Способ удаления тритильных защитныхгрупп c производных нуклеозидов, нуклеотидов и олигонуклеотидов

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советсхих Социалистических Реслублик(43) Опубликова 0,03,82. Бюллетень Ме 12 47.455.07088.8) лам изобретений открыт 5) Дата опубликования описания 30.03.82(54) СПОСОБ УДАЛЕНИЯ ТРИТИЛЬНЫХ ЗАЩИТНЫХ ГРУПП С ПРОИЗВОДНЫХ НУКЛЕОЗИДОВ,КЛЕОТИДОВ И ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВНУ Изооретение относится к усовершенствованному способу удаления тритильных защитных групп с производных нуклеозидов, нуклеотидов и олигонуклеотидов и может быть использовано, например, в области химического синтеза фрагментов нуклеиновым кислот.Тритильные группы щироко применяются для временной защиты первичных спиртовых групп в нуклеозидах, нуклеотидах и их производных с целью предотвращения побочных реакций по указанным спиртовым группам в процессе синтеза олигонуклвотидов. Известен способ удаления тритнльной защитной группы действием 80%-ного водного раствора уксусной кислоты,в пиридине при температуре кипения в течение 5 - 10 мин 1"11,Тритильные защитные группы удаляют также действием 1% раствора трифторуксуоной кислоты в хлористом метилвне при температуре 0 С в твчвние 20 мии при дальнейшей нейтрализации пирйдином, упаривании,и выделении продукта хроматографическим путем 121.Известен также способ удаления тритилсодержащих защитных црулп действием 80 о/о-ной уксусной кислоты цри комнатной температуре,в течение 14 ч для тритильной, 2 ч для монометокситритильной и 15 мин для диметокситритильной групп 131,В процессе перечисленных выше обработок происходит значительная деградация (апуринизация) нуклеозидов, ,нуклеотидов и олигонухлеотидав,Наиболее близким к предлагаемому по достигаемому положительному эффекту является способ удаления тритильных защитных прупп с производных нуклеозидов, нуклеотидов и олигонуклеотидав путем обработки последних бензолсульфокислотой при температуре 0 С в течение 20 мин. Реакцию осуществляют в смеси хлороформа со опнртом. Полученную смесь хроматографируют яа силикагеле, а очищенный продукт из раствора, высаживают в инертный,растворитель. Конечный выход продукта 80 - 90 о/о ЩНедостатком данного способа также является деградация производных нуклеозидов, нуклеотодов и олнгонуклеотидов, которая приводит к уменьшению выхода целевого продукта, а необходимость выделения целевого продукта методами адсорбционной хроматографии увеличивает продолжительность синтеза ва 2 - 3 ч.Цель изобретения - увеличение, выхода целевого продукта за счет устранения деградации производных нуклеозидов, нукле 82867125 зо 35 50 60 65 отидов и олигонуклеотидов и упрощение процесса,Поставленная цель достигается описываемым способом удаления тритильных защитных групп с производных нуклеозидов, нуклеотидов и олигонуклеотидов, который заключается в том, что тритил-, моно- и диметокситритильные производные нуклеозидов, нуклеотидов и олигонуклеоти сов в инертном органическом растворителе, например, в хлороформе обрабатывают трихлоруксусной кислотой при комнатной температуре с последующим высаживанием продукта, В качестве осадителя можно использовать непредельные углеводороды и их смеси с бензолом или эфиром. Пр,и м е р 1. Синтез У-бензоил, 3-О- бензоилдезоксиаденозина.К раствору 730 мг 5-монометокситритил, Л-бензоил, 3-О-бензоилдезоксиаденозина в 10 мл хлороформа добавляют 1 г трихлоруксусной кислоты, выдерживают раствор 10 мин при комнатной температуре, промывают 2 мл насыщенного раствора КНСОв, затем водой, сушат органический слой безводным сульфатом натрия и прикапывают его к 150 - 200 мл смеси гексан-бензол (8: 2 по объему). Осадок отделяют, промывают 20 - 30 мл смеси гексан-бензол и высушивают в вакууме, Выход хроматографически чистого продукта 415 - 430 мг, что составляет 90 - 94% в расчете на (МеО) Тп 1 А " (ОВг) . Продукт анализир; ют методом тоси кослойной хроматографии на силикателе в системе хлороформ-этанол (в соотношении 9: 1). И продукта 1,07 (относительно И(МеО) Тгс 1 Т).П р и м е р 2. Синтез Ж-бензоилдезоксиаденозин- (п-хлорфенил) (цианэтил) фосфата.К раствору 850 мг 5-диметокситритил, Х-бензоил дезоксиаденозин-(п-хлорфенил) (цианэтил) фосфата 1(МеО) ТгсСв р (С 1 РЬ) (СЕ) в 5 мл хлороформа добавляют 5 мл 4%-ного раствора трихлоруксусной кислоты в хлороформе, выдерживают расввор при комнатной температуре 5 мин, затем промывают последовательно 0,1 М ХННСОз и водой. Раствор сушат безводным сульфатом, натрия и приеапывают его к 200 мл смеси гексан-эфир (9: 1 по объему). Осадочек отделяют центрифугированием и высушивают в вакууме. Выход хроматографичсски чистого продукта составляет 540 - 550 мг, что составляет 94 - 96% в расчете на (МеО) Тгс 1 С в р (СРЬ) (СЕ).Продукт анализснруют методом тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе хлороформ-этанол (в соотношении 9: 1) И продукта 0,80 (относительно И (МеО) ТгдТ) . П р и м е р 3, Синтез 4-М-бензоил-ихлорфенилдезоксицитидплил- (3 - 5) -6-Убензоил-О-ацетилдезоксиаденозина (дС" р(СРЬ) А" (ОАс).К раствору 120 мг 5-тритил-К-бензоилп-хлорфенил-дезоксицитидилил - (3 - :- 5) .6. Л 7-бензоил-О - ацетилдезоксиаденозина в 10 мл диоксана добавляют 1 мл 50%ного раствора трихлоруксусной кислоты в мети- ловом спирте, выдерживают раствор при комнатной температуре 20 мин и,прикапывают сго к 70 мл гексана. Осадок отделяют, промывают 20 - 40 мл смеси гексанэфир н,высушивают в вакууме. Выход хроматографически чистого продукта 90 мг, что составляет 98% в расчете на ТгдС р (С 1 РЬ) А " (ОАс). Продукт анализируют методом тонкослойной хроматографиями на силикагеле в системе хлороформ-этанол (в соотношении 9; 1) И,продукта 0,74 (относительпо И(МеО)ТгдТ). Формула изобретения 1. Способ удаления тритильных защитных групп с .производных нуклеозидов, нуклеопилов и олигонуклеотидов путем обработки тритил-, моно- и диметокситритильных произвольных нуклеозидов, нуклеотидов и олигонуклеотидов в инертном органическом растворителе детритилируюшим агентом с последующим высаживанием продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и упрощения процесса, в качестве детритилируюшего агента используют трихлоруксусную кислоту и процесс осуществляют при комнатной температуре,2. Способ по п. 1, отл ич а ю щийс я тем, что в качестве инертного органического растворителя иепользуют хлороформ.3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что высаживание осуществляют непредельными углеводородами,или их смесями с бензолом или эфиром. Источноки информации, принятые вовнимание при экспертизе: 1. Кеппег б. %., ТосЫ А, Р., ЮеЬЬ Р, Р,апд Юеугпоп 1 Ь Р. Л, Кпсео 11 дез, РагХХЛ 11 а Яуп(Ьезз о 1 1.1 гдпе, ТпрЬоврЬа 1 е (ИТР) Л, СЬегп, 5 ос. 1954, 2288.2. Са 11 п 1. С. Сгагпег Р Ьупйезз о 1цг 1 д 1 пе,1. Огд. СЬегп, 38 (2), 245 - 253,1973,3. М. Ягп 1 п, О, Н. КагппЬег, 1. Н, бо 1 дЬегд апд Н, 6., КЬогапа Яцдеэ оп Ро 1 уппссо 1 ссз, Х 1 Ч, прес 1 с зупйез 1 э о 1 Йе Св -С;, п 1 ег-геЬоппс 1 ео 1 Ые к 1 п 1 саде Л, Агп.СЬегп. Яос. 84, 430, 1962.4, ЯаМпз 1 су 1., Ногпгп Т Кагапде Ь. А.,ВаЬ 1 Ь С. Р., Фц 1 с. Ьппйезез о 1 1.1 гду 1 у 1 -