Способ получения сорбента для разделения олигонуклеотидов

.С 01 И 30/08 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ОРБЕН ИДОВ,7 вема полиоксиднойксане,сследова-лярной биолоем, чт сти рбента;обработкутриле,хе 1 Д В.И., Ямщиков В олигонуклеотидов лях, моди 4 Вщирован ном. - "Биоорган 3, т. 9, Ф 9, с.Офицера матография тых носите лиэтиленим химия", 19 1253.(71) Всесоюэный научнотельский институт молегии,7. СЬговойо 8 г, 1976, ч 1совЬе,1.А. Орх с 1 ев апдпдей опоп вдсгораг- НР С.117, р. 269"(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯДЛЯ РАЗДЕЛЕНИЯ ОЛИГОНУКЛЕвключающий обработку кремэтиленимином и растворомсмолы или дибромэтана в дотличающийсяс целью повьвпення селективраэрешающей способности сдополнительно осуществляюйодистым метилом в ацетон111539Изобретение относится к материалам для жидкостной хроматографии и может быть использовано в синтезе сорбентов для разделения и анализа олигонуклеотидов. 5Цель изобретения - повышение селективности и разрешающей способности сорбента,Сущность предложенного способа заключается в следующем. Высушенный в вакууме силикагельобрабатывают раствором полиэтиленими"на в эгиловом спирте, перемешивают,15дегазируют,фильтруют, отмывают этиловым спиртом. Полученную композицию сушат и обрабатывают растворомэпоксидной смолы или дибромэтана вдиоксане. После следующей промывки20сорбента и сушки на него воздействуютизбытком иодистого метила в ацетонитриле, дегазируют и кипятят реакционную смесь, промывают ацетонитрилом иокончательно высушивают,76Содержание азота в полученномсорбенте по элементному анализусоставляет 1,47, что соответствуетемкости 1,0 мг-экв/г. П р и и е р 2, Синтез сорбента, Синтез проводят аналогично примеру 1, но вместо раствора эпоксидной смолы берут 107-ный раствор 1,2-дибромэтапа в диоксане. После обработки иодистым метилом и сушки, сорбент заливают 50 мл смеси диметилбензиламина и ацетонитрила (1:1), встряхивают 2-3 мин, дегазируют и оставляют на 10 ч. После этого носитель промывают на воронке с фильтрующим дном ацетонитрилом (Зх 30 мл), этиловым спиртом (3 х 30 мл), водой (3 х 30 мл), сушат при 100 С 2 ч, Содержание азота в полученном сорбенте по элементному анализу составляет 1,4%, что соответствует 10 мг-экв/г.х о где юх х=1; х = 21 х=З; х=4; П р и м е р 1. Синтез сорбента,2 г силохрома Сс удельной поверхностью 80 и/г, предварительно высушенного в вакууме при 190 С в течение 3 ч, помещают в круглодонную кол 1 бу на 100 мл и заливают 20 мл 107. -ного раствора полиэтиленимина (молекулярная масса 35 тыс.) в этиловом спирте. Хорошо перемешивают на встряхиватеяе 3 мин дегазируюту . оставляют на 40 мин и повторяют встряхивание. Затем силикагель на фильтрующей воронке промывают этиловым спиртом (6 х 30 мл) и сушат при 90 С в вакууме в течение 2 ч, пере- . 4 О носят в круглсдонную колбу на 100 мл, добавляют 20 мл 107.-ного раствора . эпоксидной смолы ДЭГв диоксане, встряхивают 2 мин, дегаэируют, оставляют на 12 ч, После этого носитель. 45 промывают последовательно диоксаном(3 х 30 мл), спиртом (3 х 30 мл), ацетонитрилом (3 х 30 мл), спиртом (2 х 30 мл), сушат в вакууме при 90 С в течение 2 ч, Переносят в круг" 5 О лодонную колбу на 100 мл, добавляют 50 мл 507.-ного раствора иодистого метила в ацетонитриле, перемешивают на встряхивателе 3 мин, дегазируют, кипятят 2 ч и оставляют на 12 ч при комнатной температуре. Промывают сорбент ацетонитрилом (3 х 30 мл), этиловым спиртом (3 х 30 мл), сушат при 90 С в течение 2 ч. Полученный сорбент испытывали на жидкостном хроматографе высокого . давления модели 332 фирмы "Альтекс" (СЩ). В качестве элюита испольэовали 0,1 М КН РО рН б,5; 30% МеСИ, скорость потока 0,5 мл/мин. Использовали сорбенты с размером частиц 10 мкм, колонки 3,2 х 250 мм.Селективность сорбента определяют по известной формуле коэффициент селективности;олигодезоксинуклеотид;с 1(СААСССТССА);й (СТСТТАСССАА);с 1 (АААААСССТТАСАА);й (САЛАССТСААТАА);время удерживания декадеэоксинуклеотида;время удерживания х-гоолигодезоксинуклеотида;время выхода неудерживаемогона колонке вещества. Коэффициенты селективности предла" гаемого,известного и фирменного сорбента Рагехз 1 БАХ приведены в табл.1, Рагсдз 11 БАХ " сорбент фирмы 11 йаСшап (США), представляющий собой сильный анионообменник, наиболее часто используемый для выделения олигонуклеотидов.1153976 Таблица 1 Коэффициент се лективКоэффициент селективности сорбента ности Таблица 2 предло- иэвест- Рагс.дзд 1женного ного БАХ РагСдз 11БАХ Известныйсорбент Коэффициенты разрешающейспособПредложенныйсорбент 1,833 2,140 о 1,2 2,543 еС 1,3 4,304 оС 1,4 7,456 3,286 1, 583 ности 15 3,333 5,571 1,3 5,3 1,2 0,89 2,5 б,б 4,3 2,3 9,7 11 дгде В.Составитель С. Староверов Редактор А, Сабо Техред Т.Дубинчак Корректор И, ЭрдейиЗаказ 2570/7 Тираж 541 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж,Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Селективность представляет собой отношение чистого времени удерживания двух компонентов и ее можно определить непосредственно иэ хроматограммы.Отношение времени удерживания двух компонентов (оО на предлагаемом сорбенте больше, чем на известных, что позволяет получать значительно лучшее разделение предложенных олигонуклеотидов.Коэффициент разрешающей способности .сорбента вычисляют по формуле М + Ъ 7коэффициент разрешающей способности;время. удерживания уго олигодезоксинуклеотида; время удерживания декадезок" синуклеотида;ширина пика декадеэоксинуклеотида; ширина пика у-го олигодечэоксинуклеотида.Сравнение коэффициентов разрешающей способности сорбентов предложенного, известного и РагС 1 з 11 БАХ даны в табл, 2. С помощью коэффициента разрешающей способности можно количественноопределить степень разделения веществ.Из данных, приведенных в табл.2,видно, сто самая высокая степень разделения олигонуклеотидов достигаетсяна предложенном сорбенте, что делаетвозможным полное разделение всех четырех олигонуклеотндов в отличие отизвестных сорбентов,Таким образом, предложенный способполучения сорбента позволяет повыситьселективность и разрешающую способность сорбента по сравнению с извест"ными, что повышает качество раэделения и анализа смесей олигонуклеотидов.