Способ получения ферментного препарата содержащего -1, 3 и 1, 6 глюканазу

1 ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДВПЛЬСТВУГввудврстввнвый ииапвт Ввввтв Мвввстрвв СССР вв двввм взвбрвтвввй в втхрктвй) Заявител Ордена Ленина Ин биохимии им аха(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА, СОДЕРЖАЩЕ б - 1,3 И 13 - 1,6 = ГЛЮКАНАЗУ О; Для этого согласно преддагае мому способу в кавида,бео 1 йсйшп ка углерода, азоенно свеклович.тнокисльй натрий 26 честве продуцента ис апс 11 дое а в кач та, фосфора испольэу пользуют гриб естве истощщ ют соответств ю отруби, азо Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству ферментов микробного происхождения и р - 1,3 и р,6 глюканаэ, которые могут быль использованы для расщепления глюканов в клеточной стенке дрожжей. аИзвестен способ получения р - гнюканаз путем глубинного выращивания АйЬ обое(е ьрАТССМ 021712 на питательной среде, содержащей источник углерода, азота, необходимые минеральные соли . с последующим выделением продукта 1) . ООднако при получении препарата известным способом выход Р глюканаз невысок и расщепление дрожжевого глюкана лри их действии происходит не полностью до глюкозы, В качестве источника уг.- лерода используют дорогостоящее и дефицитное 1 ф сырье - пекарские дрожжи.Целью изобретения является повышение выхода и удешевление технологии получения, Р,3 и Р 1,6- - глюканаз,20 и сернокислый аммоний и фосфорнокисльй калий однозамещенный .При этом на 1 л питательной среды используют 10 - 20 г свекловичного жома, 10 - 50 г пшеничных отрубей; 0,5 - 3,0 г йаМОз 0,1 - 1,5 г М 9804 7 Нг 0,5 - 3,0 г (йН 4)2804, 0,5 - 5,0 г КНР 04,Свекловичньй жом и пшеничные отруби дешев. ле пекарских дрожжей (стоимость 1 кг пекарских дрожжей 0,5 руб., а 1 кг свекловичного жома и пшеничных отрубей 0,06 руб.При этом используют в качестве продуцента Ъо 1 т, сЙи.гп сапй 1 дот штамм 3 с.Получаемый фермент стабилен при хранении и расщепляет как дрожжевой глюкан, тыс и другие Р - глюканъ, состоящие из клюкозных остатков, соединенных. Р,3 и Р,6 - связями, почти полностью цо глюкозы.Питательную среду стерилизуют известным способом, охлаждают и засевают 1 - 2 суточной культурой микроорганизма - продуцента р - глюканаэ, проводят ферментацию в течение 50 - 70 ч и выделяют фермент путем осаждения спиртом или ацетоном иэ фильтрата культуральной жидкости, ферментный препарат может быть получен путем высушивания фильтрата культуральной жидкости на распылительной сушилке.(ЙН 4) 3 804 1,50КНЗ РО 4 0,10м 98047 НЗ О 0,05Стерилизуют общепринятым способом, ЗасеваютЗл глубинной культуры бео 1 мсЬце сапйс 3 цп 1 Ьс 10двухсуточного возраста, выращенной на среде тогоже состава.Гриб культивируют в фермеитере при 28-32 Св течение 60 ч при аэрации Ц 2 мэ 1 на 1 мсреды и приперемешивании со скоростью мешалки 100 об/минрН среды после стерилизации 5,4 - 5,6. В препарате, полученном на распылительной су 30 шилке (целлокандин Г-Зх), содержится более 7 тыс, ед/г р - 1,3 - г)поканазьг, а- 1,6 - глюкзназы - более 200 ед, Спиртоосажденный препарат (целлокандин Г - 10 х) содержит этих ферментов на 35 - 40% больше.35Определение активности. К 5 мг субстрата (ламина- рану, дрожжевому глюкану, препарату клеточных стенок дрожжей 8. сее чза е или пустулану) в 0,5 мл ацетатного буфера рН 5,0, 0,1 М, добав 40 ляют 0,5 мл разбавленного раствора фермента, Смесь инкубируют в течение 1 ч при 40 С. Образовавшиеся сахара определяют по методу Сомоги - Нельсона, Из полученных результатов вычитаютколичество вос станавливающих сахаров, содержащихся в качестве пра.45 меси в ферментном препарате, а также в субстрате, .Активность глюканаз выражена в мг глюкаэы, которая образуется при действии 1 г ферментного препарата на субстрат в течение 1 ч при 40 С в стационарных условиях.50Культурально-морфологическая характеристика штаммз беоисЬив саМдце 3 с нз 10-е сутки:На синтетической среде Чапека с сахароэой н йзйОз - колонии диаметром 25 - 30 мм с ровным краем, радиально.складчатые, Воздушный мицелий порошнстый, скудньй, прижатый, белый. Обратная сторона колонии желтоватая, пигмента нет.На сусло-агаре (сусло 5 по Банлннгу) колонии диаметром 35 мм с глубокими радиальными складками, с ровным краем, слегка Вдавленным В згзр, слабо зональные. Полученную культуру сепарируют для отделе. ния клеток микроорганизма, и ферменты осаждают из центрифугата культуральной жидкости при добав. ленни трех обьемов спирта или двух обьемов ацетона. Отделенный фильтрованием осадок ферментов высушивают на воздухе.Активный ферментный препарат получают так. же путем высушивзния фильтрата культуральной жидкости на распылительной сушилке,В таблице даны результаты определения актив. ности р,3 и р 1,6- глюканаз в препаратах, полученных двумя раэличными способами, нри действии на ламинаран (Р 1,3- глюкан),дрожжевой глюкан, на препарат клеточных стенок дрожжей и на пустулан (ф.1,6глюкан); данные рассчитаны на 1 г препарата. Воздушный мицелий белый, тяжестый, шерстис.тый, Обратная сторона колонии желтовато. бурая, пигмента нет, В центре колонии - крупные капли желтовато-коричневого эксудата.Предложенный способ но сравнению с известнымобеспечивает:1. Повышение выхода целевых ферментов за,счетиспользования гриба есфг ьсйц,ш со,т 141 Ц 14 тии использования среды с жомом и пшеничными отру.бями, взятыми в качестве источника углерода.2, Удешевление среды за счет использования жомаи отрубей вместо пекарских дрожжей,3. Получение высокостабильных фермерые не теряют активности при хранении в тетрех и более лет,4, Получение ферментов, которые расщепляютдрожжевой глюкан полностью до глюкозы.оПрепарат может быть применен также для получения глюкозы из ламинзрана, постулзнз и нз клеточ.ных стенок дрожжей.Препарат можно применять в качестве добавки(премикса) в корм скоту, птице и свиньям для лучшего усвоения дрожжей (БВК), так как неусваиваемого дрожжевого глюкана и ннх содержится до 10%.Формула изобретения Способ получения ферментного препарата, соде жащего 3- 1,3 - и 3- 1,6 . глюканазу, предусматривающий культивирование продуцента ферментов нз питательной среде, содержащей источник углеро. дз, азота, фосфора и магний, о тли ча ю щи й с я598933 Составитель Т. ДеребренниковаТехРед 3, Фанта Корректор С В 1 екмар Редактор В. Днбобес Тираж 568 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретени н открытн 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб, я 45Заказ 1344/21 Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 тем, что с целью повышения выхода целевых фер.ментов, в качестве продуцента используют грибы вида СфоР 1 сМв ссвйдцвга в качестве источниковуглерода, азота, фосфора используют соответственносвекловичный жом и пшеничные отруби, азотнокислый натрий и сернокислый аммоний и фосфорнокис.лый калий однозамещенный,2.Способпоп.1, отличающийся тем,что на 1 л питате,пьной среды используют 10-20 гсвекловичного жома; 10 - 50 г пшеничных отрубей,60,5 - 3 г йайОа, 0,5 - З,О г (КН)130; 0,5 5,иКНг РОе , О,1 - 1,5 г М 9804 7 Н з О.3.Способпоп.1, отличающийся том, что из грибов вида беоСмсМ 1 п сапдтдопт. используют цпамм 3 с. Источники информации, принятые во вниманиепри экспертизе:1, Патент Великобритании Ие 1370346,кл. С ЗН