Способ получения белково-жировой биомассы

О П И С А Н И Е 388621И ЗОЬРЕТЕ Н ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЯЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик, Кл. С 126 13/О 1.1971 ( 1679023/28-13) явлено,0 с,присоединением киоударственныи коцитетоввта йгинистрав СССРпе делац изобретенийи открытий Приоритет - Опубликова К 663,11(088.8 5.1.1974, Бюллетень1 ликования описания 21 М 11.19 Дат вторыобретени ва,Т, Е. ПоВасильева Бахметьев Л. И, Козло ентьева, 3, Абакова и И, И ельский инсмикробиологи аболотного ков, А. Н. Котляр елокова, Е. С. А апченко, В. А. Рь научно-исследова ществ и Институтим.Д, К.З Е. И. Квасн И. ф, Ш Т. П. Ос Всесоюзный белковых ве Заявител оиосинтеза вирусологии итут и и СПОСОБ ПОЛУЧЕНЕЛКОВО-ЖИРОВОЙ БИ гикробиологической орфологи ения оелково-окироащивания иищрооровиях на водно-миреде, содерокащей в рода углеводородьг вляется повьешени ассе, а та,кже интенчения бетково-жи я это тем, что в качестве,микиспользуют дрожжеподобда Гпс 1 гозрогоп сар 1 а 1 цтп, при. Рпсгозрогоп используют штамзг 20 и штамм сар 1 а 1 цгп К/1. Достигает роорганизмов нные гр,ибы ви чем,из вида сарг(а(цп Ктуральные своист 20 м агаре (7 - 8 го роста оор ыми гора,я,ми, вколонии 1,0 -Баллинт) посазуют мягкие,тпуклые, мато,5 мм в диасолодов ухсуточн е, с,ров лестящи кругл ь вые, б меъре,сусло-а- 18 С к нов ится еняетсяа 7 аде,льтурмор:щот,ма сусле месячногомягкая, ее поинистой, зернисового до окелтоШтр,ироста прверностьтой, цветваточно. изм Изооретение ка я промышленности.Известен способ полу вой биомассы путем выр ганизмов в аэробных ус, неральной питателыной с качестве источгика угл нефти.Целью изобретения я содержания жира в биом сификация процесса пол ,ровой биомассы,Штаммы РпсЬозрогоп сар 1 а 1 шп К/1,и Кполучены в результате опбора в процессе непрерывного культивиро 1 вания дрожией, выделенных из почв нефтеносных,районов У 1 краины, на среде, содержацей н-алканы в качестве единственного источника углерода.Дрожжеподобные грибы вирда Рг(с 1 гозрогоп сар 11 а 1 цгп,имеют следующие морфологичесгкие, биохимические и физиологические свойства. Рост на солодовом сусле, Клетки трехсуточното роста при 28 С имеют овальную, цилиндричеекую фор му, некоторые - пр одолговатую. Средний размер клетои (2,5 - 3,5) Х Х (8,5 - 19,5)г. Образует осадок,:кольцо и пленку.При выращивании на стеклах с сусло-агаром мыного а 1 ртро- и бластоспор, которые с ооков окружают мицелий и формируют пучки в конце ветви. В молодой культуре содержатся исключительно бластоапоры. В старой ,культуре,могут быть бласто.,и артроспоры.Арпроспоры встречаются также в цепочках. Редко на мицелии формируются единичные бластоспоры.Биохимические и физиологические свойстваКультуры сахара не ферментируют.Ассимилируют глюкозу, галактозу.Не ассимилируют мальтозу, лактозу, сахарозу (сахарозу,иногда очень слабо усваивают).Источники азота - используют амм)онийн)ый азот и не используют нитратный,Оптимальная температура роста на мине ,р)альной )среде с углевОдорода)ми 30 - 32 С.Штамм Кхорошо усваивает винную кислоту (в качестве источника углерода) и щавелев)ую кислоту,Штамм К/1 слабо усваивает винную и щавелевую кислоты,Штамм )ассимилируют и)ндивидуальные углеводороды н-ларафинового ряда, особенно содержа)щие от 13 )до 18 атомовуглерода, )заданного в качестве единственного источника углерода. Наилу)чающие результаты получают при использовании углеводорОдов с 16 ато)мами углерОда.При развитии в средах с углеводородами в качестве единственного источника углерода не требуют добавления витаминов .и других ,дополнительных факторов роста. На указанных средах шпаммы синтезируют витамины группы В (см. табл. ).При выращивании дрожжепо)добных грибов вида Рг 1)сЬозрогоп сар 11 а 1 цт, )например, штаммов Ки К/1 применяют среды, содержащие соединения азота, фоофора, калия, матния и микроэлементы (соли железа, )цинка, марганца и леди). Витамины,и,другие 4 ризиологически активные )соединен)ия в среду не добавляют, Источником углерода слоу)жит дистилл)ят Манпьицлакск)ой нефти, фракция 193 - 355 С, содер)жащий 33,5% комплексообразующих углеводородов с температурой застывания - 8 С, который под)ают в среду в количестве 25% к протоку. Содержание липидов при этом в среде составляет 11 - 12%.При культивировании дрож)иеподобных грибов Рг 1 сЬозрогоп сар 11 а 1 цгп, мадример, штаммов К,и К/1 в среде, содержащей 50% от нор)мы азотистых веществ (жировой уежим), содержание липидов в биомассе составляет 25 - 30% от оухого вещества, а в средах с более низким содерианием азот)исты)х,веществ (15 - 25% от нормы) содержание липидов достигает 45%. Иа полученной биомассы жировые вещества - липиды выделяют экстракцией органическими растворителями.Таки)м Образом, при выращивании д)ро)жиеподОбных грибов по жировому, режиму их клетки синтезируют значительное количество липидов (31,6 и 25,3%), в состав которых входит 73,7 и 66,5% тритли)церидов и очень небольшое количество фракций фосфолипидов (6 и 7,5%), и свободньп жирных кислот(до 3%),Такой состав липидов штаммов К/1 иК,позволяет использовать их в качествесмазочны)х материалов, а также для производства высококачественных туалетны)х,и хозяйствен)ных )мыл.В дальнейшем способ,поясняется приме.,рами его,исполнения,П,р им е р 1. Дрожкеподобные грибы Гг 1- сйозрогоп сар 11 а 1 цгп К)0 выращивают одностадийным непрерывным способом в ка)ме,ральных условиях в типовом .ферментере емкостью 30 л при интенсивном перемешивании15 и подаче воздуха в количестве 3 л/л мин.Температура ферментации 30 - 32 С, рН среды 4,0 - 4,2.В качестве источника углерода используют дистиллят Мангышлакской нефти (25%20 в культуральной среде), фракцию 200 -360 С, содержащую 32% соединений, образующих комплексы с мочевиной. Температу,ра застывания дистиллята - 8 С.Водно-)м)инеральная питательная среда содержит в 1 л воды (г):70%-ная фос)форная кислота (мл) 38Калий хлористый 38Магний сернокислый 18,3Железо сернокислое закисное 1,5Цинк сериоки)слый 1,1Мар)ганец сернокислый 1,05Медь сернокислая 0,14Для поддержания,рН среды применяют3%-ный раствор аммиака. Коэффициент,разбавления среды 0,33 час -Биомассу из культуральной,сред)ы выделяют сепарацией с 0,2% технического сульфоуреида и высушивают на распылительнойсушилке.40Производительность аппарата 7,6 кг/т час.Биомасса содержит 52,6% белка, 2,2% Р 201и 12% липидов.фракцион)ный состав липидо)в (%):фосфолипиды 30 345)Моно-, диглицериды 7Стерины 2,3Свободные иир)ные кислоты 11,3Три)глицериды 41,3Стериновые эфиры и вос)ка 7,8Жирные,кислоты липидов представленысмесью кислот Со - С 8. Суммарное содержание ненасыщенны 1 х кислот 55%,:нечетных - 42,4%; кислот С 6 - 18,2%; кислот С, - 39,3%:и )кислот С 8 - 38,9%.П р имер 2. Дрож)жеподобные гри,бы Гг 1- стозрогоп сар 11 а 1 цгп штамм К/1 выращивают в условиях а)налог)ичных при)меру 1. В 60качестве источника .углерода используют очищенные жидкие парафин)ы 5 Об.%, содержащие н-алканы С 14 - С 2 З, коэффи)циент разбавлен,ия среды 0,2 часПро)изводительность,ферментера составляет 7,8 кг/т . час. В биомассе содериится65 52,8% белка, 3,2% РО 5,и 10,1% липидов.388621 Накопление витаминов группы В дрожжами Гг 1 с 1 тозрогоп сар 11 а 1 нгп (щтаммы К/1 и К) на минеральных средах с углеводородамиСодержание витаминов в культуральной жидкости у - /л в клетках 1 - /г Витамины К - 51/1 К - 51/1 К - 220 К - 220 0,182662041,3 0,162262551,25 Тиа минРибофлавинНикотиновая кислотаПиридоксинБиотин следы28005002 следы 3000 500 3 7Предмет изобретения Составитель М. Ларина Редактор Н. Спиридонова Техред Т. Курилко Корректор А. ВасильеваЗаказ 1209 Изд. М 392 Тираж 468 Подписио ЦНИИПИ Государственного комитета Сои та Министров СССР ио делам изобретений и открытии Москва, Ж, Раушская иаб., д. 4/5Тип. Харьк. фил. пред. Патент Фракционный состав липидов (%);Фоафолипиды 47,5 Моно-, диглицериды 7,9 Стерильны 4,7 Свободные ясирные кислоты 23,3 Триглицериды 7,4 Стеариновые эфиры и вос 1 ка 9,2 Жирные кислоты липидов представлены смесью кислот С - Сц. Суммарное содержание ненасыщенных кислот 58,2%; нечетных - 44,2%, кислот Св - 17,8%; кислот - Сд - 43,9% и кислот С 13 35,б%.П,р игм е р 3. Д,рожжеподобные грибы Ег 1- сЬозрогоп сар 11 а 1 цгп Квыращивают одностадийным непрерывным способом в условиях аналогичных примеру 1 на питательной среде, содержащей 50% от нор,м азотистых веществ, т, е. лимитированной по источнику азота.Состав питателыной среды (г):Аммоний сернокислый 115 70%-ная фосфорная кислота (лл) 38 Калий хлористый 38 1. Способ получения белково-жировой биогмассы путем выращивания микроорганизмов в аэробных условиях на водноминеральной (питательной среде, содЕржащей в .качестве ,источника углерода углеводороды нефти, отличающийся тем, что, с целью повышения содериания жиздра в биомассе и интенсификаМагний сернокислый 18,3 Железо сернокислое закисное 1,5 Цинк сернокислый 1,05 Медь сернокислая 0,14 Вода (л) до 1 Для поддержания рН,используют 3%-ныйраствор МаОН, Очищенные жидкие парафины - 3 об.%. Коэффициент разбавления среды 0,2 час. вПроизводительность аппара та в этиках условияд 4,9 кг,т. час. Биомассасодериит 31,3% белка, 31% липидов.Фракционный состав липидов (%):Фосфолипиды б Моно-, диглицериды З,З Стер,и;ны 3,2 Свободные жирные кислоты 2,9 Триглицериды 77,7 Стеариновые эфиры и воска 10,9 Жирнокислотный состав липндов представлен кислотами С - С,з. Суммарное содержание,ненасыщенных кислот 55,0%, нечетных - 42,4%, кислот С 1 з - 18,2%, кислот Ст - 39,3%,и кислот С 1 з - 38,9% ции процесса, в качестве микроорганизмов используют дрожжеподооные грибы вида Гг 1- спозрогоп са р Иа 1 цгп.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что из вида Рг 1 с 11 озрогоп,используют штамм сар 11 а 1 цтп К.3, Способ по и. 1, отличающийся тем, что из вида гг 1 с 11 озрогоп,используют штамм сар 11 а 1 цгп К/1.