Способ определения количества куриного пепсина в молокосвертывающих препаратах

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советскик Социалистических Республик(23) Приоритет А 23 С 19/02 С 01 И 33/16 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(71) Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт маслодельнойи сыродельной промышленности(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА КУРИНОГО ПЕПСИНА В МОЛОКОСВЕРТЫВАЮЩИХ ПРЕПАРАТАХ Изобретение относится к молочной промышленности и может быть использовано в лабораториях заводов медицинских препаратов, заводов сычужного фермента и других органиэаций, производящих молокосвертывающие ферменты для сыроделия и контролирующих его качество.Непрерывный рост объема производства сыра с оцной стороны и ограниченность сырьевых ресурсов дчя производства сычужного Фермента - с другой явились основным фактором поиска протеолитических энзимов для замены дефицитного сычужного фермента. Одним 15 из результатов проведения указанных работ явилось создание ферментного препарата для сыроделия, представляющего собой смешанный препарат состава сычужной фермент - куриный пепсин. 20При составлении нормативно-технической документации на производство препарата указанного состава выявилась необходимость разработки метода контроля препарата,25Наиболее близким рсюением технической задачи к предложенному является способ определения сычужного фермента и пепсина в см нанном препарате, предусматрннак;нй внесение иссле дуемого и эталонного ферментов в молоко и установление продолжительности свертывания молока под действиемсмешанного препарата и фермента эталона и определение ферментов расчетным путем 1.Недостатком способа является то, что он недостаточно точен, так как при рН 5,0-5,4 свиной пепсин, как один иэ компонентов, частично восстанавливает свою активность.Целью изобретения является повышение точности определения.Поставленная цель достигается тем, что в качестве эталона используют куриный пепсин, а ингибирование ферментов осуществляют в молоке путем выдержки их в течение 5-15 мин в фосфатном буфере при рН 7,4 и температуре 40-43 ф С, при этом содержание куриного пепсина определяют по Формуле (1)Тдоо 9 Ь(1) где Х - содержание куриного пепсинав бинарном ферменте;Т - время свертывания молока поддействием куриного пепсина;То - время свертывания молокапод действием молс 1 косвертываюцего препарата.733614 у = 100 - 48 = 52 Формула изобретения Концентрация криноопепсЖаэ ВСМА9мг/мл 44,0 43,6 44,8 4,48,7213,5818, 3921,10 9,7 14 5 22,1 36,2,уО Ингибирование сычужного или говяжьего Пепсина осуществляют в буферном растворе, имеющем рН 7,4 и температуру 40-43 С. Величина рН 7,4, как пока" зали проведенные исследования, является наиболее оптимальной для полного ингибирования сычужного Фермента (при 40 С) и говяжьего пепсина (при 43 ОС). В то же время при указанных режимах (рН 7,4, Т40-43 С) куриный пепсин инактивируется незначительно (до 5 - 15)Применение в качестве эталона куриного пепсина,подвергнутого аналогичной обработке, позволяет учесть его частичную инактивацию при обработке смешанного препарата и повышает точность способа.Сущность способа заключается в следующем.Взятые в равных количествах смешанный препарат и куриный пепсин растворяют в одинаковых количествах на 1/15 М Фосфатном буфере, имеющем рН 7,4, выдерживают параллельно при 40- 43 С в течение 5-15 мин. После этого по 0,5-1,0 мл раствора каждого ферментного препарата вносят в одинаковые объемы молока и определяют продолжительность свертывания молока.Содержание куриного пепсина в смешанном исследуемом препарате рассчи- . тывают по Формуле (1). Содержание второго компонента (сычужного фермента или говяжьего пепсина) определяют по Формуле (2) У=400 - Х "(2)Достоверность расчета содержании куриного пепсина по приведенной Формуле подтверждается проведенными исследованиями.Известночто С в (Т) = сопз 1 (3) где С - концентрация Фермента;Т - время свертывания молока;время первой (скрытой) стадииферментации.Результаты исследований приведены в таблице (1 определено по графической зависимости времени свертывания от обратной величины концентрациивфермен 1 ов). Как видно из таблицы, время свертывания молока практически пропорционально концентрации куриного пепсина.П р и м е р 1. Приготовили 1-ныйраствор смешанного препарата, содержащего в своем составе сычужный фермент и куриный пепсин, и 1-ный раствор куриного пепсина на 1/15 фосфатном буфере, имевшем рН 7,4 (18 ч. раствора, содержащего 11,876 г Иа 2 НРО 42 Н, О) в 1 л дистиллированной воды,смешивают с 2 ч. раствора, содержаще-.го 9,078 КН РО 4 в 1 л дистиллированной воды.По 10 мл этих растворов выдерживали в течение 12 мин при 40 С.По истечении этого времени по 1 млраствора внесли в две пробы молока(по 50 мл каждая).Бремя свертывания молока с куринымпепсином составляет 12 мин, со сме О шанным препаратом 25 ьин.Содержание куриного пепсина в смешанном препарате подсчитывают по фор- муле У,: -48 о42.во25Содержание сычужного фермента П р. и и е р 2. Приготовили 1-ный Зо раствор смешанного препарата, содержащего куриный и, говяжий пепсины и1 - ный раствор куриного пепсина на1/15 фосфатном буфере, имевшем рН 7,4.По 10 мл этих растворов выдерживали в течение 5 мин при 43 С.По истечении этого времени по1 мл раствора внесли в две пробы молока (по 50 мл каждая),Время свертывания молока с куриным пепсином равно 5,23 мин, со смешанным препаратом 10,45 мин.Содержание куриного пепсина. в смешанном препарате2 "поХ = , . =5,=.с10 4545Содержание говяжьего пепсина у = 100 - 50,05 = 49,95 Таким образом, предлагаемый способ является нетрудоемким и повышает точносРь определен 7;. с;с"а Способ определения количества куриного пепсина в мслокосвертывающих препаратах, прсдусматривающий ингиби рование ферментов внесение исследуемого и эталонного 6 эрментсэ в молоко и установление продолжительности свертывания кало. г -. действием иссле,цуемого препарата фермента-эталона, с последуюйлм определением фер ментов расчетным путемо т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности, в качестве эталона733 б 14 где Х содержание куриного пепсинав бинарном Ферменте; Составитель И. ПриваловаРедактор Н, Потапова Техред А. Щепанская Корректор Н. Стец Тираж 569 Подписное Заказ 1932/5 ЦНИИПИ Государственного комитета СССР пб делам изобретений и открытий 113035, Москва- %-35, Раушская наб., д. 45филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 используют куриный пепсин, а ингвбирование ферментов осуществляют в молоке путем их выдержки в течение 5-15 мин в фосфатном буфере при рН 7,4 и температуре 40-43 С, при этом содержание куриного пепсина определяют поТ 00 оХ=т Т - время свертывания молокапод действием куриного пепсина;Т - время свертывания молокапод воздействием молокосвер 5 тывающего препарата.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР9 309691, кл. А 23 С 9/12, 1973прототип),