Способ определения сульфгидрильных групп в белках

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоретскикСоциалистическихРеслублнк н 11951119 Ъ.(22) Заявлено 23.12, 80 (21) 2965715/28-13 51) М. Кл.з с присоединением заявки М С 01 И 33/48 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий"г ,щ;ИЯИ 1" с 71) Заявитель Научный центр биологических исследов АН Азербайджанской ССР) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ Г В БЕЛКАХида 2 я - оп рупп в водят 2ысушиваю Изобретение относится к биофизике и может быть использовано при изучения физико-химических и механических свойств нерастворимых в воде белков, например фиброина, кератина и других белков, имеющих аналогичную структуРу.Известен способ определения сульф"- гидрильных групп в белках, при осуществлении которого в водную среду, содержащую белок, добавляют спинме- . ченный иодацетамид, полученную смесь инкубируют, затем спинбелковый комплекс очищают от свободной метки методом диализа и определяют сульфгидрильные группы методом электронного парамагнитного резонанса 1).Недостатком данного спЬсоба является невозможность определения им сульфгидрильной группы в нерастворимых в воде белках.Цель изобретени ределение сульфгидрильных г водонерастворимых белках.Поставленная ц ль достигается тем, что согласно способу определения сульфгидрильных групп в белках путем добавления в водную среду, содержащую белок, спинмеченного подацетамида с последующим инкубированием полученной смеси, очисткой спинбелкового комплекса от свободной метки и определения сульфгидрильныхгрупп методом электронного парамагнитного резонанса, в водную среду дополнительно вносят 5-10 мкл этилового спирта, в очистку спинбелковогокомплекса от свободной метки прово дят промыванием в 10-30 мл дистиллированной воды, а затем в 5-10 млэтилового спирта,Способ осуществляют следующим образом.5 мл воды вводят 10 мг выделениз шелковой нити фиброинаЗаобавляют 10 мкл спиртовогоора спинмеченного иодацетамДобавлением ИаОН доводятрН = 9. Затем проводят инкубированйев течение 15 мин в стеклянной пробирке. Удалив Гфиброин из пробиркипромывают его в объеме 10 мл дистиллированной воды, Промывание повторяют 3 раза. Затем в течение30 мин фиброин высушивают при температуре воздуха 20 С. Высушенный фиброин вводят в 5 мл спирта и промывают от свободной метки. Промываниеспирте про раза. Затем фибин вновь в т в течение951119 Составитель Л.СоловьевТехред Ж, Кастелевич Корректор Н.Король Редактор А,Гулько Заказ 5933/46 Тираж 887 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г Ужгород, ул, Проектная, 4 10 мин при 20 ОС. Полученный препаратфиброина содержит спиновые метки,которые ковалентно связываются сЯН-группами, Препарат вводится вкварцевую трубку для регистрациисигнала электронного парамагнитногорезонанса (ЭПР) на радиоспектрометреРЗ(СССР), Условия регистрациисигнала ЭПР: СВЧ мощность 10 м Вт,амплитуды ВЧ (100 кГц) модуляции3 Гс, развертка магнитного поля 102,5 Гс/мин, постоянная времениОфз су температура 20 ОС. При наличии сигнала ЭПР, связанного спинмеченного иодацетамида, можно судитьо наличии и, следовательно, о коли 15честве ЯН-группы в фиброине,Использование предлагаемогоспособа позволяет определить сульфгидрильную группу в водонерастворимых белках, например фиброине, что очень важно при определении их структуры, выяснении связи между структурой и механическими свойствами, а также при регуляции различных физико-химических и механических свойств белков. Формула изобретенияСпособ определения сульфгидрильных групп в белках путем добавленияв водную среду, содержащую белок,спинмеченного иодацетамида с последукщим инкубированием полученной смеси,очисткой спинбелкового комплекса отсвободной метки и определения сульфгидрильных групп методом электронного парамагнитного резонанса, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью определения сульфгидрильныхгрупп в водонерастворимых белках, вводную среду дополнительно вносят 510 мкл этилового спирта, а очисткуспинбелкового комплекса от свободнойметки проводят промыванием в 10-30 мцдистиллированной воды, а эагем в5-10 мл этилового спирта.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Игнатьева Л.Г., Серегина Т,М.,Блюменфельд Л,Ь., Рууге Э.К Ар"тюх Р.И., Постникова Т,Б, Исследование ферментативной активности миози"на методом спиновой метки, - "Биофизикаф, 1972, 17., 9 3, с. 533-536.