Способ определения активности иммунодепрессора биогенной природы

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛ ИСТИЧЕСКРЕСПУБЛИК 9) Ш) 3/5 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ исследов инской р сударственим. Н.И,Пирг, В,Г,П и И,Б,Жук альскаяа М, Иммун971, с. Манько Ведицина,ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Харьковский научтельский институт мелогии и 2-й Московскиный медицинский инстирогова(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ИММУНОДЕПРЕССОРА БИОГЕННОЙ ПРИРОДЫ (57) Изобретение относится к фармако-. логии. Цель изобретения - упрощение способа. Определяют среднюю массу селезенки у интактных мышей, у мышей, которым вводят гидрокортизон, и у мышей после введения им иммунодепрессора и гидрокортизона, Рассчитывают индекс массы селезенки и активность иммунодепрессора, Масса селезенки завйсит от дозы гидрокортизона, иммунодепрессора и времени после введения препарата. 2 табл,где и - количество селезенок в группе,Индекс веса селезенки в группе 1 э при введении ИД определяют по форму- ле(2) Зависимостьот величины испытываемой дозы препарата О может быть удовлетворительно аппроксимирована линейной функцией вида+ а,РГгде а, и а, - коэффициенты уравнения линейной регрессии.Оценку значений коэффициентов управления линейной регрессии выполняют методом наименьших квадратов. ВыИзобретение относится к фармакологии и может быть использовано приопределении активности иммунодепрессивных препаратов биогенной природы,в том числе полученных из органов итканей млекопитающих.Цель изобретения - упрощение способа эа счет сокращения числа операций,Способ осуществляется следующимобразом,Животных умерщвляют под эфирнымнаркозом, извлекают у них селезенкуи определяют ее вес. Среди селезенокодной группы мышей могут встречаться органы с весом, значительно отличающимся от веса органов в этом жеопыте. Для выявления "выскакивающих"значений применяют метод, основанныйна оценке максимальных различий полученных результатов. Эти значения весов селезенок исключают из анализа.Среднийвес селезенок Р вычисляютдля следующих групп: у интактных мы-,шей Р (контроль 1-ИК); у мьппей,Которым эа 20-40 мин до введениягидрокортизона (ГК) вводили Физиологический раствор, Р, (контроль 2-ГК);у мьппей, которым за 20-40 мин довведения гидрокортизона вводили различные дозы иммунодепрессора (ИД),Р (опытные группы).Средний вес селезенок в группевычисляют по формулеР)р:-1числяют активность препарата А - дозу, введение которой позволяет получить индекс веса селезенки, равный 507.0 О.а,А=10(4) Значимость связи междуи 0, которая описывается уравнением (3), оценивают по величине коэффициента корреляции - г. Минимальное значение модуля г, при котором существует значимая связь между и и 0 с уровнем надежности - Р0,01, следующее (М - число сравниваемых пар): г 0,882 0,833 0,789 0,750 0,715 М 4 5 6 7 8 Вес селезенки в 7 к интактному контролю У зависит от дозы ГК (ДГК) и времени после его введения Т Контроль 1. Мьппам из группы интактного контроля (ИК) вводят 0,4 мп Физиологического раствора внутримышечно и спустя 20 - 40 мин 0,5 мл внутрибрюшинно. У = 75,52-0,43 ДГК + 0,56 Т25В соответствии с Формулой (5) привыполнении способа рекомендуетсяиспользовать дозу ГК 90-140 мг/кг,время между введением иммунодепрессо ра 20-40 мин, время регистрации эффек.та 48-72 ч,П р и м е р, Определяют биологическую активность ИД, выделенных изпечени теленка (препарат 1) и тиму 35 са теленка (препараты 2 а и 2 б).Препарат 2 б является продуктом очисткипрепарата 2 а (" сырца" ) на ионообменной целлюлозе ДЕ В эксперименте использовали мьппей"Гедеон Рихтер, лиофилизированныепрепараты ИД,Готовили суспензию ГК в Физиологическом растворе (концентрация 4 мг/мп)и растворы ИД в стерильном Физиологическом растворе, Животных случайным образом (рандомизированно разде 50 ляли по 6 мьппей в группу. Всего наиспытание одной серии препарата необходимо 7-9 групп.В примере использовано 9 групп мышей.1350615 Продолжение табл.14 Контроль 2, Мьппам из группы с ГКвводят 0,4 мл физиологического раствора и с устя 20-40 н внутрибр, ин 2 3 но 0,5 мл ГК (2 мг/ьпппь).Семи группам мьппей внутримьппечно 2 а ИК 1 вводят в объеме 0,4 мл различные дозы ИД 0,08; 0,2; Оэ 4 1,0; 2,0; 5,0; ГК 10,0 мг/мышь. Через 20-40 мин этимбэппам внутрибрюшинно вводят 0,5 мл 10ГК (2 мг/мьппь), Через 72 ч животныхпод эфирным наркозом декапитировали, 0,2 извлекали селезенки и взвешивали,0,08 16,2 33,2 0,4 65,9 1,0 56,7 2,0 79 эЗ Таблица 1 О;, Вес семг лезенПрела 5,0 93,6 20 10,0 74,7 рат ИД 2 б"25 ИК ГК 1 ИК 126 эО+9 э 7 0,016 38,3 ГК 74,7+5,485,6+7,292,3+10,491 э 5+6 э 898 1+12 5 0,08 70,1 30 21,2 0,08 122,6+14,8 93,1 0,2 34,3 0,2 0,4 116,1+7,2 83,2 32,7 0,4 143,+12,5138,6+6,1152 э 5+17 э 5 124 э 9 117,2 1,0 45,6 1,0 2,0 106 э 8+8 эЗ 62,6 2 эО 138,2 5,0 ао 117,8+5,2 84,0 5,0 73,3 112,3+14,3 10,0 Таблица 2 А Удельная А, 1 мг/А ИД Препарат а,а,Оэ 900 Оэ 460 0,027 51 э 34 29 эЗЗ 60,82 31,66 111,78 39,30 Оэ 952 0,883 0,967 2,17 2 а 37,04 2 б Результалы определения параметров 15для расчета биологической активностиИД представлены в табл.1,13,9+6 э 5 57,8+6,3 66 э 9+8 э 6 76,4+7,1 94,8+8,1 89,6+9,2 102,3+11,4 110,3+9,7 99 э 8+7,8 127,2+6,8 60,9+5,9 86 э 3+6 эО 107,4+8,7В табл,2 представлены результатыопределения активности ИД.135 О 615 Составитель Н, ГуляеваРедактор П,Гереши Техред М.Моргентал Корректор М.Максимишинец Тираж 776 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по деЛам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д.4/5Заказ 5281/46 Производственно-полиграфическое предприятие, гужгород, ул.Проектная,4 Определение активности ИД по предлагаемому способу менее трудоемко и занимает меньше времени, в сравнении с известным способом.5 Формула изобретенияСпособ определения активности иммунодепрессора бисгенной природы путем введения его мьппамс последующимэабсем иисследованием селезенкиу контрольО ных и опытных животных, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа операций, через 2 О - 40 мин после внутримьппечного введения различных 15 доэ иммунодепрессора внутрибрюшиннс вводят гидрокортиэон, через 2-3 сут животных забивают, определяют вес селезенки, рассчитывают индекс веса селезенки по Формуле где 1, - индекс веса селезенки;Р, - средний вес селезенки у интактных мышей:Р, - средний вес селезенки у мышей, котсрым вводили гидроксртизон но не вводилииммунодепрессор;Р - средний вес селезенки увмышей, которым вводили иммунодепрессор и гидрокортизсн,а активность иммунодепрессора определяют по ФормулеЕа-с,А 1 О где А - активность икчунодепрессора;а, и а - параметры регрессионной зависимости индекса веса селезенки от дозы иммунсдепресссра,