Способ определения общего белка в растворе

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сфез Сфветскнк Социалистнческии республик(22) Заявлено 050176 (21) 2310166/28 с присоединением заявки Ю -1) М. К . 01 и 33/1 Государственный комитетСовета Министров СССРпо делам изобретенийи открытий,8 5) Дата опубликования описания 10,1278(54) СПОСОБ ОПР О БЕЛКА ЕЛЕНИЯ ОАСТВОРЕ Изобретение относится к биологической химии и может быть использовано в анализе растворов для количест венного определения общего белка.Известен способ определения общего белка в растворе путем воздействия на испытуемый раствор реагентом с последующим фотометрированием полученного окрашенного комплекса 11Однако на приготовление модифицированного раствора Фолина затрачивается значительная часть времени (10 ч.) и известный способ не обеспечивает высокой чувствительностиЦелью изобретения является повышение чувствительности и ускорение спосо астворго расттаноле,натра вотометри 25 ла в м едкого перед смесь60-61 т сле грев аю веоццел ющим Дпя этого на испы воздействуют смесью вора 1,2-динитробенз формалина и 20-ного соотношении 1:2:2, и рованием реакционную в течение 3-4 мин прСПособ осуществляю образом. В каждую из двух пробирок, в одной из которых находится 1 мл испытуемого водного раствора (опытная проба), а в другой 1 мл бидистиллята ( контрольная проба), последовательно добавляют 1 мл 0,25-ного раствора 1,2-динитробензола (Ч ТУ-68, дважды пере- кристаллизованного из этанола) в метаноле (ХЧ ГОСТ 6995-67), 2 мл раствора 40-ного формальдегида и 2 мл 20-ного раствора едкого натра (ХЧ 1 ГОСТ 4328-66) . Опытную и контрольную пробы термостатируют при ЪО+1 С в течение 4+0,5 мин. Через 3 мин после окончания термоататирования измеряют разность оптических плотностей обоих проб дифференциальным способом в кюветах 2 см при 520 нм на фотоколориметре типа ФЭК-М. Концентрацию общего белка в пробе определяют по заранее построенной калибровочной кривой в координатах разность оптических плотностей - логарифм концентрации белка,Ниже на примере лактальбумина придены расчетные данные, позволяющиеенить точность количественного опреения по предлагаемой методике.,87 ,02 ,78 ,56 ,42 5 10 1 10 5 ф 10 1 10 5 10 110 Примеры общего атах да ены соо еделени пар вед опр Табл ацияЙ Кров 8-9 8 Дрожже автоли Оценка метода. по растворах Иентрациг щие апред приведена б 10 30лица 4 с Концентрация Примес Глюкоз ь Концентраци 1 10(Х ензофенон тиленглико рсенит,арсена 5 10 озольв ульф иты, ерма ы,сульихроматанаты 10 10 Ацето цет фир ксусн 10 Эфиркисл малоновой гЪюВ табл. представлены экспериментальные данные кинетики распада окрас ки восстановленной формы 1,2-динитробензола (при 520 нм) после окончания термостатирования,Представленные результаты свидетельствуют о том, что максимальное развитие окраски наблюдается на 3 5 мин после термостатирования с последующим ее ослаблением. 25"Т а б л и ,ц а 2 Время,после Оптическая плотность термостатиро,растворов при различвания, мин ных концентрл лактальбумин.-4О ),1 10 1" 10 " 10 1 0,860 1,08 1,40 1,76 2 0,865 1,085 1,41 1,77 35 3 0,870 1,.09 1,42 1,78 4 0,860 1(08 1,40 1,77 5 0,850 1,07 1,38 1,75 0,840 1,04 136 1,73 0,80 0,87 1,18 1,55 40 О,бб 0,74 0,81. 1,15количественного определебелка в % в некоторых преы в табл.3, где также приветствующие результаты известными методами. специфичности предлагаемряду примесей в исследуемыка именно наименьшие конпримесей в растворе, мешаюелению общего белка в мг/л табл.4.636534 10 Составитель В,ГоловинТехред Н.Андрейчук Корректор Л.Небола Редактор А.Мурадян Заказ 6932/35 Тираж 1070 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5филиал ППП фПатентф, г,ужгород, ул. Проектная, 4 Оптимальными средами для проведения реакции являются водно-спиртовые. При исследовании бинарных смесей различных спиртов (от метилового до амилового) с водой существенных отличий не наблюдалось. Допустимое содержание метанола в реакционной среде не более 25. Более высокое содержание спирта 5 приводит к уменьшению чувствительности определения белка,Предлагаемый способ обеспечивает высокую чувствительность и сокращает время определения белка.формула изобретенияСпособ определения общего белка в растворе путем воздействия на испытуемый раствор реагентом с последующимфотометрированием полученного окрашенного комплексао т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения чувст.вительности и ускорения способа, наиспытуемый раствор воздействуют смесью 0,25 Ъ-ного раствора 1;2-динитробензола в метаноле, формалина и20-ного едкого натра в соотношении1 г 2:2, и перед фотометрированием реакционную смесь нагревают в течение 34 мин при 60-61 С. Источники информации, принятые вовнимание при экспеотизе 1, Х.ЮоВ.СИЮт. 19 3265, 1951.