Способ получения корпускулярных препаратов,

. Е 397206 ОП И А Союз Советских Социалистицеских РеспубликЗависимое от авт. свидетельства11 27 01535/31-16) 4.1 Х.1971 аяв присоединением заявкириоритет Государственный кометеСовета Министров СССРПо делам изобретенийи открытий Опубликовано 17.Х,1973. Бюллетень3Дата опубликования описания 23.1.1974 ДК 615.45:615.771Авторы зобретени Л. Б. Меклер, Б, А, Клящицкий, А, В, Соколов,Л. Ф, Малышева и В. Х. Митина нститут экспериментальной и клинической онкологии АМН СССявител ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОРПУСКУЛЯРНЫХ ПРЕПАРАТО СОДЕРЖАЩИХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫ 1 НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫЙ КОМПОНЕНТтся к медицине, а екарственных пр Изо си именно к л епаратов.Известен способ получения корпускулярных препаратов, содержащих биологически активный низкомолекулярный компонент, например фолиевую кислоту, согласно которому фолиевую кислоту наносят на адсорбент, например активированный уголь,Однако по такому способу возможна десорбция активного вещества по мере движения корпускулы к месту действия в организме с одновременной неспецифической сорбцией биологичсски активных веществ, грисущих самому организму.С целью повышения избирательности действия целевого продукта в предлагаемом способе к биологически активному низкомолекулярному компоненту, например 6-меркаптопурину, добавляют вещество, обладающее функционально активными группами, способнымп связаться с биологически активным нпзкомолекулярным веществом и полимером-носителем, например глутатион и йод, с последующим добавлением полимера-носителя, например белка и глутарового альдегпда, до пслучения частиц размером 0,1 - 1 лгк.П р и м е р 1. Получение корпускулярных препаратов на основе бычьего альбумина и 6-меркаптопурина. Синтез проводят по известному методу, исходя пз ипозина, Общий выход в расчете на инозин 50 огго, т, пл, 211 в 2 С.Найдено, 7 о: Х 19,48; Ь 11,36.5 СгоН,.0,5Вычислено, ого: Х 19,7; Ь 11,28.К раствору 56,8 мг рибозида 6-меркаптопурина в 4 м.г О,1 М натрий-фосфатного буферного раствора рН 7,5 добавляют 1 мг 0,5 М 10 раствора периодата натрия, смесь перемешивают 30 лгин, дооавляют 0,3 мл 1 М раствора этиленгликоля и перемешивают еще 5 мцн.Затем рсакционну ю смесь добавляют прог перемешивании к раствору 268 мг бычьего 15 альбумина в 7,цл дистиллированной воды,поддерживая рН смеси на уровне 8,0 - 9,0 с помощью 5 ого-ного раствора углекислого калия, Перемешиванне продолжают 45 лгггн при рН 9,0 и добавляют раствор 150 лгг борпид рида натрия в 5 мл дистиллированной воды.Реакционную смесь оставляют на 18 час пре 1 20 С и рН 9,0 - 9,5 и затем наносят на колонку с сефадексом Г, уравновешенную 0,01 М натрпй-фосфатным буферным раствором рН 25 7,0, для отделения белка от низкомолекулярных компонентов. Выделяют белковую фракцию (приблизительно 30 лгл). По данным УФ-спектроскопии и определения содержания азота по методу Кьельдаля эта фракция яв ляется конъюгатом бычьего альбумина сРедактор Л, Гончарова Корректор В Жолудева Заказ 371773 Изд. л 1 в 26 Тираж 647 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж.35, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 36-меркаптопурином (Хманс 314 нм и 280 км), содержащем 18 молей меркаптопурина па 1 моль альбумина.30 мл полученного раствора конъюгата концентрируют до 10 мл и затем при 0 С добавляют 1 мл 25% -ного раствора глутарового альдегида в дистиллированной воде, Реакционную смесь перемешивают 40 мин при 0 С л вводят в колонку с сефадексом Г, уравновешенную 0,14 М натрий-фосфатным буферным раствором рН 7,5, для отделения корпускул и неконцентрированного белка от глутарового альдегида. Фракцию, содержащую макромолекулы, подвергают гель-фильтрации на колонке из сефарозы 2 В, уравновешенной тем же буферным раствором, и выделяют три фракции корпускулярных препаратов с размерами частиц: 0,1 - 1 мк (выход 10% );0,1 - 0,05 мк, (выход 60%) и менее 0,05,ик (выход 30%), Размер частиц определяют по кривой элюции корпускул из калиброванной (с целью определения молекулярного веса) колонки с сефарозой 2 В.Аналогично получают корпускулярные препараты на основе яичного или бычьего аль,буминов с инозином, уридином, азауридином и аденозинмонофоофатом,,Пр и м е р 2. Получение корпускулярных препаратов на основе яичного альбумина и смешанного дисульфида 6-меркаптопурина и глутати она.248 мл 6-меркаптопурина растворяют при 45 С вО мл 0,01 М однозамещенного фосфата нацрия, доведенного с помощью 5,0 М КаОН до рН 11,8. Раствор охлаждают до 30 С и добавляют за 2,чин при перемешивании восстановленный глутатион и по каплям раствор йода (3,5 мл 0,2 н). По окончании добавления раствора йода смесь подкисляют 85%-ной фосфорной кислотой до рН 5,0 и затем добавляют 100 мг восстановленного глутатиона для восстановления выделившегося йода, после чего вновь подкисляют смесь до рН 5,0 с помощью 85%-ной фосфорной кислоты. Реакционную смесь фильтруют, .фильтрат вводят в колонку с биогелем Р, уравновешенную 0,01 М натрийчфосфатным буферным раствором рН 5,0. Элюцию ведут тем же буферным раствором прои 4 С. Фракции, содержащие дисульфид меркаптопурина и глутапиона, лиофилизируют, остаток растворяют в 0,01 М натрийчфосфатном буферном растворе рН 3,0 при 4 С, осадок отделяют и ".одержание смешанного дпсульфида в растворе определяют с помощью УФ-спектроскопии (лкс 280 нм) . Содержание глутатиона в дисульфпде определяют при помощи,реакции с нингидрином, Найдено, что весовое содержание глутатиона в дисульфиде составляет 65/о (теоретическое значение 67/о). Выход дисульфида 25% (в расчете на 6-меркаптопурин).К перемешиваемому и охлажденному до 2 С раствору 100 яг белка в 5 мл 0,01 М натрий-фосфатного буферного раствора (рН 7,0) добавляют раствор 47 мг 6-меркаптопуринилглутатионилдисульфида в 4 л,г того же буфера и 0,5 м,г 25%-ного, раствора глутарового альдегида, через 35 - 40 ниц реакционную смесь вводят в колонку с сефадексом Гдля отделения от глутарового альдепида, а затем белковую фракцию пропускают через колонку с сефарозой 2 В, Выделение фракций корпускул проводят, как описано в примере 1. Для определения количества 6-меркаптопурпна в полученных корпускулах их гидролизуют 0,2% раствором пепсина в 0,06 М соляной кислоте при 37 С в течение 16 час, затем доводят рН смеси до 8,0, добавляют 4 мг цистеина и выдерживают 30 мин; согласно данным УФ-спектра полученной смеси содержание 6-меркаптопурина (Хмакс 315 ям) В полученных корпускулах составляет 5 молей на 1 моль альбумина. Предмет изобретенияСпособ получения корпускулярных препаратов, содержащих биологически активный низкомолекулярный компонент путем нанесения последнего на посетитель, отличающийся тем, что, с целью повышения избирательности действия целевого продукта, к биологически активному низкомолекулярному компоненту, например 6-меркаптопурину, добавляют вещество, обладающее функционально активными пруппами, способными связаться с биологически активным низкомолекулярным веществом и полимером-носителем, например тлутатион и йод, с последующим добавлением полимера-носителя, например белка и глутарового альдепида, до получения частиц размером 0,1 - 1 мк.