Штамм n710 используемый для выявления бактериофагов молочнокислых стрептококков

(11) 555133 ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик) 2178543/13 Заявлено 23,09.75 (рисоединением заявк осударственныи камит Совета Министров ССС по делам изооретений и открытий(45) Дата опубликования описания 31.05.77 Авторы изобретения А. В. Гудков, А. Н, Сельсков, Ю, К. Фомичев и В. кин лорусский государственный университет им. В. И. Ленина есоюзный научно-исследовательский институт маслодельной и сыродельной промышленности) ШТАММ ЯТВЕРТОСОССОЯ сАСТ 1 Я г 1 е 710 - Я, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ МОЛОЧНО-КИСЛЫХ СТРЕПТОКОКК олоч. бой новый испольчивого к стрептомицину.Штамм Ят герт ососсцзаст 1 в чен путем выращивания в стрепт среде дикого штамма Ят герт выделенного из самоквасной й 1 710 Я полумицинсодержащей оссцв аст 1 в 710, сметаны с послектив ности является мол ь которых насколько Изоорегение относится к производствнокислых продуктов и представляет соштамм мол очнокислых стрел тококковзуемый для выявления бактериофагов.Одним из средств повышения эффепроизводства кисломолочных продуктовприменение мер борьбы с бактериофаганокислых стрептококков, зффективноств значительной степени зависит от того,своевременно и полно выявляется инфицирование производства бактериофагами. Определение бактерпофагов возможно лишь при наличии штаммов молочнокислых стрептококков, обладающих чувст вительностью к бактериофагам, распространенным па предприятиях молочной промышленности, Культуры молочнокислых стрептококков, применяемые для определения бактериофагов, должны обладать чувствительностью к возможно большему количеству фагов.Известны различные штаммы из рода Ятгерто. соссцв, используемые для выявления бактериофагов определенных видов 1 .Однако они имеют невысокую чувствительность к бактериофагам молочнокислых стрептококкови неустойчивы к стрептомицину. Цель изобретения - получение нового штамма обладающего большей чувствительностью к бакте риофагам молочнокислых стрептококков и устой дующим облучением ультрафиолетовыми лучами и 1 О отбором стрептомицинрезистентных мутантов.Штамм Ятгертососсцв 1 аст 1 в 147104 - Я 2 отличается от известных штаммов молочнокислых стрептококков по набору лизирующих фагов (фаготипу),стрептомицинрезистентности и характеру 15 негативных колоний, которые образуют бактериофаги при совместном с ним культивировании,Штамм Ятгертососсцз 1 аст 1 в й 7104 - Я хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института маслодельной и сыродельной що промышленности.Морфологические признаки. Величина клетоксуточной культуры на агаре из гидролизованного молока 0,9-1 мкм. Форма клеток слегка эллипсоидная. Цепочки клеток короткие - из трех, 25 четырех клеток.Физиологические признаки. Органическая среда, В бульоне из гидролизованного молока в стадииинтенсивного роста образует равномерную густуювзвесь. Суточная бульонная культура равномерномутная с небольшим осадком в виде комочков,При взбалтывании осадок легко взмучивается,При пересеве 18 - часовой бульонной культуры всвежий бульон из гидролизованного молока в количестве 1 об % наблюдается 1 ац - фаза 30 - 40 мин.Максимальная концентрация клеток 6 - 8.10клеток /мл достигается за 7 час инкубирования при30 С.Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в бульоне до 1000 ЕД/мл.Припосевев молоко 1% 18-часовой бульоннойкультуры сгусток образуется за 11 - 12 час.Сгусток плотный, равномерньй, колющейсяконсистенции.Слабый рост по линии укола.разжижения среды нет,При посеве на агар из гидролизованного молокав чашке Петри через 2 дня образуются круглые,гладкие, белые, блестящие, выпуклые колонии размером 12-1,5 мм.Отношение к углеводам. Сбраживает глюкозу,галактозу, лактозу, мальтозу с образованиемкислоты. Сахарозу и маннит не сбраживает.При изучении чувствительности штамма Ятгертососсцз асся Я 7104 - Я к 52 вирулентнымбактериофагам молочнокислых стрептококков установлено, что новьй штамм чувствителен к двум(51,52) бактериофагам, встречающимся в природе.Выявление фагов с помощью штамма Ятгертососсцз астз й 7104 - Я проводится следующимобразом,Отбор проб. Пробу молока отбирают в стерильную посуду, подогревают до 40 С и в молоко добавляют 10%-ную молочную кислоту до образованияхлопьев белка, после чего фильтруют через стерильньй ватньй или бумажньй фильтр. В полученныйфильтрат добавляют 1 об% раствора стрептоми.цина с концентрацией 20000 ЕД/Мл.Сыворотка, закваска, вода, рассол. Пробусыворотки, закваски, воды и рассола отбирают встерильную посуду и фильтруют через стерильныйватный или бумажньй фильтр. Затем, если сыворотка или закваска сохранила мутность, к нимдобавляют 10%-ную молочную кислоту до образования хлопьев белка и вновь фильтруют черезстерильный ватньй или бумажный фильтр, В полученный фильтрат вносится 1 об. % раствора стрептомицина (20000 ЕД/мл).Навеску сыра около 1 г растирают в стерильнойступке, добавляют 20 мп подогретой до 45 С стерильной воды, Полученная сырная суспензия фильт.руется через ватный или бумажный фильтр, и вфильтрат вносится 1 об% раствора стрептомицина (20000 ЕД/мл).Пробы с посуды, аппаратуры, оборудования,инвентаря и в помещении берут с помощью сухихстерильных ватных тампонов, которые закреплены на деревянных палочках и помещены в пробирки, закрытые ватными пробками, Тампоном тщательно протирают в нескольких местах поверхность исследуемого объекта. Тампон помещают обратно в пробирку, которая хранится до исследования на холоду, При исследовании тампон споласкивается в течение 1 - 2 мин в 10 мл стерильного бульона из гидролизованного молока со стрептомицином в концентрации 200 ЕД/мл.Отобранные для выявления фагов пробы хранят при 4 С не более 6 час.Подготовка газонов штамма Ятгертососсцз 1 ас.- тю й 710 - Я. В чашки Петри разливают по 25 - 30 мл 1,5 %- ного агара из гидролизованного молока с 200 ЕД/мл стрептомицина. После застывания агара чашки подсушивают в течение 3 - 4 час, В пробирки предварительно разливают по 2 мл 0,6 ного агара из гидролизованного молока с 200 ЕД/мл стрептомицина. Перед использованием пробирки подогревают в водяной бане при 100 С до расплавления агара и затем охлаждают до 45 оС. Затем в каждую пробирку вносят по 0,5 мл 18-часовой культуры Ятгертососсцз 1 асбз Я 7104 - Я 2, и содержимое каждой пробирки выливают на поверхность 1,5%-ного агара в чашке Петри, равномерно распределяют и выдерживают до застывания верхнего слоя 0,6 о-ного агара с культурой.На застывший верхний слой наносят капли испытуемых проб, На одной чашке одновременно испытывают четыре пробы, для чего чашку делят на четыре сектора и в каждьй сектор помещают по одной капле из различных проб. После подсыхания капель чашки инкубируют в термостате при 30 С 18 - 24 час.Учет результатов проводят следующим образом.Засеянные методом двойного слоя бактерии образуют равномерньй мутный газон.Если на месте нанесения капель образуется прозрачное пятно или мелкие прозрачные пятнышки, то это свидетельствует о том, что в данной пробе содержится бактериофаг, активньй против штамма Ятгертососсцв ассов й 7104- Я . В случае, если на месте нанесения капли образуется такой жв газон, как и на всей чашке, то бактериофагов, лизирующих штамм Ятгертососсцз 1 астз М 7104 - Я, в испытуемой пробе нет. б 19 1 б М И 30 Зб 40 45 Формула изобретения Штамм Ятгертососсцз 1 асбз й 710 - Я, ис. пользуемый для выявления бактериофагов молочнокислых стрептококков, хранится в коллекции Всесоюзного научно - исследовательского института маслодельной и сыродельной промышленности,Морфологические признаки, Величина клеток суточной культуры на агаре из гидролизованного молока 0,9 - 1 мкм. Форма клеток слегка эллип555133 Составитель А. БражниковаТехРед Г. Родак Корректор А. Лакида Редактор А. БерЗаказ 418/13 Тираж 582 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 5соидная. Цепочки клеток короткие - из трех, четырех клеток,Физиологические признаки. Органическая среда. В бульоне из гидролизованного молока в стадии интенсивного роста образует равномерную густую взвесь. Суточная бульонная культура равномерно мутная с небольшим осадком в виде комочков.При взбалтывипщ осадок легко взмучивается.При пересеве 18 - часовой бульонной культуры в свежий бульон из гидролизованного молока в количестве 1 об.% наблюдается 1 аа - фаза 30" 40 мин. Максимальная концентрация клеток 6 - 810 клеток/мл достигается за 7 часов инкубиарования при 30 С.Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в бульоне до 1000 ЕД/мл. При посеве в молоко 1% 18 - часовой бульоннойкультуры сгусток образуется за 11 - 12 час. Сгусток плотный, равномерный, колющейся консистенции.Слабый рост по линии укола. Разжижения среды нет,При посеве на агар из гидролизованного молока в чашке Петри через два дня образуются круглые, гладкие, белые, блестящие, выпуклые колонии 1,2 - 1,5 мм.Отношение к углеводам, Сбраживают глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, с образованием кислоты.Сахарозу и маннит не сбраживает.Чувствителен к двум бактериофагам молочно- кислых стрептококков, встречающихся в природе.Источники информации, принятые во внимание при зкспертизе;1. Труды Литовского филиала ВНИИ маслодельной и сыродельной промышленности, 1973 г., т.8, с 169-172 (прототип)