Способ определения физиологического состояния тканей растений по активности пероксидазы

СОЮЗ СОВЕ 1 СНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 01 6 7 00 РЕТЕНИЯ 0-15 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗОН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ(71) Всесоюзный ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт защиты растений (53) 577. 15.08 (088 8)(54)(57) 1,СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ фИЗИОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ ТКАНЕЙ РАС.,ЯО,) 063329 ТЕНИЙ ПО АКТИВНОСТИ ПЕРОКСИДАЗЫ,включающий определение влияния фактора на растение по изменению активности пероксидаэы, .о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышенияточности и уменьшения трудоемкости,определяют активность мембранносвяэанной пероксидазы .2, Способ по п,1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что активность мембрано-связанной формы пероксидазыопределяют после инкубирования суспензии тканей в среде с конформацнонно-активным агентом в течение17-18 ч,3. Способ по п. 2, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что в качестве конформационно-активного агента используют 2 М раствор хлористого калия,О Таблица 1 Время проведенияопыта Середина хранения, ,хранени 1/1 00 35, 1/1 2 чтоьноом механичессказывасостояниито проявилоси извлекаемормы пероксиС повышаетции, полдание, сним, белойуровень абтвенную пров п и извлекаемо ормы перокси ови, хранивк контролю) Изобретение относится к сельскомухозяйству и может быть использовано в селекции на иммунитет растенийк болезням и для контроля качествасельскохозяйственной продукции прихранении,5Известен способ определения физиологического состояния тканей растений по сравнению с общей активностьюпероксидаэы зараженного и здоровогорастения Г 1 3.Однако этот способ недостаточно точен.Известен также способ, основанныйна сравнении активности водорастворимой Формы пероксидазы зараженного и здорового растения Г 23.Известный способ недостаточно надежен, имеет ограниченную область.применения (только в фитопатологии)и слишком трудоемок из-эа очисткипероксидазы на биогелеЦель изобретения - повышениеточности и уменьшение трудоемкости.Поставленная цель достигаетсятем, что определяют активностьмембранно-связанной формы пероксидаэы.Причем активность мембранно-свяэан -ной формы пероксидазы определяютпосле инкубирования суспензии тканейв среде с конформационно-активным ЗОагентом в течение 17-18 ч.Кроме того, в качестве конформационно-активного агента используют2 М раствор хлористого калия.Способ реализуется следующим 35образом.Готовят гомогенат тканей растения, затем его центрифугируют, Наполученный осадок биомембран действуют конформационно-активнымиагентами, после чего определяют каталитическую активность извлекаемой ими мембранно-связанной формыпероксидазы, величина которой характеризует физиологическое состояние растений, Снижение активности 45извлекаемой мембранно-связаннойформы пероксидаэы у опытного растения по сравнению с контролемозначает упрочнение связей фермента с мембранным матриксом, т.е. ста Обилиэацию структуры, что являетсяположительным Фактором для растения,возрасгание же активности извлекаемой мембранно-связанной формы Фермента свидетельствует о дестабилизации структуры: чем больше даннаявеличина по отношению к контролю,тем значительнее степень отрицательного воздействия какого-либофактора на Физиологическое состояниетканей растения (больше степень 6 Опоражения, заражения, старения, фитотоксического действия пестицидов,)П р и м е р 1 Исследованиевлияния механических поврежденийна физиологическое состояние тка не корнеплодов моркови в процессе хранения.Гомогенат тканей моркови центрифугированием разделяют на цитоэоль и осадок биомембран, на который воздействуют конформационно-активными агентами следующим образом: суспензию осадка делят на две части и заливают 2 М раствором хлористого калия и водой в соотношении 1;1. После инкубирования надосадочную жидкость отделяют центрйфугированием и в полученных супернатантах определяют каталитическую активность извлекаемой мембранносвяэанной формы пероксидазы по Гэлстону,Величина активности извлекаемой мембранно-связанной формы пероксидазы механически поврежденных корнеплодов моркови (процент к контролю) характеризует физиологическое состояние исследуемых корнеплодов (табло 1) Активность мембранно-связанной формы пероксидаэы корнеплодов,отн . ед,/В Из табл 1 видно,повреждения отрицателются на физиологическкорнеплодов морковив увеличении активносмембранно-связанной фдаэыП р и м е р 2 Исследование влияния хранения корнеплодов моркови в модифицированной среде (МГ на физиологическое состояние их тканей.Хранение моркови в МГ выход стандартной продук ностью предотвращает увя жает пораженность фомозо и серой гнилью, снижаетсолютного отхода и естес убыдь,Данные примера 2сделанный на основанализа вывод о пр мущпо сравнению с обычным холодильнымхранениемИсследование одят аналогичримеру 1Величина активност й мембранно-связанной Фдаэы корнеплодов моркшихся в МГС, (процент1063329 Обработка клубней картофеля дитаном Мв завышенной концентрации(13,3) угнетает ростовые процессы,проявляя при этом,тератологическоевоздействие на темновые ростки, чтосопровождается возрастанием активности извлекаемых мембранно-связанных форм пероксидаэ 1 ы,Исследование проводят аналогичнопримеру 1. В данном случае наряду сраствором хлористого калия в качестве конформационно-активного агентаприменяют 0,1-ный раствор тритона ХВеличина суммарной активности15 мембранно-связанной формы пероксидазы ростков картофеля , извлекаемой конформационно-активными агентами (процент к контролю) характеризует физиологическое состояние ис 0 следуемых ростковстремя проведенияопыта Таким образом, при хранении корнеплодов моркови в МГС значительно 25 повьВ 1 ается ВыхОд тОВарной продукции.Из табл, 4 следует, что исследование, проведенное предлагаемымспособом, позволяет выявить преимущества МГС для хранения корнеплодов и более объективно отразить 30 Физиологическое состояние тканейрастений,Та блица 41 Активность перокеидазы по способам,уд, ед. /35Неповр орнепл н 5 7, 0 7 45 а лица 3 занной фор отн,ед./ тивность мембра пероксидазы ро 25,50,8 5,00 о-с ков 5 00 100 наных нтрольлубн ях бе достиг за счет со 184/10 5/41 ШИПИ Заказ 103.892 краж 72 Годгисно пиал ППП фПатент", г. Ужгород, ул. Прое Ф характеризует физиологическое состояние исследуемых корнеплодов ,(табл . 2),Таблица 2 Активность мембранносвяэанной Формы перокси дазы корнеплодов,отн.ед./ контроль-хранившихсяных в МГС Серединахранения 9,15/100 7,21/79Конецхранения 29,1/100 18,9/89Из табЛ, 2 видно, что хранениев модифицированной газовой средеположительно влияет на физиологи-ческое состояние тканей корнеплодов моркови, что проявилось в снижении активности извлекаемой мембранно-связанной формы пероксидаэЫТаким образом, с данными трвароведного анализа коррелирует такойпоказатель физиологического состояния тканей, как активность мембранно-связанных форм пероксидазЫП р и м е р 3, Исследованиевлияния предпосевной обработкифунгицидом дитаном Мклубнейкартофеля на физиологическое состояние тканей ростковВ некоторых случаях при использо.вании фунгицидов имеет место Фитотоксический эффектВ связи с этимважно выявить физиологические критерии фитотоксичности препаратодКак показано в примере 3, однимиэ таких критериев может служитьактивность извлекаемых мембранносвязанных Форм фермента,В том случае, когда препарат оказывает стимулирующее влияние нарастения (обработка клубней 0,2 ным дитаном М), активность извлекаемых форм пероксидаэы снижается,что свидетельствует об укреплении.структуры мембранного аппарата клеток (табл, 3). Поврежденные корнепло разом,в предз агаемом спосотся снижение трудоемкостирщения Операций с 12 до 16,