Штамм -78-продуцент -маннаназы

ОПИСИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социвпистическик Республик(22) Заявлено 121078 (21) 2671787/28-13с присоединением заявки йо(51)М. Кл С 12 К 3/00С 12 Р 13/10 Государственный комитет СССР по делам изобретений н открытий(54) ШТАММ ВАС 111 цЯ БЦВТ 1118 С - 78 -ПРОДУЦЕНТ .Ь - МАННАНАЗЫ Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению нового штамма, используемого для получения Ферментаэндо -маннаназы,5Наиболее распространенными продуцентами 3 -маннаназы явлжотся различные микроорганизмы, такие какАярегд 111 ця, в частности Аярегд 111 цяачавог 1 1. 10Недостатком этих аналогов является низкая р -маннаназная активностьи продолжительное время культивирования (около 14 сут) .Наиболее близким по технической 15сущности к предложенному являетсяштамм Вас 111 ця яцЬг 111 я К, который синтезирует фермент ф -маннаназу. Активность фермента составляет1,1 ед/мл по методу Сомоджн на галах томаннане, выделенном из кофейныхбобов Для выделения-маннаназыштамм Вас 111 ця яцЪ 111 з.я Квыращивался в лабораторных условиях 2,Недостатком известного штамма явл яетс я то, что он не обладает способностью синтезировать эндо- р -маннаназу, что ограничивает сферу применения данного фермента. Кроме тогокультивирование известного штамма 3 О Вас 111 ця яцЬс 111 я Кболее продоЛжительное, что связано с большей затратой энергоресурсов.Целью изобретения является получение нового высокоактивного штаммапродуцента 13 -маннанаэы, обладающего биосинтезом Ферментов эндо- иэкзоманнаназы при более короткой продолжительности глубинного культивирования,Для получения такого штамма, быливыделены чистые микробные культуры иэпочвы лугов Вильнюсского района Литовской ССР, способные к биосинтезу-маннанаэы. Из них далее был отобран высокоактивный штамм и идентифицирован как Вас 111 ця яцЬ 111 я 6-78,Штамм Вас 111 ця яцЬС 111 я С продуцент р -маннаназы хранится вколлекции чистых микробных культурВсессюоэного научно-.исследовательскогсинститута прикладной энзимологии,регистрационный номер ИПЭПолученный штамм Вас 111 ця яцЬИ 11 яСхарактеризуется следующими морфологическими и культурально-физиологическими свойствамй, Морфологические признаки. Клетки имеют формупалочек размером 1,8-3,3 х 0,5-0,8 мкмв основном одиночные. При выращива-манна- пределяют нительтамма Т а б л ател прототип редлагаемый шт наэная активметрическийед/мл Эндо--ман ность (Виско метод) 3370 Экзо- ) -ма ность по ме 3 ед/мг Рост культу фе-78 облаатым спект рментовзцЬ 13. 1 1 зт более босинтеза ф-маннаназыЭгзо- ф -маннтивность выше3 раза.Применение штвцЬ 111 з Ошает расход эов в 2 раза нтезирует энманнаназы Вас дае ром Эндо- рактивносСомоджиРост кусинтез-маннаназная ть по методу 1,1 ед/мг ьтуры и би ермен та - рзы проис 45 часов активжи ннаназн тоду Со мма Вас.8 уменьергоресур ры и биосинте )8 -маннаназы за 20-24 ч рмента исход нии на среде с глюкозой или на картофельной среде отличаются большойвариабельностью в отношении размеров,как правило соединены в цепочки.Клетки окрашиваются разбавленнымосновным фуксином, протоплазма окрашивается однообразно. Грамм-положительные палочки беэ капсул, подвиж"ные с помощью перитриховых жгутиков,Культура образует споры размером;1,2-1,6 х 0,8-0,9 мкм, форма спорэлипсоидальная, споры расположеныэксцентрально, прорастают экваториально путем разрыва мембраны вдольэкватора.Культуральные признаки. Культура намясо-пептонном агаре после суточнойннкубации в термостате при 37 С образует колонии диаметром в 4-7 мм, Колонии серовато-белого цвета, радиально-морщинистые, с верхушкой белогоцвета, непрозрачные, матовые, краяровные. Колонии легко снимаются петлей, Культура на ломтиках картофеля образует равномерную пленку серовато-желтого цвета с морщинистымискладками, пленка сухая, окруженавыступами, На поверхности мясо-пептонного бульона культура образует тонкую пленку желтовато-белого цвета,бульон остается прозрачным.Физиологические признаки. Оптимальная температура роста 37 фС при рН6,5-6,7, Дыхание аэробного типа.Усваивает фруктозу, сахарозу,глюкозу и арабинозу, с образованиемкислоты без выделения газа. Не усваивает лактозу, мальтозу, рамнозу,/сорбит, маннит, инозит и дульцит.На среде Кларка образует ацетилметилкарбонил, нитраты восстанавливают до нитритов. Желатину разжижает,.крахмал гидролизует, метиленовоемолоко обесцвечивает,Культура хранится в консервированном виде на ломтиках картофеля в пробирках Ру, лишенных кислорода, с дополнительной пробкой, смоченной пирагаллолом и гидроокисью калия, а также в лиофилиэированном виде. П р и м е р. Для выращивания штамма Вас 111 цз яиЬ 111 з 678 готовят питательную среду следующего состава,%:крахмал 6,5; кукурузный экстракт 2,7;сухие пивные дрожжи 0,12; (ИН) НРО 40,5 У КЯО 40,33 Р МАМБО 7 Н О 0,016;ИпЯО 0,11 СаС 1 0,013 р вода - остальное.Стерильную питательную среду вколбах засеивают штаммом Вас 111 изщ зцЬМ 11 в 0-78, инкубируют в термостате при 37 С на круговой качалке(180 об/мин), а также на бродильныхустановках типа Биолафит,На 20-24 ч роста культуральнойжидкости определяют )8 -маннаназнуюактивность вискозиметрическим методом. За условную единицу активностипринимают такое количество фермента,которое уменьшает относительную вязкость галактоманнана (полигалакто 20 маннан из семян Сега 1 оп 1 за Я 113.циа,ФирмаСигма, США) на одну миллиединицу за 1 мин при 40 С.В табл.1 приведены средние данные ферментативной активности эндоЯ " ф -маннаназы штамма Вас 111 цз зцЬ 1118 6-78.Штамм Вас 111 из эиЬЫ 1 хз 6- способностью синтезироват эндо--маннаназы и экзо назу, активность которой по методу Сомоджи.В табл2 приведены сра ные данные предлагаемого и прототипа.740830 Формула изобретения Составитель И.ПриваловаТехред А.Щепанская Корректор Г. Рвыетник Редактор Н,Потапова Заказ 3154/31 Тираж 522 Подписное ЦНИИПИ Государотвенного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Штамм Вас. вцЬс 111 в Сбудет применяться в микробиологической промышленности для получения фермент- ного препарата-маннаназы.Применение очищенного препарата-маннаназы в винодельчеСкой промыаенности5 страны в качестве стабилизатора столовых н крепленных вин дает воэможность получить эконсиический эффект около 2 мин.руб в год. Штамм Вас 111 цв вцЬ 1111 в 6-78-продуцент р -маннаназы, хранится в коллекции лаборатории чистых микробных культур Всесоюзного научно-исследовательского института прикладной энэимологии. Регистрационный номерИПЭ,Морфологические признаки. Клетки имеют форму палочек размером 1,8-3,3 х х 0,5-0,8 мкм, в основном одиночные. При выращивании на среде с глюкозой или на картофельной среде о т л и ч а ю т с я большой вариабельностью в отнсшении размеров, как правило соединены в цепочки. Клетки окрашиваются основным Фуксином, протоплазма окрашивается однообразно, грамм- положительные, подвижные с помощью перитриховых жгутиков, без капсул. ЗО Культура образует споры размером 1,2-1,6 х 0,8-0,9 мкм, Форма спор элипсоидальная, споры располаженыз эксцентрично, прорастают экваториально путем разрыва мембраны вдоль 35 экватора.Культуральные признаки. Культура на мясо-пептонном агаре после суточной инкубации в термостате при 37 оС образует колонии диаметром в 4-7 мм. 49 Колонии серовато-белого цвета, радиально-морщинистые, с верхушкой белого цвета, непрозрачные, матовые, края ровные. Колонии легко снимаются петлей. Культура на ломтиках кар- тофеля образует равномерную пленку серовато-желтого цвета с морцинистыми складками, пленка сухая, окружена выступами. На поверхности мясо-пептонного бульона культура образует тонкио пленку желтовато-белого цвета, бульон остается прозрачным.Физиологические признаки. Оптималь,ная температура роста 37 С, при рН 6,5-6,7. Дыхание аэробного типа. Усва ивает фруктоэу, сахарову, глюкозу, и арабииоэу с образованием кислоты без вЫделения газа. Не усваивает лактоэу, мальтозу, рамнозу, сорбит, маннит, ннозит и дульцит. Йа среде Кларка образует ацетнлметилкарбинол, нитраты восстанавливает до нитрилов, не растет на среде с цитратами.Молоко пептиниэирует и свертывает, желатину разжижает, крахмал гидролизует, метиденовое молоко обесцвечивает.Культура хранится в консервированном виде на ломтиках картофеля в пробирках Ру, лишенных кислорода, с до-, полнительной пробкой, смоченной пиро" галлолом и гидроокисью калия,а также в лиофилизироваином виде. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1.Кузнецов А,А, и Степаненко Б.Н.Глюкоманнанаэа из Хврегд 111 цв ачатог 3.Прикладная биохимия и микробиология,1971, т. Ч 11, вып.б, с.651-658.2.8.Еюй, Т.РцЕцво 1 о, Т. УавошоСо,Ачт, В 1 о 1, Селеш, 1972, с,366, 9911001 (прототип) .