Способ определения специфического белка

.И.Пирогова нскии институ 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОГО БЕЛКАиРбции 20роваИзобретение относится к медицине, а именно к способам выявления специфической адсорбции белков.Известен способ определения спец фического белка путем адсорбции антигена последующим контактированием адсорбированного антигена с исследуемым материалом, содержащим специфический белок 11.Однако известный способ сложен,1 О требует длительных измерений и обработки полученных результатов (от 2 ч до 2 суток) и не обеспечивает необходимой чувствительности при измерениях (чувствительность до 10мг/мл)1Цель изобретения - ускорение и повышение чувствительности способа.Эта цель достигается тем, что при осуществлении способа определения специфического белка путем адсо антигена с последующим контакти нием адсорбированного антигена с исследуемым материалом, содержащим .пецифический белок, адсорбцию антигена осуществляют на поверхностьрегистрирующего датчика и по изменению теплофизических характеристик .датчика до и после контакта с исследуемым материалом определяют наличиспецифического белка.Способ осуществляется следующимобразом. В начале проводят адсорбцию антигена на стеклянную поверхность датчика, например, термореэистора, а затем регистрируют адсорбцию специфических антител. Для этого датчик с предварительно очищенной поверхнос тью, погружают в раствор антигена, извлекают его, промывают поверхность в дистиллированной воде и помещают в физиологический раствор. Включают рабочий ток и по достижении стацио- . нарного режима работы датчика добавляют антисыворотку. В случае специфической адсорбции антисыворотки на поверхность датчика, нагруженного антигеном, наблюдают кинетическую908360кривую, которую сравнивают с контрольной. Контрольную кривую получают для тех же сывороток, предварительно истощенных или неспецифичныхк данному антигену, С ростом толщины адсорбционного слоя ухудшается отвод тепла от стеклянной поверхностидатчика, увеличивается температурныйградиент среды в приграничном слоеповерхности датчика и уменьшается 10его сопротивление, что отмечаетсяна регистрирующем устройстве. Адсорбция молекул А - например, настекле приводит к почти полной потере активности антисыворотки, 35поэтому помещение такой поверхности враствор с антигеном не дает нанесения потолщине адсорбционного слоя, что готовитоб отсутствии специфической адсорбции.При этом при адсорбции антигена на щповерхности стекла адсорбционныйслой всегда мономолекулярный и плотность его зависит от концентрации антигена,П р и м е р 1. Определение ад- рзсорбционной скорости взаимодействияэталонной сыворотки крови человекасо специфической антисывороткой (кроличьей) против Д цС человека. Стеклянную поверхность терморезистора(например, типа МТ) тщательноочищают, помещают в кювету с антигеном известной концентрации 8 "х 10 мг/мл и составляют на 30 мин,затем вынимают, 10- 15 раз промываютв дистиллированной воде и погружаютв термостатируемую кювету с физиологическим раствором (0,9 йаС 1) в обьеме 1 мл и включают рабочий токД =0,3+0,05 мА для терморезистораМТЙ. Через 1-2 мин после установления стационарного режима работытерморезистора, регистрируют сопротивление й в нагруженном антигеномсостоянии. Затем добавляют 0,02раствора специфической антисывороткипротив 1 ц 6 человека в разведении1:Й 000 и регистрируют изменение сопротивления терморезистора со временем С в результате специфической ад 50сорбции макромолекул антисывороткис антигеном.П р и м е р 2. Определение скорости адсорбционного взаимодействия предварительно истощенной антисыво ротки против 1 цС человека и специфического антигена (эталонной сыворотки крови человека), Опыт проводился 4по предлагаемому способу, только вфизиологический раствор добавляютпредварительно истощенную антисыворотку против 3 цС человека. В результате многократных добавлений антигена (до 0, мл) не наблюдали изменения сопротивления терморезистора,что указывает на отсутствие специфической адсорбции антигена с предварительно истощенной специфической антисывороткой,П р и м е р 3. Определение специфической адсорбции иммуноглобулиновкла с са 3 0 С в сы ворот ке кро ви. иммунодефицитного больного до и после иммуноглобулинотерапии. Опыт проводился по предлагаемому способу, однако,после добавления 0,02 мл сывороткибольного через 30 мин изменение сопротивления терморезистора прекращается и устанавливается на новомравновесном уровне, что указывает напрекращение процесса адсорбции иммуноглобулинов. Определенные значенияуровня адсорбцируемых иммуноглобулинов оказались длл больного 2 1 О мг/мл-2и 5. 10 мг/мл до и после иммуноглобулинотерапии.Таким образом приведенные исследования с помощью предлагаемого способа показали, что способ. позволяетсократить время исследования до 515 мин, повысить чувствительность до-8510 мг/мл концентрации исследуемыхреагентов, выявить наличие и скоростьспецифической адсорбции белков, чтоувеличивает производительность опытов 5-6 раз, а также существенноупростить постановку и проведение исследований, при этом разброс данных,полученных предлагаемым способом, непревышает 53, что обеспечивает высокую надежность и достоверность результатов,формула изобретенияСпособ определения специфического белка путем адсорбции антигена с последующим контактированием адсорбционного антигена с исследуемым материалом, содержащим специфический белок, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения и повышения чувствительности способа, адсорбцию антигена осуществляют на поверхность регистрирующего датчика и по изменению теплофизических характеристик датчика до и после контакта с иссле5 908360 6дуемым материалом определяют наличие 1. КоОеп А. иЕ 1 ервощет.г 1 с вйцспецифического белка. д 1 еь о 1 т 111 п 511 аь",Ргоцгеьэ 1 пИсточники информации, ьцгГасе апд еещЬгапе ьс 1 епе. 8, 1 О, принятые во внимание при экспертизе 1971.Составитель Ю.АлмазовРедактор И.Тыкей Техред М.Рейвес КорректоР Г.НазароваЗаказ 678/6 Тираж 717 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.я/5филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,