Способ получения витамина в 12, меченного кобальтом-57 или кобальтом-58

аннов Сееетскпк Сецмамстнчеспнз РеСпублик(72) Авторы изобретени ИностранцыДжон Сеснл Чарльтон и Алан Льюис Хамильто (Великобритания) Иностранная фирмаиокемикал Сентр Лимитед(54 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИТАМИНА В ,ЧЕННОГО КОБАЛЬТОМИЛИ КОБАЛЬТОМ30 1) Дополнительный к пате Изобретение касается получения витамина Вмеченного кобальтом Или кобальтом, который может найти применение в медицине,Известен способ получения витамина В ,меченного рарроактивным иэотопом кобальта (Сеа), который состоит в том, что в культуральную средувводят соль радиоактивного изотойакобальта, и процесс продуцирования 10витамина Вт проводят при значенияхрН среды близким к 7 (1).Основной недостаток этого способасостоит в, том, что. для получениявйтамина В. с достаточной для биоло-.гических исследований удельной актив"ностью необходимо использование больших количеств дорогого реагента радиоактирной соли кобальта, что вызвано проведением процесса в большом 20объеме культуральной жидкости,Однако этот способ не позволяетполучить витамин В 2 с достаточно высокой удельной активностью,Нрименяевый в настоящее время в 2медицинской практике меченный кобальтомвитамин В обладает удельнойрадиоак 1 ивностью около 12 микрокюрина 12 мкг. Способ получения этогопрепарата в литературе не описан. 2Цель и зобретени я - получение витамина В, меченного кобальтом или кобальтом, обладающего высокой удельной активностью.Поставленная цель достигается описываемым способом получения радиоактивного витамина В,1, который состоит в .том, что полученный ферментативным путем витамин ВА-(5,б-диметилбензимидоэолил) -гидрогенобамидподвергают взаимодействию с солямикобальта в инертном растворителе присоотношении 0,2-50 молекул А-.(5.6-диметилбенэимидазолил)-гидрогенобамида на атом кобальта, при температуре 0-100 С, с последующим выделением целевого продукта.Предпочтительными вариантами способа являются: поддержание рН реакционной массы в пределах 4-8, проведениепроцесса в темноте,Осуществление способа получениявитамина В, по предлагаемой схемепозволяет при небольших расходах дорогостоящей радиоактивной соли кобальтаили кобальта, меньшемвремени контакта с радиоактивноймассой получить меченный витамин Вс высокой удельной активностью (неменее 150 микрокюри н мкг),145 4та Со(20 милликюри Сов2,7 мкг кобальта, что отвечает распространенности изотопа в. 82) в3,0 мл воды с величиной рН от 7,0 до7,5, раствор выдерживают в герметизированном сосуде на водяной банепри температуре 80 оС, в темноте втечение 2 ч,По истечении этого времени отбирают. 5-ную аликвоту раствора, добавляют к нему 1 мл водного 0,1-ного раствора носителя гидроксокобаламина и затем 1 мл 1-ного водногораствора цианида калия. Реакционнуюсмесь хроматографируют на колонкесо смолой хАд(как и в примере 1),Продукт элюируют 20-ным водным раствором третичного бутанола и исследуют посредством злектрофореза (каки в примере 1). В результате электрофореза обнаружен ряд зон Радиоактивности, включая острый пик, точноСоответствующий узкой окрашенной врозовый цвет полоске цианокобаламина. На основании полученных данныхвычисляют, что в реакционной смесиприсутствует 2,0 милликюри цианокобаламйна, Со, что соответствует 10-ному выходу из расчета наСо.Реакционную смесь обрабатываюткак это бйло описано выше, без добаэлейия оксо-кобаламина, Выцеляют свыше 1 милликюри цианокобаламина,Сос 90-ной степенью радиохимической чистоты (50-ный выход израсчета на Со)Основной объем реакционной смесиподвергают обработке, как было описано выше, беэ добавления носителя,Эта обработка заключается в выпаривании реакционной смеси досуха,растворейии оставшегося после выпаривания осадка в 5 мл воды и в двухкратйом экстрагировании 2 мл смесикрезола с четыреххлористым углеродомв соотношении 1:1. Органическую фазуотделяют, промывают 1 мл воды,. а затем экстрагируют 6,мл смеси н-бутанола с четыреххлористыМ углеродом,Цианокобаламин активностью равной1 мКи, Со, со степенью радибхимической чистоты 90., после хроматограФического разделения водного раствора подвергают регенерации, используяцеллюлозу СИ и ДЕЛЕ и в качествеэлюента воду (выход 5 в расчете наКобальт).Это количество слишком мало, чтобы можно было произвести определениеудельной активности. Расчет показал,"что активность составляет 300 микрокюри на,1 мкг.Этот опыт можно повторить с применекием хлористого кобальтавместо.хлористого кобальта, что даетаналогичные результаты.Те форж витамина В, в которыхежевидная группа заменена гидроксиль; 667П р и м е р 1, К 2,5 мкго("(5,6-диметилбензимидазолил)-гидрогенобамида) присутствующего в 25 мкг сырого материала, полученного при выращивании штамма хроматиум ЛТСС 17899в присутствии 5,6-диметилбензимидазола) в 3 мл зтанола прибавляютраствор хлорида двухвалентного кобаль та(0,40 милликюри в 0,054 мкгкобальта, что соответ "твует распространенности изотопов 82) в 0,4 млводы .с величиной рН бт 7,0 до 7,5 и 10раствор выдерживают при комнатнойтемпературе в темноте, в течение48 ч. К этой реакционной смеси добавляют 1 мл 0,1-ного водного раствора гидроксокобаламина, а затем 1 мл 151-ного вес/об/водного раствора цианида калия, который непосредственнодо ввода в реакционную смесь подкисляют сопяной кислотой. Сырую реакци"онную смесь разделяют на две .порциии каждую порцию выпаривают досуха20Эти порции подвергают различным обработкам.а), Смола ХАДОставшийся после выпаривания осадок одной из порций растворяют в1 мл воды и подвергают хроматографическому разделению в колонке, напол- ;ненной смолой ХАД(Амберлит) с частицами размеРом прймерно 100 мкмнеорганическйе ионы отмывают водой, З 0Цйанокобалаьвн Элюируют 20-Мым водным раствором третичного бутанола.б). Экстракция -растворителем,Оставщийся после выпариванияосадок другой порции растворяют в 3 мл Мводы и экстрагнруют 2 мл смеси крезола с четыреххлористым углеродомв соотношении 11. Отделенную органическую фазу промывают 1 мл воды,а затем экстрагируют 6 мл смеси н-бутанола с четыреххлористым углеро-.дом, в соотношении 2:1,Исследование проб из первой. ивторой порций путем электрофореэаНа бумаге с использованием буферной 45сйеси, включающей 1-моляриую уксусную кислоту и фосфат, с величинойрН, равной 6,5, показало, что в каждом случае выход цианокобаламинав реакциойной смеси составляет 5060 (в расчете по Кобальту). 0Для.получения витамина В, меченного кобальтомпроцесс проводятв тех же условиях, но вместо хлорис- .тогокобальтаприменяют хлористыйкобаАт,:56П р и и е р 2. В опыте использу-,ют соотнааение 5 молекул предшествейника витамина Вна атом кобальта.340 мкгд. - (5,6-диметилбенэимидаэо Е)лил)-гндрогенобамида, содержащихсяв 3,4 мг сырого материала, растворяют в 2,0 мп воды, получают мутныйоранжево-розовый раствор. Прибавляютраствор хлорида двухвалентного кобаль.Формула изобретения 1. Способ получения витамина Вд меченного кобальтомили кобаль"том, о т л и ч а ю щ и й с я тем, чтооС-(5,6-диметилбензимидазолил)- -гидрогейобамид подвергают взаимодействию с солями кобальта в инертном растворителе, при соотношении 0,2- 50 молекуло(.-(5,6-диметилбензимидСоставитель В.ВолковаРедактор И.Марховская Техред О. Андрейкр Корректор М. Вигула Заказ 3244/48 Тираж 512 Подписное ЦНИИПИ ГосударственнОго комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб. д. 4/5Ф йфилиал ППП Патент, г.ужгород,. ул,Проектная,4 5ой или другой группой легко могут ать получены иэ цианокобаламина из вестным способом.Очистка исходных материалов изве:стными способами дает более высокие результаты. 667145 6,азолил)-гидрогенобамида;на атом кобальта, при температуре 0-100 фС, споследующим выделением целевого продукта.2. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что процесс проводятпри рН 4-8,3. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что процесс проводятв темноте,Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе1. 1.СЬок 1 ВАоэупСЬевХэ ой йад 1 оас 1 Ые Ч 1 йащ 1 пе Вэ Соп 1 а 1 п 1 пд СоЭ8 с 1 епсе, 1950, 1 Н , р. 6012, ВачгаМа Н.М. АээауоГ ЧЫащАпВ Ы ВХоой, А эХщр 1 е пейод, Ьапсей1961, 2, р. 25.