Способ культивирования водорослей

ОП ИКАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических Республйк(5 а) М. Кл. С 12 Р 13/06 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(53) УДК 576,8. ,093,1(088,8) Опубликовано 050180,Бюллетень И 1 Дата опубликования описания 0501,80 ИностранцыЛюдвиг Деген (ФРГ)Паскуале Цаффарони, Ламберто Формиконе, Антонино Сенни(72) Авторы изобретения Иностранная фирмаСнампрогетти СПА(54) СПОСОБ КУЛЬ 1 ИВИРОВАНИЯ ВОДОРОСЛЕИ Гал акт оэ аСахарозаМальтозаЛактоэа Изобретение относится к микробиологической промьпютенности, а именнок способу культивирования водорослейрода Рго 1 оЮ)теса на питательных. средах с этанолом для получения продукта, 6содержащего белок.Известен способ культивированияводорослей рода Рготогйеса на питательной среде, содержащей этанол вкачестве источника углерода источник азота, необходимые млнеральныесоли и биостимуляторы, вусловияхаэрации (1) . По известному способуполучают биомассу водорослей, содержащую белок, 15Недостатки известного способа:длительность процесса и низкий выход биомассы водорослей,Цель изобретения вувеличениевыхода биомассы,Для достижения цели культивируют новый штамм Ргото 1 йеса 2 орй 11 айагНагсоцг 855 А, при этом культивирование осуществляют на питательной среде, содержащей 1-2 этанола,при температуре 33-37 оС и рН 3-5,Штамм водорослей Ргоо 1 Ьеаа2 орг 11 уаг, Нагсоцг 855 А зарегистрирован в Центральном Бюро грибковыхкультур Баарне за номером СВ 5 268,75,Штамм имеет следующие характеристики:А. На твердой среде с пептон-глюкозой за 24 ч роста образует колониидиаметром 3-2 мм, грубые, хрупкие,непрозрачные, без пигмента на жидкой среде с пептон-глюкозой за 24 чроста дает осадок и тонкую пленку.Б, Образует 2-8 апланоспор (эндоспор) после разрыва материнской клеткиапланоспоры повторяют цикл, а небольшое их число образует гипроспоры (покоящиеся" клетки),В, Форма клеток сферическая илиэллипсоидальная., Размер клеток 1525 х 20-30 мк. Образуют агрегаты. Хорошо просматриваются ядра и защищающиеих гранулы.Г. Половой цикл не наблюдается,Д, Физиологические характеристики;1, Использование источников углерода1.1. Ферментативное использование,Глюкоза кислотное, медленное,без выдеделения газаотрицательноеотрицательноеотрицательноеотрицательноеРаффиноза отрицательное Мелибиоза отрицательное Инулин отрицательное Крахмал- А.-Метил-О-глюкоза1,2,Ассимилятивное использование.2-Глюкоза положительное 33- Галактоз а отрицательное Сахароза отрицательное Фруктоза положительное Мальтоза отрицательное Лактоза отрицательное Мели биоз а отрицательное Инулин отрицательное Растворимый крахмал отрицательное Д. -Метил-О-глюкоотрицательное 1, -Сорбоза отрицательное Салицин отрицательное Арбутин отрицательное Целлобилоза отрицательное отрицательное Треалоза отрицательное Мелицитоза отрицательное 2 -Ксилоза отрицательное 2-Арабиноза отрицательное (-Арабиноза отрицательноеВ-Рибоза отрицательное Ь-Рамноза отрицательное Метанол отрицательное Этанол положительное Н-пропанол положительное Изо-пропанол отрицательное Н-бутанол положительное Трет- бутанолотрицательное Цикло-гексанол отрицательное Глицерин положительное Рибит отрицательное Эритрит отрицательное Дульцит отрицательное З-маннит отрицательное горбит отрицательное Инозит отрицательное З Ь -молочная кислота отрицательное Янтарная кислота отрицательноеЛимонная кислота отрицательноеН-парафины положительное2 Использование источников азота.Использует ион аммония, нитраты,мочевину.3. Факторы ростаТребует тиамин 4, Рост при различных температурах40 С отрицательныйо15 - 40 С положительныйШтамм хорошо развивается при концентрации зтанола в питательной средедо 4, предпочтительно в интервале,температур 30-38 С при рН в интервале от 1 до 8, предпочтительно 3-5.Выход биомассы от этанола составляет60-70 Ьиомасса содержит 50-60 сыоого протеина,Штамм хорошо развивается как впериодическом, так и в непрерывномпроцессах культивирования,П р и м е р 1, Для культивирования штамма Ргоо 1 Ьеса Еорй 11 айаг. Нагсоцг 1 855 А готовят питательнуюсреду следующего состава, мг/л:Сульфат аммония 5000Монофосфат натрия 10000Дифосфат калия 10000Сульфат магния 200(пентагидрат) 5Борная кислота 500Сульфат марганца2 О (гидрат) 500Иодат калия 10Хлорид кальция (гексагидрат) 10Трехокись молибдена 10РН среды доводят до 5 и разлива-.ют по 100 мл в колбы емкбстью 500 мп,Среду стерилизуют 3 мин при температуре 116 С, затем добавляют этанол израсчета 1 об,.Колбы инокулируют трехдневной культурой водоросли, хранившейся на этойже среде с 2 агар-агара,Колбы помещают на качалки, вращающиеся со скоростью 220 об/мин, и термостатируют при температуре 30 С втечение 24 ч.После этого в колбы добавляют этанол до концентрации 2 об.и снова термостатируют.Через 33 ч культивирования концентрация биомассы достигает 18,7 г/л,П р и м е р 2. Штамм Рго 1 о 1 йеса40 Еорй 11 аг, Нагсоцг 1 855 А культивируют в лабораторных аппаратах объемом16 л. Аппарат оборудован турбинноймешалкой и четырьмя отражательнымиперегородками,45 Состав питательной среды аналогичен приведенному.в примере 1. Отличиесостоит в том, что содержание солейФосфорной кислоты составляет 2000 мг/л.Среду в аппарате стерилизуют 30 минпри температуре 116 С,охлаждают до35 С и инокулируют 21-ой часовой10-ной культурой водоросли из колбсо средой, указанной в примере 1.Культивирование проводят при тем 55 пературе 35 С,скорости вращения мешалки 1000 об/ми в аэрации 0,5 об/мин хх рН среды доводят до 4 при помощи карбоната натрия, Этанол добавляют в начале процесса до концентра 60 ции 1 об. и через 24 ч культивирования - до концентрации 2 об.,После 43 ч культивирования клеткиотфильтровывают через бумажный Фильтр,промывают водой и сушат под вакуумомпри температуре 90 С,708997 102000 22 Ъ20 20 Формула изобретения Составитель О, ВеликославинскаяРедактор Н. Вирко Техред З.Фанта Корректор С.Шекмар Заказ 8529/56 Тираж 522 . Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5Филиал ППП Патентфг г, УжгоРод, Ул. ПРоектнаЯ, 4 Концентрация биомассы 50,5 г/л, Био.масса содержит 52 (56)сырого протеина и 4,73 линидов,П р и м е р 3., Штамм РгогойесаЕорй 1 айаг. Нагсоцгг. 855 А культивируют в аппарате (объем 16 л),оборудованном турбинной мешалкой и четырьмя отражательными перегородками.В аппарат вводят 7 л среды следующего состава, мг/л:Дифосфат натрия (гидрат)Дифосфат калияСульфат магния (гептагидрат) 200Сульфат аммония 5000Сульфат железа (гептагидрат)Сульфат цинка (гептагидрат)Хлорид кальцияРаствор микроэлементов(мл/л ) 2 20Экстракт дрожжей (г/л) 0,5Этанол (г/л) 37,6Перед добавлением этанола рН среды доводят до 4. Среду стерилизуютв течение 30 мин при температуре 25116 С.Культивирование проводят непрерывным способом при скорости разбавления среды 1/19 час г скорости вращения мешалки 2000 об/мин и аэрации 1,5 об./об.мин,Получают следующие результаты;Я - концентрация этанола в культуральной жидкости 0,067 г/лХ - концентрация биомассы 25,12 г/л1 суб - гбиомассы/г субстрата0,66Р - продуктивность 4,8 г/л,час.Биомассу отделяют центрифугированием, промывают водой и сушат ввакуум-сушилке40Состав биомассы,Вода О.,б. Зола 7.г 04Азот (по Кьельдаля) 8,45Сырой белок ( 6,25) 52,6245Белок (по биуретовойреакции) 45,7Сырые линиды 4,82Жирные кислоты 3,08Растворимые углеводы 11,96 50Сырое волокно 2.,5Рибонуклеиновая кислота 15,17Дезоксирибонуклеиноваякислота 0,42 Элементарный состав,:С 46,1; Н Ь 71; Б 8 г 32Состав нормальных жирных кислот, ;С 44. 1 38С 16 29 г 12С 6 1 0,9С 1 е 4 44св: 28, 46С 1 е; 2 35,7Состав аминокислот, г/100 г сухой биомассы:Лизин 1,88 Гистидин Ог 779 Аргинин 5 г 11 Аспарагиновая кислота 3.,03 Треонин .1 73 Серин 1 г 56 Глутаминовая кислота 4 85гПролин 3,13 Глицин 1,98 Ал анин 2,26 Валин 2 11 Мети онин 0,83Изолейцин 1,12 Лейцин 2,95 Тирозин 1,32 Фенилаланин 1,55 Триптован 0,23 Такимобразом, в процессе культивирования штамма Ргоо 1 Ьеса Еорг 13. гаг Нагсоцгг. 855 А получают высокий выход биомассы - до 66 от потребленного субстрата при содержании белка в биомассе 52-53,Способ культивирования водорослей. рода Рго 1 оЬеса на питательной среде, содержащей этанол в качестве источника углерода, источник азота, необходимые минеральные соли и биостимуляторы, в условиях аэрации, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода биомассы, из рода Ргого 1 Ьеса используют штамм Ргр 1 о 1 Песа Еорг 11 айаг. Нагсоцг 1 855 А, при этом культивирование осуществляют с концентрацией этанола в питательной среде 1-2 при температуре среды 33-37 С и рН 3-5Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Патент Великобритании 91375189 гкл. С б Рг опублик. 1974 г.