Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты

р 1 1644484 Союэ Советских Социалистических Республик(43) Опубликовано 30,01.79. Бюллетень4 (45) Дата опубликования описания 30,01.79 сударстеенныи комитет вета Министров СССР 53) УДК 615 А 5:(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯОКСИРИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ ии побыть ен ного аболек технолНК и моиве лекарстнекоторых Изобретение относится оглучения препаратов Д тетиспользовано в качест впрепарата при лечении знаний. 5Известен способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты путем экстракции из животного сырья с последующим лиофильным высушиванием полученного экстракта 11. 1 ООднако известный способ не обеспечивает получения быстрорастворимого препарата, сохраняющего нативные свойства исходной дезоксирибонуклеиновой кислоты в процессе хранения, 15Целью изобретения является получение быстрорастворимого препарата, сохраняющего нативные свойства исходной дезоксирибонуклеиновой кислоты в процессе хранения. 20Это достигается тем, что экстракт подвергают пристеночному замораживанию с толщиной слоя 8,0 - 10,0 мм при температуре от 0 С до - 40 С и лиофилизируют втечение 38 - 40 ч при равномерном повыше нии температуры от - 20 до +20 С.П р и м е р 1. 50 г замороженной зобной железы теленка мелко нарезают и гомогенизируют при 8000 об/мин в 10 объемах стандартного цитратно-солевого раствора 3(ССЦ) с рН 7,2 в гомогенизаторе Поттера. Центрифугируют 10 мин при 2,5 тыс. об/мин на рефрежераторной центрифуге. Надосадок сливают, а процедуру отмывки осадка ядер повторяют трижды,К осадку добавляют в соотношении 1: 20 по объему раствор ССЦ и додецилсульфат натрия (5 РБ) до концентрации 1% и ставят на депротеинизацию на качалку на 3 ч. После этого добавляют смесь хлороформ+изоамиловый спирт (в соотношении 10: 1) и депротеинизацию продолжают еще 30 мин, Затем центрифугируют и осаждают в 2-х объемах охлажденного спирта.Часть ДНК растворяют в 0,14 М раствора КаС 1 и проводят полную физико-химическую идентификацию. Если основные параметры соответствуют требованиям, всю ДНК растворяют в растворе ССЦ с рН 7,2 и ионной силой 0,01 с концентрацией 2 мг/мл, разливают в стерильные мерные флаконы объемом 500 мл, ставят в вертикальный замораживатель для пристеночного замораживания при - 40 С на 10 мин и переносят в кассету, охлажденную до - 20 С для лиофилизации при заданном режиме: от - 20 до +20 С в течение 38 - 40 ч.После высушивания препарат ДНК снова подвергают физико-химической идентиРедактор Г. Лановая Заказ 2647/13 Изд.146 Тираж 680 Подписное НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 фикацип и сравнивают с исходными результатами. Указанный режим обеспечивает полную сохранность исходных свойств препаратов ДНК. Так например, молекулярный вес (полимерность) ДНК уменьшается на 25 - 30%, параметры, отражающие состояние вторичной структуры биополимера, т, е. нативность системы водородных связей, остаются почти неизменными.П р и м е р 2, Получают ДНК как в примере 1. Раствор ДНК разливают в стерильные флаконы объемом 100 мл в количестве 30 мл, обеспечивающем толщину пристеночного слоя 8 - 10 мм. Режим лиофилизации от - 20 до +20 С в течение 38 - 40 ч. При данных условиях обеспечивается почти полная сохранность исходных свойств первичной и вторичной структур препарата ДНК. Так, молекулярный вес (полимерность) ДНК составлял 20 - 21 млн,П р и м е р 3. Получают ДНК как в примере 1. Раствор ДНК разливают в стерильные флаконы объемОм 50 мл В количестве 15 мл, обеспечивающем толщину пристеночного слоя 8 - 10 мм. Режим лиофилизации от - 20 до +20 С в течение 38 - 40 ч.физико-химические свойства препарата ДНК:молекулярный вес колеблется в пределах 20 - 22 млн,П р и мер 4. Получают ДНК как в примере 1. Раствор ДНК разливают в стерильные флаконы объемом 100 мл в количестве 15 мл, обеспечивающем толщину пристеночного слоя 5 - 6 мм. Режим лиофилизации от - 20 до +20 С в течение 38 - 40 ч. Используемая толщина пристеночного слоя приводит к резкому снижению полпмерпости (от 25 до 4 - 5 млн.).П р и м е р 5. Получают ДНК как в примере 1. Раствор ДНК разливают в стериль ные флаконы объемом 100 мл в количестве40 - 50 мл, обеспечивающем толщину пристеночного слоя 12 мм и более. Режим лиофилизации от - 20 С до +20 С в течение 38 - 40 ч, Используемая толщина присте ночного слоя не обеспечивает полного высыхания слоя ДНК. Физико-химические свойства ДНК остаются исходными, но такой препарат не пригоден для хранения.Предлагаемый способ обеспечивает полу чение быстрорастворимого препарата, сохраняющего нативные свойства исходной дезоксирибонуклеиновой кислоты в процессе хранения. Формул а изобретенияСпособ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты путем экстракции из животного сырья с последующим лиофильным высушиванием полученного экстракта, о тл и 25 ч а ю щи йс я тем, что, с целью получениябыстрорастворимого препарата, сохраняющего нативные свойства исходной дезоксирибонуклеиновой кислоты в процессе хранения, экстракт подвергают пристеночному30 замораживанию с толщиной слоя 8,0 -10,0 мм при температуре от 0 С до - 40 Си лиофилизируют в течение 38 - 40 ч приравномерном повышении температуры от- 20 до +20 С.35 Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Каталог Яега 1 е)пЫосйегпса, 1975 г.,с. 51, Мв 18560,