Хничш-ая еиблйс-текл

О П И С А Н И Е 25542ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советских Социалистических РеспубликК ПАТЕНТУ Зависимый от патента Заявлено 12.Х.1966 ( о 12661/23-4)/О 1 л МПК С 07 56386 Приоритет 12.Х 1.1965, (Швейцария). Комитет по дела изобретений и открытий при Совете Министров СССР(088.8) 7,Х.1969. Бюллетень ЪЪ 32 пуоликов та опубликования описания 7.1 Е 19 Ав 1 орыизобретени Иностранцыни Каппелер, Бернхард Риникер и Вернер Рит еат Изелин,КОРТИКОТРОПИНА ИЛИ Р ИЗИЛтт 1 з"т т 8-КОРТИ КОТР ЕРИЛт-ГЛУТАМИ Н ИЛ ИНА ИЛИ ИХ АМИД сус(БОК) - ОСН, расттного метанола, при асыщают аммиаком час в закрытой кол 5 г КБЗ-Лиз(Б воряют в 100 ил комнатной темпер и отстаивают в те ОК) -Лиз абсолю атуре н чение 30 Предлагают способ получения Р-серилт-лизилтт - т 8.рт - тз.кортикстропина или Р-серил- глутаминила- лизилт тя-ра т 8 - кортикотропина или их амидов, заключающийся в том, что защищенный декапептид Р-серил-тирозил-серилметионил-глутамил (или глутаминил) - гистидил - фенилаланил - аргинил - триптофил - глицин конденсируют известным способом, например методом активированных эфиров, с эфиром или амидом октапептида лизил-пропил валил-глицил-лизил-лизил-лизил-лизина, боковые группы которого защищены, с последующим отщеплением защитных групп известным спосабом.Полученный таким способом амид октаде капептида Р-серила.лизилтт - т 8 р 1 - тз-кортикотропин или Р-серил 1-лизилтт-тз-р 1 - тз-кортикотропин, впервые описанный в литературе, обладает большой адренокортикотропной активностью и отличается от других пептидов, об ладающих адренокортикотропным действием, тем, что в качестве первой аминокислоты на аминоконце он содержит Р-аминокислоту.Применяют следующие сокращения:Л.из - лизил 25 Про - пролилВал - валилГлу - глутамилСер - серил Тир - тирозил.Чет - метионплГис - гистидплФен - фенилаланилАрг - аргинилТри - триптофилКБЗ - карбобензоксиБО К - трет-бутилоксикарбонилТБ - трет-бертилСистемы тонкослойной хроматографии обозначаются следующим образом:Система 43 А: трет-амиловый спирт - изопр оп анол - вода (100: 40: 10) .Система 43 С: трет-амиловый спирт - изопропанол - вода (100: 40: 55).Система 52: и-бутанол - ледяная уксуснаякислота - вода (100: 10: 30),Система 52 А: и-бутанол - ледяная укная кислота - вода (67: 10: 23),Система 100: этилацетат - пиридин - ледяная уксусная кислота - вода (62:21: 6: 11).Система 101: и-бутанол - пиридин - ледяная уксусная кислота - вода (30:20: 6:24).П р и м с р 1. КБЗ-Лиз(БОК) - Лиз(БОК)бе. Затем раствор концентрируют до 25 лс.г и в течение ночи отстаивают для кристаллизации в леднике. Отфильтровывают, промывгпот охлажденным метанолом и высушивают кристаллы в вакууме. Получают 3,95 г КБЗ-Лиз (БОК)-Лиз(БОК)-МН с т. пл. 165 С, При тонкослойной хроматографии на силикателе соединение имеет следующие значения К,:К, (хлороформ: метанол 95: 5) 0,11 Кг (хлороформ; метанол 8: 2) 0,75 К с (43 А) 0,76Примененный в качестве исходного материала КБЗ-Лиз(БОК)-Лснз(БОК)-ОСН: с т. пл. 78 - 84 С можно получить из КБЗЛиз(БОК)-ОН и Н-Лиз(БОК)-ОСН (бельгийский патент594338) путем конденсации с помощью дициклогексилкарбодиимида.П р и м е р 2. Н-Лиз(БОК) -Лиз(БОК) -ХН 2. Зг КБЗ-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-ХН, при легком нагреве растворяют в 100 мл метанола и при комнатной температуре гидрируют с 500 мг палладированного угля при встряхивании с абсорбцией образующейся двуокиси углерода, Поглощение водорода заканчивается после - 1 час,и в течение последующего 1 час отфильтровывают катализатор, Фильтрат вьссушивают. Сырой материал перекристаллизовывают из смеси сложного уксусного эфира и петролейного эфира. Продукт имеет т. пл.110 - 112 С, На снликателе получают следую.щие значения К:Кг (хлороформ: метанол 8: 2) 0.32 Кс (43 А) 0,35 К, (52) 0,65П р и м е р 3. КБЗ-Лиз (БОК) - Про-В алГлу-Лиз(БОК) - Лиз(БОК) - Лиз(БОК) - Лиз (БОК) -ХН,5,13 г КБЗ-Лиз(БОК)-Про-Вал-Глу-Лнз (БОК) -Лиз (БОК) -1 МН 2 (заявка2209 с 63 дело 5247/5123) растворяют в 60 мл аосолютпого диметилформампда и охлаждиот до - 25" С. При этой температуре прн перемешиван;сп по каплям добавляют 8,8 лсл 2,115 и. соляной кислоты и затем еще 0,973 мл 5 н, ратвора нитрата натрия, Реакционную смесь перемешивают при - 10 С в течение 15 мин, после чсго добавляют предварительно охлажденньсй до - 10 С раствор 2,0 г и-Лиз(БОК) -Лиз(БОК)- ХН в 10 мл диметилформамида и затем по каплям добавляют 2,6 лсл триэтилампна. Перемешивают при 0 С в течение 30 мии и затем отстаивают при 0 С в течение 20 час. Для выделения сырого, продукта концентрируют до 30 мл, осаждают добавлением 150 мг воды и отфильтровывают хлопьевидно-студенистый осадок. После двукратной перекристаллизацин из смеси метанол - вода (2: 1) получают защищенный октапептид в мелкокристаллической форме:и хроматографически чистом виде с т. пл. 220 - 221 С (разложение).Он имеет на силикагеле следующие значс ния Кг.К, (хлороформ: метанол 9: ) 0 4 Йг (43 А) 0,75П р и х е р 4, н-Лиз(БОК) -Про-Вал-ГлуЛиз(БОК) -Лиз(БОК) -Лиз (БОК) -Лнз (БОК) рт 1,0 г вышеописанного карбобензоксисоедн 5 непРся растворЯют В 250 мл метанола и Гидрируют при встряхивании с 200 мг палладированного угля (100 с 0 РЛ) при комнатной температуре и при абсорбции двуокиси углерода.После отстаивания в течение 6 час отфильтро вывают катализатор, фильтрат высушивают иостаток дважды переосаждают из смеси метанола и воды. Получают 38 мг хроматографи чески однородного производного октапептида, которое на силикагеле имеет следующие зна чения К,:К; (хлороформ: метанол 9:1) 0,14 К (52) 0,63 К (4 1 А) 0,28 20 П р и м е р 5. БОК-Р - Сер-Тир-Сер-МетГлу(ТБ) - Гис-Феп-Арг-Три-Глу-Лиз (БОК) Про-Вал - Глу - Лиз(БОК)-Лиз(БОК) - Лиз(БОК) - Лиз (БОК) -МН 2. 25 30 35 40 45 50 55 60 65 988 лсг БОК-Р-Сер-Тир-Сер-Мет-Глу (ТБ) - Гис - Фен - Арг-Три-Глу-ОН и 736 мг Н-Лиз (БОК)-При-Вал-Глу-Лиз(БОК) - Лиз(БОК)- Лиз (БОК) - Лиз (БОК) -ХН суспендируют в 20 мл пиридина и после добавки 0,3 мл воды и 0,835 лсл 1 н, соляной кислоты перемешивают при 50 С в течение 15 мин. После добавки 378 мг дициклогексилкарбодиимида перемешивают при 50 С в течение 3 час, добавляют еще столько же дициклогексилкарбодиимида, перемешивают при 50 С еще в течение 3 час и копцесприруют до образования полутвердого о:татка. Прн нагревании с 20 лсл диметилформамида пептиды растворяются н;их отделяют фильтрованием от нерастворимой дициклэгекснлмочевины, Фильтрат концентрируют до образования густотекучего остатка, из которого путем добавления 50 мг воды выделяют масл 5 пистый сырой продукт, который Отделяют от маточного щелока и высушивают.Путем двукратного переосаждения из сложного диметилформ ампдмстанолуксусного эфира получают 1,29 г сырого продукта, который подвергают окончательной очистке по методу Крейга в системе растворителя метанол - буфер - хлороформ - четыреххлористый углерод (10; 3: 7: 4). Буфер: 28,5 мл ледяной уксусной кислоты, 19,25 г ацетата аммония в 960 мл воды (с фазовыми объемами по 10 мл). Сначала всгцество распределяется равномерно с наполнением первых 5 элементов. После 171 стадии из элементов50 - 74 (ср,п 1 = 62, Й=О: 57) путем концентрации досуха и сублимации ацетата аммония при 40 С под высоким вакуумом выделяют однородный по тонкослойной хроматографии защищенный октадскапептидамид в виде чистого аморфного порошка с температурой плавления 210 - 225 С (р азложенне) .На силикагеле он имеет следующие значе нияЗаказ 661/7 Тираж 480 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва Ж, Раушская наб., д. 4,5Типография, пр, Сапунова, 2 5Я, (хлороформ: метанол 75: 25) 0,51Кд (43 С) 0.,62Кд (52) 0,55К, (100) 0.43. Предмет изобретенияСпособ получения Р-серилд-лизилдт-дв 15 д - дв. эртикотропина или Р-серилд-глутаминилвизилдт дв-рд дв-кортикотропина или их амиов, отличающийся тем, что защищенный декапептид Р-серил-тирозил-серил - метионилглутамил (или глутаминил) - гистидил-фенилаланил-аргинил - триптофил - глицин конденсируют известным способом, например мето дом активированных эфиров, с эфиром илиамидом октапептида лизил-пролил-валил - глицил - лизил - лизил - лизил - лизина, боковые группы которого защищены, с последующим отщеплением защитных групп известным спо со бом.