Способ получения винкристина

0 и и б-Ан СОюз Советских Социалистических Республик(23) Приор Государственный поинт Совета Министров ССС по делам изооретений и открытий(45) Дата опубликования описания 15.11.7 Иностранцыальман Сас, Ди Янош Элеш(72) Авторы изобретения аролин но Иностранное предприятие"Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр РТ"(71) Заявитель ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИНКРИСТИН Изобретение относиному способу получения Винкристин находит кислоты или се соли при охлаждении, полученныи продукт экстрагируют из нейтрализованной или подщелочецной реакционной среды, экстракт выпаривают досуха и выделяют целевой продукт.6 Процесс окисления проводят при температуреот - 30 до - 90 С, в органическом растворителе или в смеси растворителей, например ацетон ледяная уксусная кислота в соотношении 4:1.П р и м е р 1. 10 г (0,011 моля) сульфата О винбластипа растворяют в 2200 мл ацетона, добавляют 500 мл ледяной уксусной кислоты и охлаждают до - 60 С. Одновременно 4,96 г (0,0494 моля) хромовой кислоты растворяют в 1860 мл уксусного ангидрида, охлаждают до - 60 С и затем 15 прикалывают при перемешивании в раствор сульфата вицкристица. После 8 - минутного перемешивания прикапывают 4400 мл концентрированного аммиака, который охлаждался от - 40 до - 50 С, до величины рН 8. Температура раствора во время 20 нейтрализации не должна превышать (+) 50 С.Подщелоченная реакционная смесь смешивается с 10 л воды и экстрагируется хлористым метиленом до отсутствия алкалоида. Фазы хлористого метилена соединяют. образованный при нейтрализации и пе рецедший в органическую фазу ацетат аммония я к у сове ршецствов вицкристина.применение в клинической терапевтическое средство го для лечения лейкемии в актике как хими де вс рака, прем возраст от детс об звестцы с ей Чпса гозеа щей приблизит ожцо с трулом звестец также с цбластина, закл ракцидержлов, мИ н в результате мик си водорода превращаетсят, который одним из извеирования превращаетс присутствии перек лезметилвицбпасти способов формилкристин 3,Таким образо инстин утем получают из виц в две стадии. Целью данцог ние числа стадийз ри при получении витощение процесса. У цель его овойзанная винбластина и упр достигается за сч соль годвергают что винбластин или ю с помопью хром то ислениполучения винкристина экст, 2. Из общей смеси, со. ельно 70 различнътх алкалоиполучить О,% винкристина. пособ получения вицкристина очающийся в том, что винбласробиологического окисления в м по ланному способу винкр астина довольно сложным п изобретения является уменьш ердь Фекете, Эмил Биттнер, Эстео Дежеридважды промываюг водой (по 3000 мл). Послеэтого высушенный раствор хлористого метиленавьшаривают при пониженном давлении досуха. Получают 8,5 г аморфного сырого винкристина, который в качестве примеси содержит еще Й - дезметилвинбластин. Аморфный сырой винкристин растворяют в 30 мл бензола и хроматографируют наколонке, которая содержит пропитанную бензоломокись алюминия. Вначале производят элюированиес 1300 мл бензола, после этого с 5500 мл смесибензола-хлороформа (2:1) и, наконец, с 4250 млсмеси бепзола-хлороформа (1:1) . Собирают фракции по 250 мл. Отдельные фракции исследуют методом хроматографии на бумаге или методом тонкослойной хроматографии. Смесь бензола - хлороформа с отношением 2:1 вымывает полученную вкачестве побочного продукта окисления примесь й- дезметилвинбластина, а смесь с отношением 1:1 -образованный винкристин. Содержащие идентичныеалкалоиды фракции, идентифицированные посредством хроматографии на бумаге или тонкослойнойхроматографии, соединяют и выпаривают при пониженном давлении. Таким путем получают 5,9 гаморфного винкристина или 2,7 г аморфного йдезметил винбластина.Аморфный М - дезметилвинбластин растворяютв 27 мл безводного этанола и при помощи 1%-ногораствора серной кислоты в этаноле устанавливаютвеличину рН, причем, сульфат К - дезметилвинбластина выпадает в кристаллический осадок.Получают 2,5 г сульфата й . дезметилвинбластина,который растворяют в 13 мл метанола. К растворудобавляют 60 мл безводного этанола. Раствор вы.держивают один час при комнатной температуре,после чего отфильтровывают выкристаллизованныйсульфат М - дезметнлвинбластина.Выход: 2,2 г (0,0024 моля) сульфата М - дезметилвинбластина (20%),Из одной части сульфата М дезметилвинбластина освобождается основание и идентифицируется на основании следующих данных:точка плавления: 22 - 215 С (Боетиус),а " -5,8 (с -1, хлороформ).Образованный при окислении винбластина йдезметилвинбластин или его соль может известнымобразом формилироваться, причем получаетсявинкристин или его соль.Полученные 5,9 г аморфного винкристина растворяют в 60 мл безводного этанола н подкисляют1%-пым раствором серной кислоты в этаноле довеличины рН 4, причем сульфат винкристина выпадает в кристаллический осадок. Получают 5,6 гсульфата винкристина, Последний растворяют в30 мл метанола и к раствору добавляют 120 млбезводного этанола. Раствор выдерживают один часпри комнатной температуре и затем отфильтровывант выкристаллизованный сульфат винкристнпа. Выход: 5,2 г (0,0055 моля) сульфата винкристипз (50;).х 1-" =-(+11(+112" с 1. вода 15 О 20 30 35 40 45 50 55 80 В 1 - , 0,30 появляется с арко-олубой окраской) .Продукт индентифицпруегся по инфракрасному спектру, который по сравнению с инфракрасным спектром винбластина имеет при 5,94 мкм сильную полосу поглощения.Исследования методом тонкослойной хрома. тографии проводились с окисью алюминия марки б. Мегсс. Элюирование осуществлялось хлоро. формом с содержанием 0,5% метанола, для прояв. ления использовалась концентрированная фосфорная кислота, содержащая 1% сульфата цераммония.П р и м е р 2. 5 г (0,0055 моля) сульфата винбластина растворяют в 1100 мл ацетона и добавляют 250 мл 99,5% очищенной ледяной уксусной кислоты, которая не содержит окисляемых веществ. Раствор охлаждают до - 60 С, Одновременно 2,48 г (0,0297 моля) хромовой кислоты растворяют в 930 мл уксусного ангидрида, охлаждают до ( - ) 60 С и при перемешивании добавляют к раствору сульфата винбластина. Реакционную смесь перемешивают в течение 8 мин и затем добавлением охлажденного от ( - ) 40 до ( - ) 50 С концентрированного аммиака устанавливают величину рН 9. Во время нейтрализации температура реакционной смеси не должна превышать (+) 50 С. Подщелоченную реакционную смесь разбавляют 5000 мл воды н экстрагируют 3 раза по 1000 ми хлористым метиленом до отсутствия алкалоида. Фазы хлористого метилена соединяют и образованный при нейтрализации и перешедший в органическую фазу ацетат аммония промывают 2 раза по 1500 мл воды. После этого фазу хлористого метилена сушат и выпаривают при пониженном давлении досуха. Остаток растворяют в смеси из 75 мл концентрированной муравьиной кислоты и 12,5 мл уксусного ангидрида и выдерживают 5 мин при комнатной температуре. Затем кислый раствор разбавляют водой в три раза и с помощью концентрированного аммиака при охлаждении устанавливают величину рН 9. Алкалоиды экстрагируют 3 раза порциями по 100 мл хлористого метилена. Фазы хлористого метилена соединяют и при пониженном давлении выпаривают досуха, Сухой остаток, который содержит винкристин, растворяют в 20 мл бензола и хроматографируют на колонке, содержащей пропитанную бензолом окись алюминия с активностью Л - Ч. Сначала производят элюирование при помощи 500 мл бензола, затем 1000 мл смеси бензола - хлороформа в отношении 9:1, после этого 700 мл смеси бензолахлороформа в отношении 8,5;1,5, затем 2300 мл смеси в отношении 8:2 и, наконец, при помощи смеси бензола - хлороформа в отношении 1:1. Улавливают фракции по 250 мл. Бензол и смеси бензола - хлороформа в отношении 9:1 и 8,5:1,5 служат для лучшего разделения веществ на адсорбенте; первые алкалоидсодержащие фракции появляются при элюировании с первой половиной смеси бензола - хлороформа в отношении 8:2. Зти фракции соединяют и выпаривают прп пониженном576950 25 Составитель В. ПастуховаТехред А. Лемьянова Корректор П. Макаревич Редактор Н. Потапова Тираж 553 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Заказ 2955/703 Филиал Г 1 ПП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 давлении, причем получают 5 - 10% побочного продукта, в пересчете на вес образованного при окислении конечного продукта, сульфата винкристина. Содержащие винкристин фракции получают при элюировании со второй половиной смеси бензолахлороформа в отношении 8:2, удаление винкристина растворением заканчивают при помощи смеси бензола - хлороформа в отношении 1:1. Содержащие винкристин фракции, идентифицированные посредством тонкослойной хроматографии или хроматографии на бумаге, соединяют и выпаривают при пониженном давлении досуха, Получают 3,8 г сухого остатка, который растворяют в 40 мл безводного этандла, и раствор при помощи 1%-ного раствора серной кислоты в этаноле доводится до величины рН 4. Винкристин осаждают в форме своего сульфата, отделяют, растворяют в 30 мл метанола, и раствор смешивают с 120 мл безводного этанола. Сульфат винкристина выкристаллизовывают при одночасовой выдержке. Продукт отфильтровывают, промывают исушат. Выход 3,5 г (0,0039 моля) сульфата винкристина (70%). Физические константы сульфата винкристина совпадают с названными в примере 1. Формула изобретения 1. Способ получения винкристина на основе винбластина с применением процесса окисления, о т л и чающий ся тем,что,сцелью упрощения процес.са, винбластин или его соль подвергают окислению с помощью хромовой кислоты или ее соли при охлаждении, полученный продукт экстрагируют из нейтрализованной или подщелоченной реакционной 10 среды, экстракт выпаривают досуха и целевой продукт выделяют.2. Способ поп. 1, отличающийся тем, чтопроцесс проводят при температуре от - 30 доо- 90 С, в органическом растворителе или в смеси 16 растворителей, преимущественно в смеси ацетонледяная уксусная кислота в соотношении 4:1,Источники информации, принятые во вниманиепри экспертизе20 1. Патент США У 3205220, кл. 260 - 236,07.09.65.2. Патент ВНР Н 160967, кл. С 07 9 5/00,01.12.72.3. Патент США У 3354163, кл. 260-287, 21,11.67.