Способ получения циклического тетрадекапептида или его солей

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯ ЗО 295 Союз Советских Социалистических Республик) Заявлено 2004,78(21) 2607708/23-04 3) Приорит1) 789472 2104.77 07 С 103/5//61 К 37/02 Государственный комит СССР по делам изобретений и открытийпубликовано 250480. Бюллетень,% 1 ата опубликования описания 2804.80 Иностранецеймс Эдвин ШилСША)(72) Автор изобретения Иностранная и Лилли энд) Заявите Б ПОЛУЧЕНИЯ ЦИКЛИЧЕСКОГО ТЕТРАДЕ КАПЕ П ИЛИ ЕГО СОЛЕЙ 4) о Ергают в агентом, роме того модействию с окисляю но ци в качестве окисляющельзуют кислород воздугента . ис о еРг же. ч Изобретение от сится к способу получения нового клического.тетоа - декапептида формулы Н-О-Вал-Гли-Ц- -Цис-Ь-Лиз-Ь-Асп-Ь-Фен-Ь-Фен-Ь-Трп- -1,-Лиз-Тре- Ь-Фен-Ь-Тре-Ь -Сер-)4- 5 -Цис-ОН (Д-Вал -соматостатина) или Его солей - биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицинеИзвестен способ замыкания дисульфидного мостика между двумя сульфигидрильными группами, присутствующих в молекуле полипептида цистеинов путем окисления кислородом воздуха, "широко использующийся в пептидной химии 11,1Цель изобретения - получение нового циклического тетрадекапептида или его солей, обладающих интересными фармакологическими свойствами.Это достигается известным способом получения циклического тетрадекапептида формулы 1: Н-Э-Вал-Ь-Гли-) -Цис-Ь-Лиз-) -Асп-Ь-Фен-Ь-Фен-Ь -а -ТРп,-Лиз-) -Тре-Ь-Фен-Ь-Тре,-Сер-)-Цис-ОН или его солей, заключающийся в том, что соответствующий прямоцепочечный тетрадекапептид формулы П: Н)-Вал-Гли.-Цис- -Лиз-Ь-Асп,-Фен- -Фен- -Трп-Лиэ-Ь-Тре-Ь в Ф-) - Тре-)-Сер-Ь-Цис- ОН Для получения продукта формулы 1 тетрадекапептид с линейной цепью обрабатывают в условиях, которые вызывают его окисление, путем превращения двух сульфгидрильных групп, присутствующих в молекуле по одной у каждой цистеинильной половины, в дисульфидный мостик, Это может быть осуществлено путем обработки разбавленного раствора линейного тетрадекапептида любым из разнообразных окисляющих агентов, включая, наприм йод и ферроцианид калия. Воздух так может применяться в качестве окисляющего агента, рН смеси при этом обычно от 2,5 до 9,0 и предпочтительнее от 7,0 до 7,6Когда в качестве окисляющего агента применяют воздух, то концентрация раствора пептида составляет обычно не более 0,4 мг пептида на миллилитр раствора и обычно около 50 мг/мл,си Фармацевтически приемлемые неток аддитивные кислотные соли вклют соли органических и неооганиче730295 Формула изобретения Составитель В.Волкова Редактор С,Суркова Техред И,Асталош Корректор В.БутягаЗаказ 1345/57 Тираж 495 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб.,д,4/5Филиал ППП Патент, г,ужгород, ул.Проектная,4 ких кислот, например, хлористоводородной, серной, сульфоновой, винной, фумаровой, бромистоводородной, гликолевой, лимонной, малеиновой, фосфорнойГ янтарной, уксусной, азотной бензойной, аскорбиновой, пара-толуолсульфоновой, сульфобензоловой, сульфонафталиновой и пропионовой. Предпочтительнее аддитивные соли, получаемые из уксусной кислоты. Любая из перечисленных солей" может быть получена обычным методом.10П р и м е р, Окисление в Д-Вал-соматостатин.Раствор восстановленного Д-Вал -соматостатина (374 мл, теоретически 175 мг) разбавляют 147 мл 0,2 М уксус ной кислоты и 2967 мл дистиллированной воды для достижения концентрации 50 мкг/мл, Для доведения рН смеси до 6,7 добавляют концентрированную гидроокись аммония, Раствор переме шивают при комнатной температуре в темноте 64 ч, Титрованием по Эллману показывают окончание окисления.Смесь концентрируют в вакууме до 10 мл. Концентрат разбавляют 10 мл ледяной уксусной кислоты и обессоливают, пропуская через колонку с Сефадесом СГ (размеры колонки 5,0 х 90 см); продукт элюируют при температуре 26 С дегаэированной 50-ной уксусной кислотой, скорость элюирования: 246 мл/ч, объем собираемых фракций - 16,4 мл, За ходом очистки следят по поглощению фракций при 280 мкм, Фракции РУ 49-64 (787- 1050 мл) собирают, лиофилизуют в темноте, Сухой продукт растворяют в 15 мл дегазированной 0,2 М уксусной кислоты и раствор помещают в колонку с сефадексом Сг. Хроматографирование ведут в следующих условиях: раст воритель - дегазирования 0,2 М уксусная кислота, температура 26 С, скорость потока 475 мл/ч, объем собираемых фракций - 16,6 мл, размер колонки 5,0 х 150 см, За ходом хрома с тографии следят слектрофэтометрически при 280 ммк. Собирают фракции РУ 157-172 (2590-2855 мл), пик 2667 и 280 ммк, объединенные фракции лиофилизуют досуха в темноте, Методом ультрафиолетовой спектроскопии показано присутствие в сухой массе 95 мт продуКта (выход из восстановленной формы 54,3).Полученный продуктрастворяют55 в 5 мя 50-ной уксусной кислоты и вновь хроматографируют в колонке ссефадексом Сг, В следующих условиях; дегаэированная 50-ная уксусная кислота, температура 26 С, скорость потока 53,2 мл/ч, объем фракций 8, 87 мл, размеры колонки2,5 х 180 см.Мера поглощения света при 280 ммккаждой фракции, нанесенная в зависимости от номера фракции, показываетна кривой один большой пик. ФракцииРР 58-60 (488-532 мл), пик 505 при280 ммк объединяют, лиофилиэуют в темноте досуха,26 оПолучают продукт с (- -42,1(с=1%, в уксусной кислоте), аминокислотный анализ: 0,98 Вал, 1,1 2 Цис,1,81 2 Лиз, 0,95 Асп, 2,94 3 Фен,0,80 Трп, 1,91 2 Тре 0,85 Сер. Отношение (Гли+Лиэ):3=1.Проведены следующие три 21 часовых гидролиэа:1) в присутствии диметилсульфоксида для окисления цистеина в цистеиновую кислоту;2) удаление тиогликолевой кислоты3) без удаления или окисления Все полученные величины - средние значения трех гидролиэов, за исключением следующих: Цис и Сер только 1/ и 2/; Трп только 2/, Фен только 2/ и 3/,1. Способ получения циклического тетрадекапептида формулы 1; И-Э-Вал-Гли-) -Цис-Ь-Лиз- Ь-Асп-)4-Фен-)-Фен-) -Трп-( -Лиз-) -Тре-Ь-Фен.-Тре-Ь-Сер-Ь-Цис - ОН или его солей, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что соответствующий прямоцепочечный тетрадекапептид формулы П; Н-Э-Вал-Гли,-Цис-Ь - -Лиэ-Асп-(.-фен-Фен-ТРп,-Лиз- -1.-Тре-Ь -Фен-Ь-Тре-Ь-Сер-Ь-Цис-ОН подвергают взаимодействию с окисляющим агентом,2. Способ по п,1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестве окисляющего агента используют кислород воздуха. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1, Шредер Э, и Любке К. Пептиды,ч 1, М 1 Мир, 1967, с 350,