Способ получения 6-метил-2-нафтойной кислоты

Сокэ Советских Социалистических Республик61) Зависимое от авт. свидетельств 04.73 121) 191 М 73,(22) Заявлено 1, Кл. С 121 1300 с присоединением заявки Ме Гасударственный комит Совета Министров СС Ло делам изобретении )тхртнй. Бюллетень М 37 53) УДК 661.73(08 кбликовацо 05.10.ата опублпкованит писания 25.05.76 2) Авторы изобретения К. Скрябин,Старовойтов, С. К). Пщирков, М, Ю.И, И. Червин и А, М. Зякун ва,(71) Заявитель нститут биохимии и физиологии микроорганизмов АН ССС;ые признаки. Колони ельцых средах гладкие, пло бссцветпые пли серовато-бе жеп пой Кинпигмеит. Насплошной лсный флооКлетки паопцамп, 1,5 -относится к микрооиологиченности, а именно к получению ойной кислоты путем мпкробиоисления 2,6-ди:,етилнафталина. Известен способ полуе ия 6-метил-нафтойной кислоты окислением 2,6-диметилпафталица при помощи микроорганизмов в жидкой среде в аэрооных условиях с последуощим выделением целевого продукта.По известному способу 2,6-диметилпафталип Окисляют актипомицетом 51 гер 1 оп)усев асгоп)одепеэ, цо процесс длится около 20 час.С целью сокращения продолжительности процесса предложено окисление 2,б-диметилнафталина проводить при помощи микроорганизмов, относящихся к роду Рэецс 10 попаэ. Из бактерий рода Рэецс)опопав предложено использовать Рэецс)оп)отаз 11 цогеэсепв штамм 44 и Рэец 10 попаэ рц 1 с)а штамм 7.Окисление 2,б-диметилнафталина до 6-метил-нафтойной кислоты наблюдается как в растущей культуре, так и при использовании отмытых (покоящихся) клеток микроорганизмов.Вследствие того что 2,6-диметилнафталин пе может в данном случае служить источником углерода и энергии, при проведении процесса окисления 2,6-диметилнафталина до 6-метил-пафтойной кислоты растущей культурой для роста микроорганизмов пеобходпм др) гой источник ) глерода.В качестве такого Источника можно пспользонать углеводы, н-парафины, жирные кислоы.Кроме -,ого, окисление 2,6-дпметплнафталии а до 6) ыетп-и а(1)то 1 О) кпс,10 ты мож ИО проводпть в фосфатпО) Оуфер. при Испо,пзовании От)1 ы 1 ых (покОЯцихс 5) клеток О 1 ктерпй, влрапцсппых па среде, содержащей пс 01- :)пкп ) г,срОда, азоа и мппе)альпые соли.Ок 1 с, е.е ирои(. хОдп 1 с 1 рого сп. 1 ц ивски Оез Обр 1 зовапп) ;а к)х-.1 п)0;1 рх в х прд 1:.тов ОКИСЛСП)1 Я.а р а к т с р и с т и иб) а к т е 1) и и Р э с ц - 10 гпоп а э р П 1 0;1 ; т а ) л; 7. Шта)м 1 ыделеп 1 з пг.венцы;,)оразпо, :зяых па те 1)- 1)иории Епак 1 е;)с:.; О к,кс)хи)1 Иеско;О,)а ),;- а На стандартной среде, предло 25 гом, сбрал ст флюоресцпрующшмясо-пептонном б) льонс расте 1;ленкой, продмцпр) я прп этом з ресцирующпй п.г)ецт.Морфология культу р ы, СО лочковпдпые с округлепцымп3З,ОКО,б 1, подвижные с двумя-тремя полярными жгутиками, грамотрицательные.Экологические признаки, Растет вцнтерггле температур 4 - 37 С, не растет пр41 С, Оптимальная ге)герата ря для поста28 СФизиологические приз ц а кц. Растет ца обычных питательных средах, органических: Минеральных, ассимилирует углеводы за исключением ксцлозы.На минеральных средах растет предпочтительнее с нитратноц формой азо.я, чем с аммоцийной.,)Келатину це разжюкает, молоко це изменяет, цитраты восстанавливает, крахмал не гидролизует, инозит не усваивает,Биохимические приз ц а ки. Окисляет нафталин до салициловой кислоты. Салицилат окисляет полностью.Характеристика бактерии Рвепд о гп о и а з 11 ц о г е в с е и з ш т а м м 44. Выделен из почвенных образцов, взятых ца территории Енакиевского коксохимического завода.Культур альные и р из ц а кп. Колонииня тердых питательных средах гладкие, плоскцс, блестящие, бесцстные цгц серовато-белые. На стандартной среде Кинга образуетфл юоресцирующий пигмент. На мясо-пептоццом бульоне растет, образуя муть и пленку ипродуцируя зеленый флоорссцируон,)й пигмеи хМорфология кул ьтур ы. Клетки палочковидпые с окрутленцыми концами, 1,5 -3,00,6 , подвижные с двумя-тремя полярными )кгутикями, грамотрицательные.Экологические приз н а ки. Растет винтервале температур 4 - 30 С, не растет прц37"С и 41 С. Оптимальная температура дляроста 28 - 30 С,Физиологические признаки. Растет ця Обьчцых пиателыых средах, ОРГяцичсских и минеральных, ассимилирует углевод. 1-1 а у)Неральц.)х средах пр.дцочтиельцеерастет с ъ)циЙ 0 фОрмОЙ ;Отя, ем с цит)ЯТЦОИ.)КсдНц ряз);и)кает мо )ко)Ср яекр к)7 Гц чрол 3 еНтр яты осетии а )лияет, ццозцт ус;ивяет, гиппурят и глцци Нс используе .Биохимические и р и за к и. Окисляет цфтлцц до сялгцлоО кцл)ы. СлиЦ.лят окисляет полностью.Гредлагасмый способ поясняется пример,ми его выполнения.Пример 1. Культуру Рзеидогпопав рц 1 даштамм 7 поддерживают на косяках с МПА.Инокулят готовят путем разведеция в стерильной водопроводной воде культуры, выросшейна косяках с МПА.Г 1 лотпость суспецзии клеток, исполь:уемой вкачестве ицокулята, составляет 2,0 единицы пошкале оптической плотности нефелометра.Культуру в течение 24 час выращивают при29 - 30 С ца среде МПА, разлитой в медициц 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4ские матрацы по 250 мл в каждый. В конце этого времени проводят смыв культуры с агаризованной поверхности среды МПА фосфатцым буфером рН 8,5 - 8,8.Бактериальную суспензию центрифугируют 10 мин при 8 - 10000 об,)мкц, дзя)хднф промывают фосфатным буфером и ресуспедируют в таком же буфере,00 мл суспецзии с оптической плотностьо 2,2, что составляет 1,5 г в пересчете на сухой вес клеток, вносят ь медици:ские колбы на 750 мл и одновременно добавляют по 100 мл 10,64 моль) 2,б-диметилнафталица.Трансформацию проводят при 29 - 30 С в колбах на качалке в течение 12- - 15 час. Затем бактериальные клетки отделяют центрифугировацием при 8- 10 000 об/мин.Нядосадоч)У 0 жидкОсть фи,ьт)Уот через стеклянныЙ фи,ьгр, , пари)а 0 На рото)цом испярителе прц 40"С. Коццентрир я первоначальный объем в -1. - 5 раз.Скоццецтрированый рясвор охлаждают до 5 - б"С и к схлаждегцо.у раствору приливают 4 - 5-кратный объем эт,оо о спирта, охлажденного до 0"С, для Ося)кдсция белко.Через 20 - -25 мин осадок о)деляот фильтровяциех Срез стекл 5 нцьи :.,ильтр, Фильтрат цодкисляют 1011 НС 1 до рН 3,0 и упаривают досуха ца роторном испарителе при 40 С,Сухой остаток экстр ягируют абсолютным этацолом и проводят препзративцое выделение конечного продукта Окцслеция путем тонкослойцой хроматографии на пластинках 8 Н 1 о н - 254 в системе: оецзол - метанолуксусцая кислота (45: 4: 2).В качестве злоиру)опего агента используют абсолютный этиловый спирт. Элоат упаривают досуха ца роторпом испарителе и высушиВают под вяк) умом. Концентраци 0 коечнОГО прод 1 кта Опредег 5 к)т спектрофотомет 1 ически.В ход б-) етилця 11)тогО Кислты равен 0,33 моль.П р и м е р 2. Культуру Рвецдопопав рг 1 да цямм 7 ранияот ца яГяризоваццОЙ среде Чапека с глюкозой. Среду Чапека разливак)т в медиц 5 Н)скис матрацы по 250 мл в каждый и после стерилизации проводят закашивацие средыматрацах.ИНОку.5 т ГОтОВят ацялОГичцо тому, как указано в примере . Ицкубацию проводят при 29 - 30 С в течение 24 чяс, Дальнейший процесс проводят, кяк указано примере 1.Выход коечцо 0 продукта р вен 0,30 моль, 11 р и и е р 3. Культуру Рвецдогпопав 1 Ноге- сеп. штамм 44 поддерживают ца косяках МПА. Для получения биомассы г)ырацивание кльтуры проводят ца среде с МПА.Остальные этапы ведения процесса такие, как описано в примере 1,Выход конечного продукта равен 0,35 моль.П р и м е р 4. Культуру Рзегдоп)опяз 11 цогевсепз штамм 44 выращивают на среде Чапека с глюкозой. Дальше процесс проводят, как описано в примере 1. Выход конечного продукта равен 0,32 моль,487111 Предмет изобретения Составитель Л. Минеева Текред Т. МироноваРедактор В. Смирягина Корректор О Тюрина Заказ 981/17 Изд. М 55 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сап,пов, 2 1. Способ получения 6-метил-нафтойной кислоты окислением 2,6-диметилнафталина при помощи микроорганизмов в жидкой среде в аэробных условиях с последующим выделением готового продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения продолжительности процесса, окисление 2,6-диметилнафталина проводят при помощи микроорганизмов, относящихся к роду Рзецс 1 огпопаз,2. Способ по и. 1, отл и ч а ю щи й с я тем,что из рода Рзецдогпопаэ используют вид Рвецс 1 огпопаз рц 1 Ыа.3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийсятем, что из вида Рзецдогпопаз рШЫа исполь зуют Рзецдогпопав рц 1 Ыа штамм 7.4. Способ по п. 1, отличающийся тем,что из рода Рзецдогпопаз используют вид Рзецг 1 огпопаз Пцогезсепв.5. Способ по пп. 1, 4, отличающийся 10 тем, что из вида Рзецдогпопаз 11 цогезсепз используют Рзецдогпопаз 11 цогезсепз штамм 44.