Способ количественного определения флавоноидов в растительном сырье

(Р 4 А 61 К 35/7 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ОПИС ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИ 4 ЕТЕЛЬСТВУ сследоваи технологии Колесни(56) КошдвсЬ РдВ 1, 33. аппакде, 1960,(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛАВОНОИДОВ В РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ(57) Изобретение относится к фармацииа именно к фармацевтической химии,.и может быть использовано для количественного определения флавоноидовв лекарственном растительном сырье.Цель изобретения - сокращение числа рирования поЗволяет получать более точные результаты анализа, так как при этом исключается поглощение сопутствующих окрашенных веществ растений. Контрольную пробу подкисляют уксусной кислотой для переведения флавоноидов и сопутствующих нм веществ в недиссоциированную форму с целью улучшения воспроизводимости результатов.П р и м е р 1. Определение рутина в бутонах софоры японской.0,5 г (точная масса) измельченного и просеянного сквозь сито с ра мерам отверстий О, 5 мм сырья бутонов софоры японской помещают в колбу со шлифом вместимостью 200 мл, прибавИзобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической химии, и может быть использовано для количественного определения флавоноидов в лекарственном растительном сырье.Цель изобретения - сокращение чис ла операций и времени.Сущность предлагаемого способа состоит в быстрой экстракции флавоноидов из растительного материала большим (не менее чем 100-кратным) избытком кипящего 30-70% водного раствора спирта, проведении реакции комплексообразования с хлоридом алюминия и спектрофотометрировании на фоне пробы, подкисленной уксусной кислотой, Такой способ спектрофотомет(21) 4301201/28-14(71) Всесоюзный научнотельский институт химилекарственных средств(53) 615.32 (088.8) 801507 2операций и времени анализа. Точнуюнавеску лекарственного растительного сырья кипятят 20-30 мин с 30-707-ным спиртом при соотношении 1;(00-200) в колбе с обратным холодильником,охлаждают, доводят до первоначальноймассы соответствующим спиртом,профильтрованную аликвотную часть экстракта обрабатывают хлоридом алюминия в 707-ном спирте и измеряют при аналитической длине волны 410-415 нм оптическую плотность раствора на спектрофотометре на фоне пробы, не обработанной хлоридом алюминия, а подкисленной уксусной кислотой. Параллельно в тех же условиях проводят опыт с с 1, 5 мл О, 17-ного раствора рутина.Расчет содервания фдавоноидов в сырье Щ осуществляют по формуле, приведенной в описании, 1507394ляют 100 мл ЗОХ-ного этилового спирта, взвешивают, присоединяют к колбе обратный водяной холодильник, содержимое колбы нагревают 20 мин на кипящей водяной бане, отмечая время с начала кипения, затем колбу отсоединяют, искусственно охлаждают, взвешивают и при необходимости доводят до первоначального веса соответст вующим спиртом. В две мерные колбы вместимостью 100 мл помещают по 1 мл экстракта, в одну колбу прибавляют 4 мл 52-ного раствора хлорида алюминия, а в другую колбу - 0,1 мл 15 303-ной уксусной кислоты, доводят объем в колбах водой до метки, перемешивают и через 10 мин измеряют оптическую плотность раствора с хлоридом алюминия на спектрофотометре 20 в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 415 нм, применяя в качестве контроля раствор, подкисленный уксусной кислотой.Параллельно в тех же условиях проводят опыт с 1,5 мл 0,1 Х-ного раствора рутина.Расчет содержания рутина в абсолютно сухом сырье проводят по формуле 300 100 С, 100 100ХР Ч а (100-Ь)где О - оптическая плотность спектрофотометрируемой пробы анелизируемого экстракта;Р, - оптическая плотность спектрофотометрируемой пробыраствора рутина;С - содержание рутина в спектро 40фотометрируемой пробе в пересчете на срое вещество,г;а - масса сырья, взятая дляэкстрагирования, г,Ь - влага сырья, 7;Ч - объем экстракта, взятогодля спектрофотометрирования, мл.П р и м е р 2. Определение флавоноидов в листьях скумпии. 501 г (точная масса) измельченного ипросеянного сквозь сито с размером отверстий 1 мм растительного материала помещают в колбу со шлифом вместимостью 200 мл, прибавляют55 100 мл 503-ного этилового спирта,взвешивают, присоединяют к колбе обратный водяной холодильник, содержимое колбы нагревают 30 мин на водяной бане, отмечая время с начала кипения, затем колбу отсоединяют, искусственно охлаждают, взвешивают и при необходимости доводят до первоначального веса соответствующим спиртом. Часть извлечения фильтруют, отбрасывая первые порции фильтрата. В две мерные колбы вместимостью 25 мл помещают по 2, О мл фильтрата, в одну колбу прибавляют 4 мл 5 Е-ного раствора хлорида алюминия в 707.-ном спирте, а в другую колбу - 0,1 мл 307-ной уксусной кислоты, доводят объем в колбах 703-ным спиртом до метки, перемешивают и через 30 мин измеряют оптическую плотность раствора с хлоридом алюминия на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 415 нм на фоне раствора, подкисленного уксусной кислотой, Параллельно в тех же условиях проводят опыт с 1, 5 мл О, 17-ного раствора рутина в 95 Е-ном спирте. Расчет содержания флавоноидов в сырье в пересчете на мирицетин-З-рамноэид, проводят по приведенной в примере 1 формуле, однако, в знаменатель вводят коэффициент 1,27, полученный делением молекулярной массы рутина на молекулярную массу мирицетин-З-рамноэида, так как последний является основным компонентом флавоноидов листьев скумпии.В таблице приведены результаты определения флавоноидов предлагаемым способом в различном растительном сырье.Предлагаемый способ упрощает количественное определение флавоноидов в растительном сырье эа счет исключения операций упаривания, фильтрации, обработки аликвотной части извлечения четыреххлористым углеродом, уксусной кислотой, пиридином, а также в 1 О раз сокращает время проведения анализа. формула изобретенияСпособ количественного определения флавоноидов в растительном сырье путем экстракции спиртом, обработки извлечения алюминия хлоридом и фотометрирования, о т л и ч а ю щ и й с я. тем, что, с целью сокращения числа операций и времени, экстракцию проводят кипячением в течение 20-30 мин с 30-703-ным водным раствором спирта1507394 6 фоне прооы, подкисленной уксусной кислотой,при соотношении 1:100-200 с последующим спектрофотометрированием на Растительный материалУсловия экстракции Параметры спектрофотомет- рирования ЭкстраВремя,Объеммакс )нм гент мин 26,5 0,25 0,5 415 1)00 30%-ный 20 70 415 1,27 2,0 скумпииЛистья 415 1,27 70 1,5 сумахаЛистьякаштана 30 70 410 1,40 2,2 1,5 70%-ныйспирт 30 70 410 1,40 0,6 Трава зверобоя 50%-ныйспирт 30 1,14 70 410 5,1 Цветкиромашки То же 20 2,5 70 415 1,00 2,0 П р и м е ч а н и е. Соотношение сырье - экстрагент 1:100.По методике берут 1 мл экстракта на 100 мл спектрофотометрируемого раствора. Составитель С. ФирсоваТехред А.Кравчук Корректор М. Самборская Редактор Л; Веселовская Заказ 5481/9 Тираж 643 Подписное ю ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 Бутоны софоры японскойЛистья конскогоТравагорцаптичьего спирт50%-ный 30спиртТо же 30 экстракта для25 млпробы,мл Концентрация спирта,