипеп. ида фталоилелатины) аствор не одифициро анных бел ов соедиителъных каней 0 0 0 2 1;0:О 1:4:0 О-г