Аденозин -3, 5 -циклосульфат для избирательного регулирования уровня аденозин-3, 5 -циклофософта в клетке и способ его получения

ИАтОП ИИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДВТВЛЬСТВУ Союз Соввтсиих Социалистических Республик(51) М. Кл, С 07 О 239/70 87085/23-4 Государственник комитетСовете Министров СССРно делам изобретенийи открытий 23) Приоритет43) Опубликовано 15,02.76 юллетень6 ДК 54796332) Дата опубликованн описания 13,12..Н. Гуляев, Л.ф Баранова и Е,С, Севери 1) Заявител исппут молекулярной биологии АН СССР(54) АДЕНОЗИН - Зф,5 ф - ЦИКЛОСУЛЬФАТ ДЛЯ ИЗБИРАТЕЛЬНОГО РЕГУЛИРОВАНИЯ УРОВНЯ АДЕНОЗИН - 3,5 - ЦИКЛОФОСФАТА В КЛЕТКЕ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ новому классу хими. онуклеоэид 3,5 . к первомупредстави 1-3,5. циклосульфату Изобретение относ ческих соединений циклосульфатам, конк телю этого класса - ад формулы як риб тно ен Ое Ой3,5ически ар мако. нуклео фосфатный3) последние по выяс. Аден формул ь-циклосульфат обладает ценными биолосвойствами и может быть использован в логии и в научных исследованиях по химии эндов и нуклеотидов,Известен в химии нуклеотидов его аналог - аденозин 3,5. циклофосфат, В годы проводятся широкие исследовани нению роли аденозин - 3,5 . циклоф механизмах, регулирующих самые разлироны биологии клетки. В настоящее время получены данные о влиянии указанного нуклеотида не биосинтез деэоксирибонуклеиновых кислот, утле. водов, липидов, стероидов, а также на транспорт вешеств через мембраны, Кроме того, в некоторых случаях установлена связь между уровнем аденозин3,5"- циклофосфата в клетке и злокачественные перерождением клеток,Содержание аденозин 3,5/. пиклофосфата в клетке определяется активностью двух ферментов его метаболизма: аденилатцнклазой - ферментом биосинтеза и специфической фосфоднзстеразой - ферментом его гидролиза. Цель изобретения - синтезировать аденоэин,5 циклосульфат, который можно использовать в качестве специфического ингибитора фосфодизсте. разы аденозин 3,5 ф циклофосфата - важнейшего фермента метаболизма данного циклического пук леотида. нн - 3, 5. циклосульфах указанной получают путем взаимодействия й 2, 3"- 0 . иэопропилнденаденозина с сульфурилом, затем полученное такимобразом 5 . 0 - счльфохлоридное производное подвергают гидролизу и циклиэуют образовав. шийся продукт в присутствии й,й - дицикло. гексилкарбодиимида с последующим дебензоили. СН, 0 ЭзА ,Щ ВгЛ Н,С "Си, где А. остаток адевшаЯ 11 СОСб 11 в6 А. Пример. А. К раствору 8,2 г (0,02 моля) й . бензоил. -2,3Ф изопропилиденаденозина в 60 мл диоксана содержащему 4,7 г (0,06 моля) пириЬина, прибавляют при перемешиваша и охлаждещя 8,1 г Л (006 моля) хлористого сульфурила с такой ско. ростью, чтобы температура реакционной смеси былз 10.12 С. Через 30 мин, после смещения реагентов выделившееся масло отделяют,от раствора, затира. ют с диоксаном, затем с эфиром и сушат в вакуум над серной кислотой. Остаток растворяют в 120 мл 90%-ного водного раствора трифторуксусной кис. лотьь Полученный раствор выдерживают 30 мин при 23 С, затем уаарнвают досуха, Остаток после трехкратной оттонки с водой растворяют в мини ф мапьном количестве смеси этилового спирта и воды (1:2) н наносят на колонку со смолой Оо 1 вехх 8 (100200 меш; 70 х 3,5 см; Нформа, уравновешенная смесью зтанола и воды, 1:2). ЗлюшпО проводят той же смесью растворителеи, фракцииЩ 35 (по 5 мл), обладающие поглощением при 280 нм, собирают, упаривают до небольшого обмма н оставляют для кристаллизации. Получают 3,5 г йб бензоиладенозвн . 5- сульфага (40% от теоретичес кого) с злектрофоретнческой подвижностью прн 40 рН 7,5, равной приблизительно 0,5 подвижности аденозин. 5. монофосфата. В 1 0,61 (и - бутанолуксусная кислота-вода 5:2:3).50 мг полученного вещества растворяют в 2 мл . смеси метнлового спирта и концентрированного 45 водного аммиака (1:1). Раствор выдеряавают 3 ч при 50 С, затем упаривают дв"уха Остаток затирают со спиртом, затем с эфиром и получают сУ количественным выходом вценозюссяьбат. Вщ 0,32 (и. бутаиол-уксусвая кислота-вода, 5:2:31 ЮНайдено%: 89,31,9,42, СНй,Ц,8;Вычислен,%: 8 9,23,рованием обычными методами, Дебензоилированне можно проводить, например, действием водно.метацольного раствора аммиака. Синтез протекает по следующей схемеи А - 0 ОП О О 0 И0 Б. 90 мг (0,2 моля) йб . бензонладенозин. 5/ сульфата высушивают трехкратной оттонкой с су. хим пиридипом, используя порции по 2 3 мл. Сухой остаток растворяют в 8 мл сухого пиридина и полученный раствор прибавляют по каплям к слабокипящему раствору 82 мг (0,4 ммоля) Я,й. .дишп".логексилкарбодиимида в 10 мл сухого пири дина. Затем реакционную смесь перемешивают 1 ч при температуре, близкой к кипению, и после охлаждения упзрнвают досуха. Остаток растворяютв мищмальном количестве смеси метилового спирта и хлороформа (1:1) и наносят узкой полосой на две пласпики (12 х 16 см) с снликагелем (слой 2,9 ьщ), Хроматографию проводят в системе и-бутанол вода (85:15) в течение 2-3 ч. Полосу силн..кагеля, содержащую продукт, локализуют (Вф ф 0,65), отделяют и высушивают. После злюции метаполог и отгонки растворителя получают 40 мгйб - бензоиладенозин . 35- циклосульфата (47% от теоретического) Я - 0,76 (ибутанол - уксусная кислота - вода, 5:2:3) .При дебензоилировании йб . бензоиладенозин. -3,5- циклосульфата в условиях, описанных для получения аденозин - 5. сульфата (А), получают с колнчествещым выходом аденозин - 15 - цикло.дФ сульфат, В =0,52(и бутаиол - уксусная кислота - во. да, 5;2:3), 1 макс -"259 нм, е макс = 13600, рН 6,0.Найдено, %", С 36,18, 36,30; Н 3,44, 3,51; й 2149 21,63; 8 10 Л 7 10,34. С 1 ОН, йбОб 8 ф Вычислено,%: С 36,47; Н 3,36; й 21,27; 8 9,73.При проведении ферментативных испытаний адеиозин - 3,5. циклосульфата была выявлена существенная ингибирующая активность даниот 4 соединения в отношении фосфодизстеразы аденозин3 5циклофосфата.На основании проведенных испытаний было признано, что аденозвн - Зф 5 - циклооульфат может быль использован для избирательного регулиро ванин уровня аденозин . 3,5- циклофосфата в клетке.Результаты испытаний приведены в таблице,502887 Соединение Фосфодиэстераза Аденилатциклаза Аденозин,5- циклофос.фат СубстратК 13 10 М Продукт Аценозин.3,5 ф- цикло.сульфат Ингиб вторК "3,5 ф 10"4 М Не активен 15 СХ." ОецФ Составитель С, Чернова Техред Н. Аидреачук вдактор Е. ХорннаЗаказ 112/540 орректор С,Подписи вета Мини., д. 4/5 П фПатенИф, г, Укгород, ул. Проекпва 4 Филиал Формула изобретения 1, Аденозин - 3,5- циклосульфат формулыТирак 576 ИИПИ Государствеииого комитета до делам изобретени и откр 113035, Москва, 3.35, Раушскаа,для избирательного регулирования уровня аденозин"3,5. цнклофосфата в клетке,2. Способ получения аденозин . Зф,5 ф. циклофосфата по п.1, от лича ющ и й ся тем, что й бен 4 зоил. 2 ф,3 ф - О изопропилиденаденозин подвергают взаимодействию с хлористым сульфурилом, затем по лученное 5 ф. О сульфохлорндное производное под. вергают пщролизу и циклизуют образовавшийся продукт в присутствии М,И . днциклогексил. карбодиимща с последующим дебензоилированием и выделением целевого продукта.