Способ получения арахидоновой кислоты

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 643496 Своз СоветскихСециаяистицескикРеспублик,76 (21) 2403863/23-04 7 С 57/О 1 В 13/0 сударствеииый комитетСССРдедам изобретенийи открытий) Заявител Эстонской ССР нститут хнм(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АРЬтИДОНО КИСЛОТЫЦель инологии пр етения - упрощенсса. с присоединением заяви и 23) ПриоритетИзобретение относится к усовершен ствованному способу, получения арахидоиовой кислоты, которая является предюественником простагладнинов.Известен. способ получения арахидоновой кислоты из липидов животных тканей путем их ошаления с последующей последовательной Фракционной кристаллизацией смеси высших жирных кислот при температуре отдо -20 фС 1 ф и обработкой мочевиной, дальнейшей кристаллизации полученных мочввинных комплексов при температуре от -75 до -20 оС и их разложением при рй 3 и температуре 40-45 ОС, полученную при ф этом смесь цолиеновых кислот зтериФицируют в присутствии кислых кататдезаторов и полученные эФиры полиеиовых кислот последовательно подвергают фракционированию при остаточном давле-ф нии 0,01-0,06 мм рт.ст., оььлению и фракционировании при 0,010,06 мм рт,ст. 13.Этот способ имеет недостаток, который заключается в том, что обработка мочевиной значительно усложняет технологию процесса. Это достигается тем, что в способе получения,арахидоновой кислоты нз липидов животных тканей путем их омыления с использованием ннэкотемпературной кристаллизации, этериФнкацни и омыления полученную после омыления смесь высших жирных кислот подвергают кристаллизации при температуре от 0 до -5 оС, из жидкой Фазы извлекают неомылнемую часть липидов зкстракцией петролейным эФиром, оставшуюся жидкую Фазу подкисляют минеральной кислотой, из полученной реакционной массы экстрагируют жирные кислоты петролейным эфиром, экстракт подвергают кристаллизации при температуре от -28 до -30 фС, а затем при температуре от -75 до -78 оС, петролейный эФир отгоняют, полученную смесь кислот подвергают кристаллизации в ацетоне при температуре от -77 до -78 оС с последующей его отгонкой, полученный при этом концентрат арахидоновой кислоты этериФицируют метиловым спиртом и очищают хроматограФией на снликагеле, импрегнированном ннтратом се" ребра в колонке с использованием в качестве элюента гексана н/или диэтилового эФира, причем последнийберут в количестве 5-100 от веса гйксана, из полученного концентрата метиловых эфиров выделяют арахидоновую кислоту путем испарения элюента с последующим щелочным гидролизом, зкстракцией петролейным эфиром, подкислением полученной реакционной смеси " ф минеральной кислотой и зкстракцией арахидоновой кислоты петролейным эфиром.Способ осуществляют следующим образом. 1 О250 г липидов надпочечников крупного рогатого скота подвергают щелочному гидролизу с расчетом 20 мл 0,3 н, раствора едкого натра в метаноле на 1 г липидов. Гидролиз проводят в те- ц чение 2 час при температуре рефлюкса н;перемешивании реакционной смеси в атмосфере аргона. По окончании гидролиэа смесь охлаждают льдом до температуры 0-5 С. В результате охлаждення содержание арахидоновой кислоты в смеси кислот, присутствующих в гндролизате, повьыается с 8-10 до 16-18 (отн.о хроматограмме) . Жндкую фазу отделяют через мелкопор)истую пластинку при помощи вакуум" ного насоса и извлекают неомыляемые л)аспиды 3-4-кратным экстрагированием петролейным эфиром (ПЗ), При т.кип.40-60 С порциями по 500 мл воднооспиртовую Фазу подкисляют соляной кислотой до рН 1 и экстрагируют жирчце кислоты тремя-четырьмя порциями П 5 по 500 мл в атмосфере инертного газа. Жирнокислотные экстракты соединяют и охлаждают 12-15 час при 35 температуре от -28 до -ЗООС, при этом происходит частичное выкристаллизовывание насыщенных жирных кислот, после чего содержание арахидоновой кислоты в растворе смеси кислот сос тавляет 24-25, Маточный раствор отделяют при этой же температуре непосредственно в другой кристаллизационной цилиндр под действием вакуума через мелкопористую пластинку и под вергают низкотемпературной кристаЛ- лизации (НТК) при температуре от -75 до -78 С над твердой углекислотой в ечение 6-7 час. Содержание арахидоновой кислоты в смеси жирных кислот повышается до 40-45. После этого петролейный эфир удаляют на роторном испарителе и заменяют там же 700 мл ацетона. Ацетоновый раствор помещают на твердую углекислоту при -78 С на 10-12 час, после чего маточный раствор извлекают приведенным способом в следующий кристаллизационный сосуд (цилиндр), ацетон упаривают в потоке инертного газа (азот или аргон особой Чистоты) до объема 150 мл и повторяют 60 НТК при -73 С в течение 10 час. Получаемый после упаривания ацетона концентрат арахидоновой кислоты (8- 9 г содержат 65-67 основного компонента) подвергается после метили рования очистке на 502/АИОЭ колоНке с использованием гексана и/илндиэтилового эФира. Последний берут вколичестве 5-100 (от веса гексана),получают концентрат метиловых эфировкислот в виде смеси с сольвентом,Гексан и/или диэтиловый эфир испаряют, концентрат эфиров гидролизуютдействием метанольного раствора 8 аОН,после гидролиза щелочную реакционнуюсмесь экстрагируют петролейным эфиром, после этого реакционную смесьподкисляют соляной кислотой и экстрагируют арахидоновую кислоту петролейнцм эфиром,После колоночной хроматографиивыход составляет 5-6 г 95-97 арахидоновой кислоты. Остальные 3-5состаВЛЯЮт более ненасыщенные жирникекислоты с 4- и 5-кратными связями,В получаемой арахндоновой кислотеотсутствуют сопряженные полиеновыекислоты. Отсутствие сопряжения кислотпроверялось по Уф-спектру на длиневолн 233, 268, 278 и 315 нм. Прииспытании пригодности полученной арахидоновой кислоты для биосинтеза простагландина Е(ПГЕ) выход последнего составил 33-35 из расчета насвободную кислоту. Выход ИГЕ оп 2ределялся по известному методу щелочной деградации.Анализы полученной арахидоновойкислоты, а также промежуточных продуктов осуществляет газохроматографическим методом на хроматографе Хром(пламенно-ионизационный детектор, колонка 3,5 м 3 мм, жидкие фазы: 1,4 бутандиолсукцинат и ХЕ, температура термостата колонки 210-220 фС, гаэноситель- гелий) . Формула изобретенияСпособ получения арахидоновой кислоты из липидов животных тканей путем их омылеиия с использованием низкотемпературной кристаллизации, этерификации и омыления, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения технологии процесса, полученную после омыления смесь высших жирных кислот подвергают кристаллизации при 0.(-)5 С, из жидкой фазы извлекают неомыляемую часть липидов экстракцией петролейнцм эфиром, оставшуюся жидкую фазу подкисляют минеральной кислотой, из полученной реакционной массы зкстрагируют жирные кислоты петролейным эфиром, экстракт подвергают кристаллизации при температуре от -28 до -30 С, а затем при -75 до -78 С, петролейный эфир отгоняют, полученную смесь кислот подвергают криста.лизации в ацетоне при температуре от -77 до -78 ОС с последующей его отгонкой, полученный при этом концентрат арахидоновой кислоты этерифицируют метиловым спиртомЗаказ 7937/24 Тираж 512 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5 Филиал ППП Патент, г, ужгород, ул. Проектная, 4 и очищают хроматографией на силикагеле, импрегиированном нитратом серебра в колонке с использованием в качеСтве элюента гексана и/или диэтилового эфира, причем последний берут в количестве 5-100 от веса гексана, иэ полученного концентрата метиловых эфиров выделяют арахидоновую кислоту путем испарения элюента с последующим щелочным гидролизом, экстракцией бпетролейным эфиром, подкислениемполученной реакционной смеси минеральной кислотой и экстракцией арахидоновой кислоты петролейным эФиром.Источники информации, принятыево внимание при экспертизе1. Заявка В 2339452/04, в кл. С 07 С 57/02, 31.03.76, по которой принято решение о выдаче авторского свидетельства.