Способ получения сорбента

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Сеюз Советскнх Соцналнстнческнх РеспубанкК АВТОРСКОМУ СВИ ЕТИЛЬСТВУс присоединением заявки Йо Государственный комитет СССР по делам изобретений н открытий(23) Приоритет Опубликовано 300781,Бюллетень Мо 28 Дата опубликования описания 300781,Р 2) Авторы изобретения А.В.Киселев, В.М,Коликов Б. В,Мчедлишвили, Институт полиомиелита и в Московский государственны и Ленинградский ордена Ле С( СР,мон осева ,.,тн ТУт итовм, М.еский ирусных й униве нина по М,И.Кал нцеф итет техн нина(54 СПОС РББН ОЛУЧЕ Способ получения сорбента осуществляют следующим образом.Аминокремнеэем смешивают с воднымраствором глицеринового альдегида в1/15 М фосфатном буФере с рН 6-7.Суспензию встряхивают при 40 оС 2-3 ч,затем проьвюваот дистиллированной водой, добавляют 1/15 М Фосфатной буферс рН 6-7, обрабатывают порошком боргидрида натрия и перемешивают прикомнатной температуре в течение 1 ч.Полученный сорбент проьивают дистиллированной водой, загружают в хроматографическую колонку и уравновешивают буфером; Суспенэию, содержащую вирус, вносят иколонку и элюируют темже буФером,П р и м е р 1. Для приготовленияглицеросилохрома Сдля очистки суспензии вируса клещевого энцефалита.к 5.мл силохрому Сс удельной поверхностью 74 мг, удельным объемомпор 1 75 смог, средним диаметром пор1000 .А добавляют 10 мл 9-ного раствора 3-аминопропилтриэтоксисилана вэтанале, Суспензию кипятят в течение3 ч, затем проламывают этанолом. Количество аминогрупп на полученном аминокремнеземе составляет 0,55 ммоль/г. Изобр получени русных п зовано д ки вирус белков обу вииспо чист ных пос тки тение относится к ссорбентов для очисепаратов и может бытья хроматографическойых суспензий от приме Известен способта путем обработкикремнезема модифициЦ.Наиболее близкимпо технической сущиму результату являения сорбента путемности аминокремнезером глутароваго альдраствором белка 2) получения сорбенповерхности аминорующими агентами к предлагаемомусти и достигаемося способ получебработки поверка сначала раствоегида, а затем тем, обма и- гидерин идам К недостаткам известного способаотносятся низкая стабильность сорбента и адсорбция им прнмесных белков,Цель изобретения - придание сорбенту инертности по отношению к белку и повышение еГо стабильности,Поставленная цель достигаетсячто в способе получения сарбентаработку поверхности амннокремнезеведут сначала. водным раствором глц оного альдегида, а затем борр натрия,И.В.Красильников, ЮНикитмн,-Т.Д.Хохлова и Л.Б.Эльферт850203 Формула изобретения Составитель Н, СтрогановаТехред М,Голинка Корректор М, Пожо Редактор Л. Филь Заказ 6183/9 Тираж 567 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035 Москва, Ж 35, Раушская наб д, 4/5Филиал ППП Патент., г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Аминосилохром промывают дистиллированной водой, обрабатывают 5 мл10-ного водного раствора глицеринового альдегида в 1/15 М фосфатном бу"фере с рН 6,3 при 40 оС в течение 3 ч.Осадок промывают дистиллированной водой, затем 1/15 М фосфатным буфером5с рй 7, добавляют 200 мг порошка боргидрида натрия, встряхивают при комнатной температуре в течение 1 ч иснова промывают дистиллированной водой. Этим сорбентом заполняют хроматографическую колонку 0,5 х 10 см иуравновешивают 0,1 м трис-буфером с0,16 М НоСВ с рН 7,8. Затем в колонку вводят 0,1-1,0 мл суспензии вирусаклещевого энцефалита, и элюируют вирус тем же буфером, Во 2-3 мл элюатавыходит до 90 очищенного вируса,Белковые примеси элюируются из колонки в 3-4 мп элюата Выход белковполный. 20П р и м е р 2, Для приготовленияглицеростекла для очистки суспензийвируса клещевого энцефалита к 6 млмакропористого стекла МПСДО В-ГХс удельной поверхностью 50 м 7 г, удель ным объемм пор 1,34 см/г, диаметромЬпор 1100 добавляют 10 мл 6-ногораствора 3- аминопропилтризтоксисиланав этаноле, смесь нагревают до50-700 С в течение 3 ч, а затем промывают дистиллированной водой, Коли"чество аминогрупп яа поверхности сорбента 0,13 ммоль/г.Аминированное пористое стекло сме"шивают (после промывки дистиллированной водой) с 6-10 М 5-ного водного З 5раствора глицеринового альдегида в1/15 М фосфатном буфере с рН 6,3 инагревают при 40 С в течение,3 ч.Осадок промывают дистиллированной водой, затем 1/15 М фосфатным буфером, 40добавляют 100 мг порошка боргидриданатрия и встряхивают при комнатнойтемпературе в течение 1 ч, а затемснова промывают дистиллированной во-,дой,45Полученным глицеростеклом заполняют хроматографическую колонку 0,8 х х 12 см, уравновешивают 0,2 М трисбуфером с 0,15 М йоИ с рй 7,6. В колонку вводят 0,5"1,0 мл суспензии вируса клещевого энцефалита и элюируютвирус тем же буфером. Очищенный вирусполностью выходит после 2,5 мл элюата в объеме 1-1,5 мл. Примесные белки выходят полностью на 5-6 мл злюата.В ходе предлагаемого в примерахпроцесса жидкостно-ситовой хромато"графии вирус клещевого энцефалитаочищается от примесных белков на99,6-99,7, При использовании сорбента, получеййого по известному способу, выход белков в первых опытах составляет 40-50, в последующих 70,Через 20 дней работы выход вируса изхроматографической колонки с известным аминокремнеземом снижается до60-70, а из колонок с предлагаемымсорбентом выход вируса остается полным,Таким образом, использование пред-,лагаемого способа получения сорбентапозволяет получить стабильный сорбент,не адсорбирующий примесные белки вирусных суспензий. Способ получения сорбента для очистки вирусных препаратов путем обработки поверхности аминокремнеэема модифицирующими агентами, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью придания сорбенту инертности по отношению к белку и повышения его стабильности, обработку ведут сначала водным раствором глицеринового альдеги- . да, а затем боргидридом натрия. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1.Авторское свидетельство СССРР 651814, кл. А 61 К 47/00, 19772.Авторское свидетельство СССР позаявке М 2461698/26, кл, В 01 Ю 1/22,1977 (прототип).