Способ определения общей фосфатазной активности почв

Союз Советсмык Соцмалмстммескмк Республмн(51) М. Кл 1 И 33/2 исоединением заявкиГесудерстеенный комитет СССР ее делам изосретенкй и аткрмтнй23) Приоритет публиковано 05.04. 79,Бюллетень13 Дата опубликования описания 08,04.79(72) Автора изобретения Гинзб Т. Геллер кучаева Всесоюзной наук им. В, И. Ленинаут им. В. В, зяйственнь Заявител Почвенный инс академии сельс) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБШЕЙ ФОСФАТАЗНОЙ АКТИВНОСТИ ПОЧВной фосфорхлористым Изобретение относится к почвенной , энзимологии и может быть использовано в почвенно-агрохимических и микробиологических исследованиях для характеристики биологической активности почв.Известен способ определения фосфатазной активности, при котором контрольные анализы проводят с простерилизованной почвой, а ферментативную реакцию останавливают добавлением трихлоруксусной кислоты с последующим нагреванием пробы Е 13. Недостатком этого способа является значительное химическое изменение в анализируемом образце в результате автоклавирования почвы и искажение результатов анализа за счет вычитания ошибочно полученного контроля.Известен также способ определения фосфатазной активности торфяно-болотных почв, в котором вышеуказа 1 пый недостаток устраняется тем, что в контрольном варианте органический субстрат инкубируют с почвой, предварительно инактивированной ингибиторами фосфатаз, В качестве инактиватора фосфатаз исполь зуется неспецифический ингибитор фосфатаз - фторид натрия, который добавляется в количестве 0,4 мл на 2 г почвы при времени взаимодействия 1 мин. Такое же количество фторида натрия используется в опытном варианте для остановки ферментативной реакции по окончании инкубации почвы с органическим субстра том Г 2Недостатком метода является получение вытяжек, окрашенных гумусовыми веществами в буро-коричневый цвет, что мешает последующему колориметрическому определению фосфора в растворе.Для устранения мешающего действия гумусовых веществ на колориметрическое определение фосфора Рунков и Козловская используют метод экстракции иона ортофосфата спирто-эфирной смесью с последующим восстановлением экстрагированно- молибденовой кислоты двуоловом,655968 Т а б л и ц а 1 Использование различных концентраций СаС 0 в качестве ингибитора фосфатаз на каштановой почве% к контролю Контроль (безСаСМ,5 70 10 10 Метод громоздок и мапо пригоден для массовых определений. Кроме того, он может быть использован только для торфяно-болотных почв.Целью изобретения является упрощение известного способа и его унификация для почв с разной биологической активностью.Сущность изобретения состоит в томчто для инактивации фосфатаз в почве контрольного варианта и для остановки Последующее извлечение продукта гидролиза органического субстрата- ионаэРО, производится с помощью 0,02 н.НС, которая вносится непосредственно в реакционную смесь.Использование раствора СаСЮ в ка 40 честве ингибитора почвенных фосфатаз и 0,02 н,раствора НС 6 в качестве растворителя иона ортофосфата обеспечивает получениь бесцветных и прозрачных поч- венных филЬтратов, не мешающих после 45 дующему колориметрическому определению фосфора ( которое проводится непосредственно в аликвоте прозрачного фильтрата).В предлагаемом способе для измерения фосфатаз в почвах с различной биологической активностью, время настаивания органического субстрата с почвой увеличено с 1 ч до 2 ч. Это дает возможность выявлять фосфатазную активность и в почвах с малой биологической активностью.Опытный вариант. 1 г воздушно-сухой почвы (сито 0,25 мм) помещают в плоскодонные колбы емкостью в 100 мл, смачивают 1 мл дист. воды и приливают ферментативной реакции в опытном варианте использован метод одновременного высаливання фермента и осаждения органического субстрата из реакционной смесис помощью 10 М раствора СаСС2 мл 10 М раствора СаСК добавляеъся к 1 г почвы при времени его взаимодействия с почвой 15 мин. Это позволяет инактивировать действие фосфатаз восновных типах минеральных почв. раствор органического субстрата - 1 мл 1 %-ного раствора фенолфталеинфосфата натрия.Получению смесь помешают в термостат при 27 С и инкубнруют с органическим субстратом. Затем в колбы приливают 2 мл 10 М СаС 1 для остановки фермептативной реакции, смесь перемешивают и добавляют 10 мл 0,02 н.,НС 8 для извлечения продукта ферментативной реакции - иона ортофосфата. Полученную суспензию встряхивают от руки 1 мин, настаивают 15 мин, отфильтровывают в мерные колбы на 50 мл, доливают дист. водой до метки и перемешивают (раствор А). 5-10 мл. раствора А переносят в мерные колбы на 50 мл, разбавляют водой н приливают реактивы для окрашивания фосфора по методу Труога-Мейера.Контрольный вариант. 1 г воздушно- сухой почвы (сито 0,25 мм) помешают в плоскодонные колбы на 100 мл и для инактивапии фосфатаз приливают 2 мл4(Голодная степь) 2,4 Серозем светлый (Голодная стейь) 13,5 10,0 3)5 Краснозем (Анасеули) 07 1,0 1,7 10 М раствора СаС 8, смесь настаивают 15 мин. Затем сюда же добавляют раствор органического субстрата в тех же количествах,как н в опытном вариантеколбы ставят в термостат на 2 ч при 27 С, Затем приливают 10 мл 0,02 н, раствора НС 1 и далее извлекают и определяют фосфор точно так же, как описано выше в опытном варианте. Формула изобретения45 Способ определения обшей фосфатазной активности почв, включаюший инактивацию почвы контрольного вариантаЪ"ингибитором, компостирование почв.50 контрольного и опытного вариантов с органическим субстратом - фенолфталеинфосфатом натрия, остановку ферментативной реакции в опытном варианте ингибитором,экстрагирование продукта гидра55 лиза органического субстрата - иона ортофосфата соляной кислотой и последуюшее фотоколориметрирование, о т л и - ч а ю ш и й с я тем, что, с целью уни: -Активность фосфатазы вычисляют поразности между содержанием фосфора вопытном и контрольном вариантах. Полу- ченные результаты выражают в мг Р О 5 на 100 г почвы. Результаты определения активности почвенных фосфатаз; предложенным методом приведены в табл, 2.фикации способа для почв с разной биологической активностью и повышениемточности определения, почву компостируютв течение 2-х ч, инактивируют фосфатазу10 М СаСС; и экстрагируют ион фтор-,фосфата 0,02 н. НС,Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе 1. Купревич В. Ф Щербакова Т, А.,Почвенная энзимология, Минск, 1966,2. Рунков С. ВКозловская Н. А.К методике определения фосфатвзнойактивности торфяно-болотных почв. Агрохимия, 1974, М 4.