Холерный бактериофаг 7106 для проготовления диагностических препаратов
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 589254
Авторы: Александрова, Арутюнов, Дрожевкина
Текст
ОПИСА ИЗОБРЕТ Союз Советских Социалистических Республик(1115 892 54 ЕНИЯЕТЕЛЬСТВУ ВТОРСКОМУ СВ 1) Дополнительное к авт. сви Заявлено 12 Р 4.76 (21) 2338654/2 51) М. Кл. С 12 К 7/00 с присоединением заявки еоардаратееааь 41 аоматотСовета ееаааатреа СССРао аолаае аеобретеааЮа атарктай(088.8) 43) Опубликовано 2501.78, Беоллетень ЛЬ 45) Дата опубликован исания 1601 дрова н (0. И. Ар Рле 1 Заявитель остовский-на-Дону государственный научносследовательский противочумный институт(54) ХОЛЕРНЫЙ БАКТЕРИОФАГ 7106 ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ цине.г В изадаетействияом набиотикол отн и прхолепа. териофаг 7106, ифичностью и отбактериофага В тической активнос ерным вибрионам овый холе дает высо ется от х ким диапа о отношен ный бак ой спе лерног оном л ю к хо обл лич шир ти Эль еси приратов -наледов та ио ле") АвторыИЗОбрвтвиня М. С. Дрожевк зобретение относится к мед звестен холерный бактериоф еКции Ашешкова (11. Он обл сительно узким диапазоном оявляет активность в основ рные вибрионы классическог Холерный бактериофаг 7106 вЫделен в 1970 г иэ испражнений виброносителя (возбудитель холеры Эль Тор). В резул тате последовательной селекции прозрачных негативных колоний на плотной среде в сочетании с мульгенным действием УФ-лучей и пассажами в изолиро ванной петле тонкого кишечника морско свинки получен стабильный.вирулентный бактериофаг 7106.Холерный бактериофаг 7106 для готовления диагностических препа хранится в коллекции Ростовского Дону государственного научно-исс тельского противочумного институ номером 7106 и характеризуется с дующими морфологическими и физиологическими признаками.Морфологические признаки. Бактериофаг имеет многогранную головку, в про екции гексагональной Формы, размером 500130 х 450 ЗОА и отросток с сокращающимся чехлом длино 101030 А и шириной 137115 А, По морфологии частицы Фаг 7106 относится к,/группе, согласно классификации А. С. Тихоненко.физиологические йризнаки. Формирование негативных колоний. Двухслойный агар Мартена (рН 7,6), приготовленный по методу Грациа с индикаторной культурой вибриона Эль Тор штамм 75 М. Через 1 Ьчас инкубации при 37 фС колонии Фага прозрачные, правильной округлой Формы с четко контурированным ровным краем, диаметром 0,5-1,5 мм.Серологические свойства, Относится к У серологическому типу холерных фагов по отечественной "классификации.Антигенные свойства. При введении кроликам вызывает выработку специфиц ких антител против Фагов 7 типа:, Ант генные свойства бактериофага 7106 стабильны. Титр сыворотки 1:250, эа 5 мин нейтрализует 100 корпускулмологического фага. Титр бактриофага 7106 по Грациа ъ 10 В, по Аппельману10". Продуцентами бактериофага являются специально подобранные нелизогенные штаммы нибрионов Эль Тор. Оптимальная множественность инфекции 0,05-0,5. Продолжительность одиночного цикла развития 24 мин. Урожай - 60 корпускул на одцу микробную клетку,,СпецифичностьСтрого специфичен. Не лизирует микробов других видон.Диапазон литической активности в пределах гомологичного вида микробов. Бактериофаг обладает широким диапазоном атитического действия навибрионы Эль Тер. По диапазону литической активности превосходит известный бактериофаг В.Полезность изобретений заключается в том, что с помощью бактериофага 7106 осуществляется приготовление новых Фаговых препаратов для диагностики и 20 Идентификации возбудителя современной холеры Эль Тор. П р и м е р 1. Для приготовления диагностического холерного фага;ис пользуют фаг 7106 в виде монофага. Для этого фаг 7106 в количестве 4 мл вносят во флакон с 200 мл бульона Мартена (рН 7,6) и одновременно добавляют 2 мл 3"часовой бульонной культуры хо лерных вибрионов биотипа Эль Тор штамм 75 М. Через 3 час инкубации при 37 С содержимое флакона Фильтруют через Фильтр Зейтца с асбестовой стерилизующей пластиной для освобождения от мик-Зб робных клеток. Приготовленный препарат Фага 7106 (Фильтрат) проверяют на специфическую и неспецифическую стерильность и активность известными методами. Определяют титр фага методом агаровых слоев по Грациа. Для этого в растопленный, остуженный до 45 Си разлитый по пробиркам полужидкий агар вносят 0,2 мл 3-часовой бульо.;ной культуры чувствительного штамма холерных вибрионон. Б эту смесь вносят 1 мл Фага в разведениях 10 э и 10 э. Содержимое пробирки перемешивают и выливают на поверхность 1,5 агара в чашке Петри.После застывания агара чашки помещают в термостат при 37 С и через 12- 6 О 18 час учитывают количество негативных колоний Фага. Титр диагностического Фага должен быть не нике и 106,Полученный таким способом диагностический фаг 7106 используют для быстрого определения холерных вибрионов. Холерный диагностический Фаг используют неразведенный. Для этого пастеровской пипеткой или платиновой петлей (диаметром 5 мм) наносят каплю фо цельного Фага 7106 на газон, приготовленный днухслойным методом иэ 3-часа" вой культуры испытуемого подозрительного на холерные вибрионы штамма. Че" реэ 6-12 час инкубации при 37 С произ 66 водят учет результатов по следующей схеме:- полный лизис культуры на месте нанесения фага;- хорошо выраженный лизис и слабый вторичный рост;- отчетливый ливис с более обильным вторичным ростом или единичные негативные колонии+ - слабые следы лиэиса и обильный вторичный рост на месте нанесения фага; - в ,следов ливиса культуры нетПоложительным считается лизис культуры на ,и . Исследуемая культура не может быть признана холерной при результатах оцениваемых на + и в . Использование диагностического монофага 7106 для определения вида 480 штаммов вибрионов Эль Тор, выделенных в различных очагах холеры, позволило быстро в течение 6-12 час определить принадлежность к холерным вибрионам 474 штаммов иэ 480 исследованных (98,7). Использование применяющегося для этой цели фага Эль Тор позволило правильно диагносцировать только 415 штаммов (86,4),П р и м е р 2. Способ исполЬзования фага 7106,для получения антифаговой сыворотки.Приготовление антигена-фага для иммунизации животных производится следующим образом: Фаг 7106 в количестве 4 мл вносят во флакон с 200 мл бульона Мартена (рН 7,6) и одновременно добавляют 2 мл 3-часовой бульонной культуры холерных вибрионов Эль Тор штамм 75 М. Через 3 час инкубации при 37 ОС содержимое флакона фильтруют через фильтр Зейтца с асбестовой стерилиэующей пластиной для освобождения от микробных клеток, Приготовленный фаг 7106 (фильтрат) проверяют на специфическую и неспецифическую стерильность известными методами и определяют его титр. В качестве антигена используют фаг с титром п 10 э.Для иммунизации используют взрослых кроликов весом 2,5-3 кг. Фаг вво" дят стерильно шприцем в краевую вену уха кролика. Иммунизацию кроликов производят тремя циклами по четыре инъекции фага в каждом цикле. Фаг 7106 вводят н следующем количестве:1 инъекция 2 мл фага2 инъекция 4 мл фага3 инъекция б мл фага4 инъекция 8 мл фага.Интервал между инъекциями 4-5 дней, между циклами 10-14 дней.Через 14 дней посяе последней инъекции Фага н третьем цикле производят тотальное обескронливание кролика путем взятия стерильно (шприцем) крови из серца. После отстаивания и свертывания Форменных элементов крови при помощи стерильной пипетки отсасывают сыворот589254 Составитель Н БондаренкоТехред М.Келемеш Корректор С. Ямалова Редактор А. Бер Заказ 340/18 Тираж 568 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 ку крови и разливают ее по ампулам в стерильных условиях. Способность антифаговой сыворотки подавлять литическую активность фагов У типа устанавливают путем определения ее титра по методу Адамса 91961), Для этого антифаговую сыворотку разводят последовательно двухкратными размедениями в бульоне Мартена (рН 7,6) начиная с разведения 1:25; 1:50 и т.д. Фаг 7106 разводят в бульоне так, чтобы в 1 мл содержалось п 10" корпускул. 0,9 мл каждого разведения сыворотки подогревают в термостате при 37 эС, после чего смешивают с 0,1 мл Фага: смесь(г сыворотки и фага выдерживают при 37 Сс в течение 5 мин. Из этой смеси переносят 0,1 мл в 9,9 мл холодного бульона, тщательно перемешивают и 0,1 мл этого разведения вносят в 3,5-4 мл полужидкого агара (0,5-0,7), расплавленного и остуженного до 45 С, куда добавляют 0,2 мл 3-часовой бульонной культуры индикаторного штамма вибриона Эль Тор 75 М. Тщательно пе(5 емешивают и выливают вторым слоем на поверхность плотного (1,5-2) агара в чашку Петри. Одновременно все манипуляции производят с контролем, где вместо антифаговой сыворотки применя 30 ют физиологический раствор. Через 18-24 час инкубации при 37 ОС подсчитывают количество негативных колоний на опытных и контрольном посевах.На основании этих данных составляют уравнение и вычисляют процент нейтрализации фага. При этом количество негативных колоний Фага в контроле принимается за 100, Предельное разведеь(ие сыворотки, которое полностью нейтрализует гомологический фаг, при нимается за титр антифаговой сыворотки. Полученная таким способом антифаговая сыворотка используется для определения Гтипа холерных Фагов среди свежевыделенных рас фага, для ти пизации фагов в прямом методе фаготипирования очагов холеры и при бактериологическом исследовании на холеру в очагах, где циркулирует лизогенная разновидность холерных вибрионов. 50Формула изобретенияХолерный бактериофаг 7106 для приготовления диагностических препаратов. Хранится в коллекции Ростовского-на-Дону государственного научноисследовательского противочумного института под номером 7106.Морфологические признаки, Бактериофаг 7106 имеет многогранную головку, в проекции гексагональной Формы, размером 500130 х 450130 А и отросток с сокращающимся чехлом длиной 1010+30 А и шириной 137115 А. По морфологии частицы Фаг 7106 относятся к У груп- пе, согласно классификации Тихоненко А. С. Физиологические признаки, Формирование негативных колоний. Двухслойный агар Мартена (рН 7,6), приготовленный по методу Грациа с индикаторной культурой вибриона Эль Тор штамм 75 М, Через 18-24 час инкубации при 37 фС колонии фага прозрачные, правильной круглой формы с четко контурированным ровным краем, диаметром 0,5-1,5 мм.Серологические свойства, Относится к / серологическому типу холерных фагов по отечественной классификации. Антигенные свойства. При введениикроликам вызывает выработку специфических антител против Фагов 17 типасАнтигенные свойства бактериофага 7106стабильны. Титр сыворотки 1:250, за5 мин нейтрализует 100 корпускул гомологического Фага. Титр бактериофага 7106 по Грациа т ф 10, по Аппельману 10". Продуцентами бактериофагаявляются специально подобранные нелизогенные штаммы вибрионов Эль Тор.Оптимальная множественность инФекции 0,05-0,5,Продолжительность одиночного цикла развития 24 мин. Урожай - 60 корпускул на одну микробную клетку.Специфичность. ,трого специфичен,Не лиэирует микробов других видов,Диапазон литической активности вцределах гомологичного вида микробов,Бактериофагобладает широким диапазоном литического действия на вибрионы Эль Тор Источники информации, принятые во внимамие при экспертизе:1. ТЬ,е Зпйиж Оигпа о) танец(са 1 гевеатсЬ 193 Ъ, ч. 20, р.1161,
СмотретьЗаявка
2338654, 12.04.1976
РОСТОВСКИЙ-НА-ДОНУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ПРОТУВОЧУМНЫЙ ИНСТИТУТ МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ССР
ДРОЖЕВКИНА МАРИЯ СЕМЕНОВНА, АЛЕКСАНДРОВА ИРА КОНСТАНТИНОВНА, АРУТЮНОВ ЮРИЙ ИВАНОВИЧ
МПК / Метки
МПК: C12K 7/00
Метки: бактериофаг, диагностических, препаратов, проготовления, холерный
Опубликовано: 25.01.1978
Код ссылки
<a href="https://patents.su/3-589254-kholernyjj-bakteriofag-7106-dlya-progotovleniya-diagnosticheskikh-preparatov.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Холерный бактериофаг 7106 для проготовления диагностических препаратов</a>
Предыдущий патент: Штамм n 85
Следующий патент: Способ управления процессом варки утфеля в вакуум-аппарате
Случайный патент: Сссропубликовано 13. хп. 1972. бюллетень ndeg; 2за 1973дата опубликования описания 13. 11. 1973удк 621. 791. 75: 621. 774. 2(088. 8)