248695

Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 15.Х.1967 ( 1183615/23-4)с присоединением заявкиПриоритет 15.1 Х,1966, РУ 5996/66, ЧССРОпубликовано 18.1/.1969, Бюллетень24Дата опубликования описания 19.Х 11.1969 Кл. 12 т 1, 6/01 МГ 1 К С 07 сУДК 547.964.07 (088.8) Комитет па делам изабретеиий и открытий пр Совете Министров СССР(Чехословацкая Социалистическая Республика) Заявитель СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-ДЕЗАМИНО-Р-АРГИНИЛ 8 ВАЗОПРЕССИНАПредлагается способ получения нового активного противодиуретического полипептида 1-дезамино-Р-аргинил 8-вазопрессина (1), который содержит в положении 1 р-меркаптопропионовую кислоту (Мер) и в положении 8- - Р-аргинин. Способ заключается в том, что Р-бензилмеркаптопропионилтирозин, получечный хлорангидридным методом, ступенчато конденсируют гидразидным методом с соответствующими защищенными аминокислотами или пептидами с последующим отщеплением защитных трупп, например воздействием щелочных металлов в жидком аммиаке, и окислением полученного продукта, например феррицианидом калия в водном растворе при рН 6,5 - 7,0.Для временной защиты сульфгидрильной группы, аминогруппы и гуанидиновой группы можно применять защитные группы, используемые в синтетической химии полипептида. Защитная группа может быть также устранена методом, обычно применяемым при синтезе полипептидов, Окисляют полипептид в циклический полипептид известным способом как в водном растворе, так и в смеси растворителей с водой. Например, конденсацией хлорида р-бензилмеркаптопропионовой кислоты с метиловым эфиром тирозина можно приготовить еще е описанный метиловый эфир Р-бензилмеркаптопропионилтирозин, который воздействием гидрата гидразина может быть превращен в еще не описанный гидразид и азид и соединен с метиловым эфиром - фенилаланина. Полученное производное эфира дипептида вновь конденсируют в форме азида с метиловым эфиром глутаминил-аспарагинил-бензилцистеина в еще не известный метиловый эфир 10 Р-бензилмеркаптопропионилтирозил -фенилаланил-глутаминил-аспарагинил- бензил - цистеин, который затем снова соединяют с защищенным производным октапептида синтезом его азида с амидом пролил-М 6-тозил-Р-ар гинилглицина. Защитные группы устраняют путем восстановления с натрием в жидком аммиаке, вследствие чего восстановленный продукт превра щается в результате окисления с феррицианидом калия в новый циклический, биологически активный дисульфид. Циклический дисульфид отличается более высокой и более специфической антидиуретической активностью (см.25 таблицу), чем натуральный аргининвазопрезин.Полипептид является, в отношении его биологического действия, превосходным препаратом для регулирования полиурии и ослабле.30 ния полидипсии при диабете-инсипидус.Активность Специ- фическая эффек- тивность презорическая,интерн.ед,/мг антидиуретическая интерн.ед./мг Соединение 1-Дезамино-Р-Арг 8- вазопрезин 1-Дезамнно-фал Арг.вазопрезин 1454 16000 а 200800 й 170 27,5 29+7 П р им е р, Метиловый эфир р-бензилмвркаптопропионилтирозина.9,2 ч, р-бензилмеркаптопропионилювой кислоты превращают воздействием избытка тионилхлорида в хлорид, который растворяют в 20 мл этилацетата, Этот раствор добавляюг при интенсивном пвремешивании и охлаждении до ОС к смеси из 10,9 ч, 1.-тирозинметилэфиргидрохлорида, 50 мл воды, оО мл этилацетата. Затем к реакционной смеси добавляют дикарбонат натрия. рН остается слабощелочным. Слой ацетата удаляют, сушат, выпаривают при слабом давлении и перекристаллизовывают,из этилацетата - петролейного эфира, Из маточного раствора получают выпариванием и перекристаллизацией вторую фрак. цию. Общий выход 16,5 ч. (93% от теории); т. пл, 89 - 90"С, 1 а - 3,4.+ О,Ь"С (О,Ь, диметилформамид) .Найдено, %: С 54,31; Н 6,21; М 3,75, СзоНза 1 Ч 045 (375,5) .Вычислено, %: С 64,38; Н 6,25; Х 3,71.1 идразид р-бензилмеркаптопропионилтирозин,15,3 г сложного эфира метила р-бензилмеркаптопропионил-тирозина растворяют в 60 мл этанола. Затем добавляют О мл ЬО)о-ного гидрата гидразина и полученную смесь кипятят 2 час с обратным холодильником. К реакционной смеси в избытке добавляют воду, Осаждвнный продукт отсасывают, промывают и перекристаллизовывают из водного этанола, Выход 11,95 г (78%), т. кип, 195 - 194"С, 1 аз 6,0.ф.0,5 С (0,5, диметилформамид).Найдено, %: С 61,10; Н 6,21; Х 11,25.С 1 зНззХзОз 5 (375,5) .Вычислено, %; С 61,10; Н 6,11; 1 Ч 11,15.Сложный эфир метила Р-бензилмеркаптопропионилтирозил-фенилаланина.5,6 г гидразида р-бензилмеркаптопропионилтирозила растворяют в смеси из 50 мл диметилформамида и 4 мл концентрированной хлористоводородной кислоты, К раствору добавляют при перемешивании и охлаждении до - 10 С 1,03 г нитрита натрия,и 2 мл воды, рН реакционной смеси, равное б - 7, устанавливают добавлением 1 ч-этилпиперидина. К смеси прибавляют 2,7 г метилового эфира фенилаланина в 3 мл диметилформамида. После выдерживания в течение 12 час при 0 С и 2 час при комнатной температуре реакционную массу выпаривают при слабом давлении. К масло 65 Найдено, %: С 57,24; Н 6,02; И 13,95.Сз 7 Нз 4 И 4043 з (1405,65) .Вычислено, %: С 57,33; Н 6,01; К 13,99.Дезами 1 го-Р-аргинин-вазопрезин,4образному остатку добавляют воду в избытке,а затем осажденный продукт отсасывают и перекристаллизовывают из водного этанола,Выход 7,6 г (97%); т. кип, 151 - 152 С,1 азоз + 17,5 - 0,5 С (0,5, диметилфоРмамид),Гидразид-р - бвнзилмеркаптопропионил - тирозил-фенилаланина.14,0 г метилового эфира р-бензилмеркаптопропионил-тирозил-фенилаланина кипятят 2 часс обратным холодильником с 100 мл метанолаи б мл 80%-ного гидразингидрата. Осажденный продукт отсасывают, промывают с фильтром вместе метанолом и простым эфиром иперекристаллизовывают из смеси диметилформамида с водой,Выход 10,1 г (72%); т. кип. 248 - 250 С;1 а 21,9. 0,5 С ( - 0,55, диметилформ амид),Метиловый эфир р-бензилмвркаптопропионил-тирозил-фенилаланил - глутаминил - аспа 20рагинил-Я-бензил-цистеина.8,0 г Р-бензилмеркаптопропионил-тирозилфенилаланил-гидрацида конденсируют обычным способом с 7,2 г метилового эфира глутаминил-аспарагинил-Ъ-бензил-цистеина. После переКристаллизации из диметилформамидаи воды получают 11,3 г (76%) продукта ст. кип, 253 - 255 С; 1 ао 29,6+0,5 С (0,5, диметилформамид).Найдено, %; С 59,73; Н 6,20; М 10,17,С 4 зНз 7%01 оЗз (965,1) .Вычислено, %; С 59,61; Н 6,23; Ь 10,23.Гидразид р-бензилмеркаптопропионил-тирозил-фенилаланил-глутаминил - аспарагинил-Ябензил-цистеина.Раствор 10,8 г метилового эфира Р-бвнзилмеркаптопропионил-тирозил -фенилаланил-глутаминил-аспарагинил-Ъ - бензил-цистеина в160 мл диметилформамида добавляют к 12 мл40 80% -ного гидразингидрата. Реакционную смесьотстаивают 12 час при комнатной температуре.Осажденный продукт отфильтровывают, промывают с фильтром вместе метанолом и простым эфиром и затем высушивают, Выход 6,7 г45 (62%), т, кип. 266 - 268 С без изменения пасле перекристаллизации из диметилформамидаи воды; 1 а - 33,4+ 0,5 С (0,5, диметилформамид).Найдено, %: С 59,04; Н 6,01; М 13,19.50 С 47 Нз 7 МзОзЗз (956)1) .Вычислено, %: С 59,04; Н 6,16; Х 13,25.Амид р-бензилмер капто пропионил-тирозилфенилаланил-глутаминил - аспарагинил-З-бен.зил-цистеинил-пролил - Из-тозил - Р - аргинилглицина готовят обычным способом (см. выше) из гидразида Р-бензилмеркаптопропионилтирозил.-фенилаланил. - глутаминил . аспарагинил-бензил-цистеина и амида-пролилХ 6-тозил-Р-аргинил-глицина. Выход 68%,60 т. кип. 223 - 235 С.248695 Составитель А. АкимоваТекред А. А. Камышникова Редактор С. Лазарева Коррктор А. С. Колабин Заказ 3425/8 Тираж 480 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва Ж, Раушская наб д. 4/5Типография; пр, Сапунова, 2 0,5 г амида р-бензилмеркаптопропионил-тирозил-фенилал-анил - глутаминил - аспарагинил-Я-бензил-цистеинил-пролил-Р - тозил - Р- аргинил-глицина восстанавливают натрием в жидком аммиаке обычным способом, Получен ную после выпаривания аммиака фракцию растворяют в 800 мл 5-ной уксусной кислогы, Раствор фильтруют, рН фильтрата гидро- окисью натрия устанавливают в пределах 6,5 - 7 и раствор окисляют обычным способом,рН реакционной смеси в пределах 4,0 - 4,5 устанавливают путем добавления уксусной кислоты. Пептид улавливают на столбе карбоксиобменника, вымывают 507 о-ной уксусной кислотой и изолируют лиофилизацией. Сырой продукт очищают высоковольтным электрофорезом обычным способом.Выход лиофилизата составляет 100 - 200 мг; а р - 652 С (0,2, М СНзСООН),Найдено, %: С 50,49; Н 6,10; М 16,48,С 4 сНс 4 К 40 аЯз2 СНзСООН (1189,3).Вычислено, /о: С 50,39; Н 6,32; М 16,45.Анализ состава аминокислоты следующий:Цис (ЯН) 0,40; Тир 0,98; фал 1,03; Глу 1,05;Асп 1,00; Про 1,03; Арг 0,98; Гли 0,95. Предмет изобретенияСпособ получения 1-дезам ино-Р-аргинилввазопрессина, отличающийся тем, что Р-бензилмеркаптопропионилтирозин ступенчато конденсируют гидразидным методом с соответствующими защищенными аминокислотами или пептидами с последующим отщеплением защитных групп известным способом, например воздействием щелочных металлов в жидком аммиаке и окислением полученного продукта, например, феррицианидом калия в водном растворе при рН 5,5 - 7,0.