Способ получения уреазы, иммобилизованной на неорганических носителях

О П И С А Н И Е д 2 цвЗИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Соииалистических РеспубликК АВТОРСКОМУ ТЕЛЬ СТ ополнительное к авт. свид-вуаявлено 01.10.80 (21) 3212763/28-1 01 Х 31/ исоединением заявки Ме Государственный комитеБ. И. Кургаернобай и Мрдена Октяб кго Знаменисова и Науч прВитамииыаПоставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа получения уреазы, иммобилизованной на неорганических носителях путем последовательной обработки носителя 7-аминопропплтриэтоксисиланом, глутаровым альдегидом и затем раствором уреазы с последующим отделением и очисткой целевого продукта, отличительной особенностью является то, что в качестве носителя используют силохром или спликагель с диаметром пор от 600 до02000 азу семян а А, а в качестве уреазы - урербуза. соб осуществляют следующим о зом.Силохром илн макропористый силн гель обрабатывают кипячением в раств аминопропилтриэтоксисилана (у-АПТ в этиловом спирте илп нагреванием в створе АПТЭС в воде при 60 - 80"С. В вые соотношения у-АПТЭС и носителя ставляют 1: 5 - 1: 10. После промыва растворителем носитель обрабатывают створом глутарового альдегида в воде фосфатном буфере с рН 6,0 прн темпер ре 25 - 40 С. Весовые соотношения гл рового альдегида и носителя составл 1: 10 - 1: 20. Носитель промывают во и вводят в реакцию с уреазой семян а иммовность е на яют дой рбуяется увел иной уреа чение1. Изобретение относится к микробиологеской промышленности, а именно к полению иммобилизованных ферментов. Известен способ получения уреазы, иммобилизованной на неорганических носителях, при осуществлении которого 1 г поО ,ристого стекла с диаметром пор 550 А обрабатывают у-аминопропилтриэтоксисиланом кипячением в 5/, растворе в ацетоне, потом 0,5/о раствором глутарового альдегида в 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,0 при комнатной температуре, К 1 г модифицированного таким образом пористого стекла добавляют 1 мл раствора уреазы соевых бобов в 0,1 М фосфатном буфере. (Концентрация белка в растворе уреазы составляет 100 мг/мл). Иммобилизованный фермент промывают фосфатным буферным раствором и раствором хлористого натрия. Активность иммобилизованной уреазы составляет 1000 - 1200 ферментативных единиц на 1 г пористого стекла 1. Недостатком известного способа илизации является невысокая акт ммобилизованной уреазы в расч диннцу веса носителя,Целью изобретения явл ктивности иммобилизова125183 Формула изобретения Редактор Е. Зубиетова Тсхред А, Камышникова Корректор О. Тюрина Заказ 1654/17 Изд. Мо 244 Тираж 883 Подписное НПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 за. Реакцию проводят в фосфатном буферном растворе с рН 7,3, содержащем этилендиаминтетраацетат натрия (ЭДТА) прп 4 С в течение 40 часов. Весовые соотношения белка в растворе уреазы и носителя 5 составляют 1: 5 - 1: 10. После окончания реакции иммобилизованный фермент отделяют, промывают тем же раствором, в котором была приготовлена уреаза и определяют его активность. 10Пример 1, К 50 мг силохрома с удельной поверхностью 40 ма/г и среднимодиаметром пор 2000 А добавляют 1 мл 0,5% раствора у-АПТЭС в воде. Смесь нагревают до 60 - 80 С в течение трех часов. Силохром промывают пятикратной декантацией и смешивают с 0,5 мл 0,5/в раствора глутарового альдегида в 0,1 М фосфатном буфере с рН 6,0 и нагревают до 25 - 40 С в течение трех часов. После пятикратного промывания водой силохром вводят в реакцию с 8 мл уреазы семян арбуза в 0,1 М фосфатном буферном растворе с рН 7,3, содержащем 10 - з М ЭДТА, Концентрация белка в растворе уреазы составляет 1,0 мг/мл. Смесь выдерживают при 4 С в течение двух суток, после чего силохром отделяют, промывают тем же буферным раствором, в котором была приготовлена уреаза. Активность иммобилизованной уреазы составляла 3900 ферментативных единиц на 1 г влажного силохрома.Пример 2. К 50 мг силохрома с удельной поверхностью 74 м/г и среднимодиаметром пор 1000 А добавляют 10 мл 0,1% раствора 7-АПТЭС в этиловом спирте и смесь кипятят в колбе с обратным холодильником в течение трех часов, Силохром отделяют, промывают этиловым спиртом, 40 потом водой и смешивают с 1 мл 0,5% раствора глутарового альдегида в воде. Дале обработку проводят так же, как в примере 1. Активность иммобилизованной уреазы составляет 3400 ферментатпвных единиц на грамм влажного силохрома.П р и м е р 3. Им мобилизация уреазы семян арбуза на макропористом силикагеле с удельной поверхностью 70 мз/г и диаометром пор 600 А проводят так же, как в примере 1. Активность нммобнлнзованпой уреазы составляет 1900 фермептативных единиц на 1 г влажного силикагеля.Таким образом, способ позволяет получать препараты иммобилизова иной уреазы с активностью в 2 - 3 раза оольшей, чем в известном способе. Способ получения уреазы, иммобилизованной на неорганических носителях путем последовательной обработки носителя у-аминопропилтриэтоксисиланом, глутаровым альдегпдом и затем раствором уреазы с последующим отделением и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности иммобилизованной уреазы, в качестве носителя используют силохром или силикагель содиаметром пор от 600 до 2000 А, а в качестве уреазы - уреазу семян арбуза. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе