Штамм вируса клещевого энцефалита для приготовления диагностических препаратов

(и)5 С 12 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ВТОРСКОМ ИДЕТЕЛЬСТВ институт инфекци- усологииаввй Цель изобретен штамм вируса клещево дающий повышенной а генной активностью.При идентификации по реакции связывани реакции торможения ге бором иммунных асцит русам, относящимся к Изобретение от Штамм вируса М Казпт хранит миссивных вирусны миологии,микроби болезней Минздр в государственной ститута вирусологи АМН СССР под н ьный обла- мунопт носитсяклещевся в лабох инфекологии иава Казаколлекци им.Домером к вирусологии. го энцефалита ратории трансций НИИ эпидеинфекционных хской ССР и ии вирусов ИнИ.Ивановското 871. ия - оригинал го энцефалита, нтигенной и им штамма М Каз я комплемента магглютинации ных жидкостей различным гру и по с нак випам,(21) 4638765/13(71) Научно-исследовательскийэпидемиологии, микробиологии ионных болезней и Институт вирим. Д.И,Ивановского(56) Гайдамович С.Я., Львова А,И., Обухова В.Р и др. Вопросы вирусологии, 1969. М 6, с 676-683.Фадеева Л.Л., Пырикова А.П., Яковлева Л.С Изучение биологических свойств музейных штаммов антроподонозных вирусов, Клещевой энцефалит, Минск, 1965,с. 12-21.(54) ШТАММ ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТАДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к вирусологии. Целью изобретения является оригинальный штамм вируса клещевого энцефалита, обладающий повышенной антигенной и иммуногенной активностью, Штамм вируса клещевого энцефалита М Каэпт (ГКВ 871) выделен от птицы галки. Штамм прошел 6 пассажей, инкубационный период составляет 4 дня на новорожденных белых мышах. Инфекционный титр достигает 7,5 9.050/0,02 мл, Взаимодействие штамма с культурой клеток СПЭВ происходит в форме острой инфекции, сопровождается дегенерацией клеток, титр равен 7,2 19 ТЦД 50/мл. Штамм обладает гемагглютинирующей способностью. Эритроциты гуся агглютинируют в широкой зоне рН - от 6,0 до 7,0 при оптимальном рН 6,2. Титр гемагглютининов колеблется от 1:2560 до 1:5120.Штамм высоко чувствителен к эфиру, хлороформу и дезоксихалату натрия, Титр снижается при этом на 4 19 1 0 50/0,02 мл. Штамм М Каз - 20 пт показывает антигенное родство с вирусом клещевого энцефалита штаммом "Софьин", но отличается высокой антиген-, 3 ной и иммуногенной активностью. Штамм используется для приготовления специфических диагностических препаратов (антигена, иммунной асцитной жидкости), которые употребляются при идентифика- Б ции вновь выделенных штаммов вируса клещевого энцефалита, повышения диагностической эффективности лабораторных исследований больных клещевым энцефалитом и изучения иммунологической струк- ф туры населения, домашних и диких 4 животных. 4 табл.10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 установлена его антигенная связь со штаммом вирусэ клещевого энцефалита "Софьин" (табл. 1 и 2),Выделенный штамм вируса клещевого энцефалита М Казпт имеет следующую морфологическую и физиологическую характеристику,Морфологические признаки. При фильтрации вирусосодержащей суспензии через миллипоровые фильтры размером 100 и 50 нм снижения инфекционного титра не наблюдается, Обработка вирусодержащей суспензии дезоксихолатом натрия и хлороформом приводит к снижению титра вируса на 4 д. Это свидетельствует о том, что штамм вируса имеет размеры в пределах до %0 нм и содержит липопротеиновую оболочку. При обработке БУДРом титр вируса не снижается, что является доказательством принадлежности его к РНК-содержащим вирусам.На основании морфологических, морфогенетическим и антигенных признаков изолированный штамм вируса относят к семейству Тогавириде, роду Флявивирус, антигенной группе В, штамму вируса клещевого энцефалита.Культуральные свойства. Взаимодействие штамма вируса клещевого энцефалита М Казпт с культурой клеток СПЭВ происходит в форме острой инфекции, сопровождается дегенерацией клеток, титр равен 7,2 9 ТЦД 50/мл, с куриными и человеческими фибробластами - в латентной форме, без ЦПД.Адаптационные свойства. Исходный штамм вируса клещевого энцефалита % Каэпт выделен от птицы галки в предгорьях Заилийского Алатау и адаптирован к организму 1-2-дневных белых мышей, прошел 6 пассажей. Инкубационный период составляет 9 при первичном заражении и сокращается до 3-4 дней в последующих пассажах. Инфекционный титр штамма вируса для новорожденных белых мышей при мозговом заражении достигает 7,5 90 50/0,02 мл.Антигенные свойства. Штамм обладает гемагглютинирующей способностью. Э ритроциты гуся агглютинируют в широкой зоне рН - от 6,0 до 7,0 при оптимальном рН 6,2.Титр гемагглютионов колеблется от 1:2560 до 1:5120. При серологической идентификации в РСК и РТГА штамм - Каэпт показывает антигенное родство со штаммом вируса клещевого энцефалита "Софьин", но отличается высокой антигенной и иммуногенной активностью,Штамм М Казпт при иммунизации лабораторных животных вызывает образование комплементосвязывающих, антигемагглютинирующих, преципитирующих и вируснейтрализующих антител.У больных людей с остролихорадочными заболеваниями в сыворотках крови также выявляются комплементосвязывающие,антигемагглютинирующие, преципитирующие и вируснейтрализующие антитела к штамму М Казпт,П тогенные свойства штамма для животных, Вызьвает смертельную инфекцию у новорожденных и взрослых белых мышей при внутримозговом заражении, Инфекционные титры достигают 7,590 50/0,02 мл и 6,8 ц0 50/0,03 соответственно.Патогенные свойства штамма вируса клещевого энцефалита М Казпт для людей, Штамм является патогенным и для чело века. При обследовании остролихорадочных больных роль его в инфекционной патологии установлена в 13 случаях. Данные подтверждены лабораторными исследованиями с применением диагностикумов, приготовленных из штамма М Казпт.Как показывают результаты в РСК и РТГА с антигеном штамма Каэпт, специфические антитела в сыворотках крови больных выявляются в 2,7 и 1,4 раза соответственно чаще по сравнению с антигеном из эталонного штамма клещевого энцефалита "Софьин" и в более высоких титрах. Диагностический препарат антиген из штамма В Казпт получают путем внутримозгового заражения новорожденных белых мышей. Из мозга животных, взятых на высоте клинических проявлений заболевания, готовят антиген путем сахарозо-ацетоновой экстракции.Диагностическую иммунную асцитную жидкость готовят по известному методу С.Я. Гайдамович.Изобретение иллюстрируется следующими примерами. П р и м е р 1. Материал для исследования - сыворотки крови от больных людей с подозрением на арбовирусные инфекции, взятые в начальном периоде заболевания и реконвалесценции, Проводят постановку серологических реакций - РСК и РТГА с использованием сахарозо-ацетонового анти- гена. приготовленного иэ штамма вируса клещевого энцефалита М Казпт. Реакцию оставляют по общепринятому способу - микрометодом на аппарате Такачи,Результаты исследования сывороткибольного приведены в табл. 3. Таким образом, использование предлагаемого штамма для приготовления диагностических препаратов способствовало1634711 Таблица П р и м е ч а н и е. числитель - обратная величина титра антител, знаменатель - обратная величина титра антигена. Таблица 2 15 П р и м е ч а н и е. " Обратная величина титра антител,ТаблицаЗ Таблиц повышению диагностической эффективности лабораторных исследований больных клещевым энцефалитом.П р и м е р 2. Материал для исследования - 10-ные суспенэии из клещей, собранных в природных очагах клещевого энцефалита. Проводят постановку РНГА с эритроцитарными диагностикумами, приготовленными на основе иммунной асцитной жидкости из предлагаемого штамма вируса Казпт и эталонного "Софьин". РН ГА ставят по общепринятой методике (табл. 4). Как показывают результаты исследования, препараты, приготовленные из предлагаемого штамма Каэпт, позволяют в короткий срок и с максимальной достовер ностью провести идентификацию вирусаклещевого энцефалита в клещах по сравнению с препаратами из эталонного штамма "Софьин".Формула изобретени.10 Штамм вируса клещевого энцефалитаГКВ ЛЬ 871 для приготовления диагностических препаратов.