Способ определения активности препарата интерферона

1012914 Антнвирусны титргго ват арике ЮЮкультуре кле- ток Равведении илтерфероиа Контроли Серииинтерфероиа 1 г 16 1 г 32 1 г 121 1 г 256 1 г 512 1 г 1024 1 г 2046 1 г 4096 1 г 64 1 г 4 1 гб Интер ферон пв Куль тура стафил кок- ка+ + + + т + Ф 266 292 1 г 12 В 291 1 г 64 1 г 126 т+ 294 аа гааге т т ата Ф условные оеоайаченинг "-ф - иет роста стафилококкаф ф+ф - есть рост стафнлококкаИзобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в практике производства препарата интерферона.Известен способ определения актив- . ности препарата интерферона путем 5 последовательного разведения препарата с последующим добавлением его в культуру клеток, зараженной вирусом и определением активности по задержке цитопатогенного действия 10 (ЦНД) вируса. 1 .;Однако известный способ сложный, так как необходимо выращивать и под" держивать культуру клеток фибробластов, производить заражение культур 15 клеток живым вирусом и оценивать результат через; 3 сут.Цель изобретения - упрощение спс" соба.Указанная цель достигается .гзм, 261 что при осуществлении сцособаМпутем последовательного разведения препарата с последующим добавлением его в тест-культуру. клеток и определением активности в соответствующие разве .дения интерферона добавляют взвесь белого стафилококка,чувствительногО К интерферону, и определяют активность препарата по задержке роста бактериальной культуры. ЗОП р и м е р, Выращивают культуру белого стафилококка на косом мясопептонном агаре 18 ч при +37 еС. Культуру сьывают стерильным мясопептон-. ным бульоном и бактериальную суспензию переносят в стерильную пробирку. Суспензию стафнлококков доводят до титра 1 млрд мясопептонныи бульоном по соответствующему бактериальному стандарту мутности.Разведение препарата интерферона 40 проводят следующим образом. В 10-12 стериальных пробирок разливают мясопептонный бульон по 1,0 мл. В первую пробирку вносят 1,0 мл испытуемОго препарата ннтерферона, растворенного 45 в дистиллированной воде, согласно указанию, имеющегося на ампуле спрепаратом. Иэ первой пробирки1 г 0 мп.жидкости переносят во вторуюпробирку, из второй " в третью ги т.д.В приготовленные разведения интерфе"рона вносят по 0,1 мл стафилококковой суспенэии. ПОале внесения баитерий жидкость в пробирках остаетсяпрозрачной,Опыт сопровождают контролями.Первым контролем йррверяют стврильность испытуемого препарата интерферона - в пробирку вносят 1,0 млисходного, растворенного в дйстиллированной воде, препарата. Вторым контролем проверяют стерильность мясопептонного бульона - в пробирку вносят 1,0 мл бульона. Третьим контролем проверяют способность культурыстафилококка размножаться в мясопептонном бульоне - в пробирку с 1,0 млбульона вносят 0,1 мп суспензии стафилококка.Все пробирки г,опытные и контрольные) выдерживают 18 ч в термостатепри +37 оС. Затем производят учет результатов. В 1-ой и 2-ой контрольных пробирках жидкость должна быть,прозрачной. В 3-ьей контрольнойпробирке - рост стафилококка в видепомутнения бульона. В опытных про- .бирках, где препарат интерферона подавляет развитие бактериальной культуры стафилококка, жидкость остаетсяпрозрачной, помутнение бульона указывает на рост стафилококка.После учета результата опыта даютзначение о титре препарата интерферона За антибактериальный титр препарата интерферона принимают то наибольшее раведеяие его, которое задерживает развитие культуры стафилококка.Результаты титрования 5-и серийнативного препарата человеческоголейкоцитарного интерферона в сравнении с известным представлены в таблице.1012914 Составитель Г. КрюковаТехред. И.Гайду Корректор Ю, Макаренко Редактор А. Козориз Заказ 2835/6 Тираж 711 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Из таблицы видно, что антнбактериальный титр препарата интерферона серии 285 соответствует; 1:512, серии 286 - 1:1024, серии 292 - 1 г 2048, серии 293 - 1:512-, серии 294 - 1:2048.Как видно из примера, антибактериальные титры всех испытанных серий препарата выше, антивирусных на 4-5 разведений.Предлагаемым методом серийных разведений с культурой белого стафило- О кокка протитровано 68 серий препарата нативного человеческогс лейкоцитарного интерферона, выпускаемого Пермским НИИВС Во всех случаях антибактериальный титр превышал или соответствовал антивирусной активности испы- .туемых пренаратов интерферона. Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить точность оп-. ределения активности препарата интерферона, а также упрощает процесс определения активности препарата.