Способ определения внутриклеточной локализации рибонуклеаз

Номер патента: 274311

Автор: Глузман

ZIP архив

Текст

2743 Н ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт. свидетельства223448Заявлено 20. 1/.1969 (М 1331203/31-16) Кл. ЗОЬ, 14 МПК 6 01 п 1/30ДК 611-018(088,8 Комитет по делам зобретений и открытий при Совете Министров СССРриоритетпубликовано 24.71.1970. Бюллетень21 ния 14.1 Х.1970 а опубликования оп Авторизобретения Д. Ф, Глузма"ь, :.".7 ЕчА явитель СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВНУТРИКЛЕТОЧН ЛОКАЛИЗАЦИИ РИБОНУКЛЕАЗ евая соль) рис-соляно,4 М растванную во азы инкубаидин- (2.3) - ,25 лил 0.2 М 25 лтл 0 4 М лированную с присоединением заявки В основноем авт. св.223448 описан способ определения внутриклеточной локализации рибэнуклеаз, заключающийся в том, что объект инкубируют в среде, содержащей субстрат исследуемого фермента (дро:кжевую РНК), лиофилизированный и диал 1 изированный змеиный яд в качестве экзогенной нуклеотидазы и растворимую соль свинца.Однако такой способ недостаточно точен, а время инкубации объекта довольно продолжительное, Предлагаемый способ отличается от известного тем, чпо в качестве субстрата используют циклический цитидин- (2,3) -фосфат.Это исключает первый этап гистохимической реакции - разрыв межнуклеотидных фосфодиэфирных связей, сокращает длительность инкубации объекта, тем самым уменьшая возмоиность диффузии промежуточных продуктов, и повышает точность локализации ферзтентативной активности, определяющую ценность гистохимического метода.Для определения виутриклеточной локализации рибонуклеаз по предлагаемому способу свежеприготовленные и высушеныые на воздухе мазки крови и костного мозга крыс фиксируют в парах 100/О-иого нейтрального формалина в течение 10 мин и помещают в инкубационную смесь. При выявлении щелочнои РНК-азы инкубационная смесь содержит 5 лтг цитидин- (2,3) -фосфата (бар 0,05 мг змеиного яда, 10 мг 0,2 М т кислого буфера (рН 7,5), 0,125 мг вора нитрата свинца и дистиллир 5 ду (до 25 лтл). При определенни кислой РНКционная смесь содержит 5 мг цит фосфата, 0,05 мг змеиного яда, 6 ацетатного буфера (рН 5,5), 0,1 10 раствора нитрата свинца и дистил воду (до 25 мл) .Мазки инкубируют в термостате при 37 Св течение 3 час прпт выявлении щелочной 15 РНК-азы и 8 час прои определении кислойРНК-азы. Затем мазки промывают дистилли 1 рованной водой и погружают на 2 мин в раз:веденный сульфид аммония. После промывки мазки сушат и микроскопируют. В процессе 20 обработки мазков внутриклеточные РНК-азывызывают гидролиз цитлдин- (2,3) -циклофосфата, содержащегося в инкубационной смеси.Образующиеся при этом нуклеозид-фосфаты специфически расщепляются нуклеотида зой, являющейся действующим началом двализированного и лиофилизированного змеиного яда, и остатки фосфорной кислоты связываются ионами свинца, Полученные соединения переводятся в сульфид свинца, который ЗО обнаруживается при микроскопировании. Яе274311 Составитель В, П. Казнин Корректор Л. А. Фирсова Редактор Л. Мутовкина Заказ 2561/6 Тираж 480 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 ста его отложения отражают локализациюрибонуклеазной активности. П р ед м ет и з о б р е теи и яСпособ Определения внутриклеточной локализации рибонуклеаз по авт. ав.223448,отличпющийся тем, что, с целью повышения точности локализации и соцрагцения орска инкубации, в качестве субстрата иапользуют циклический цитидин- (2,3) -фосфат.5

Смотреть

Заявка

1331203

Д. Ф. Глузман

МПК / Метки

МПК: G01N 1/30, G01N 21/01

Метки: внутриклеточной, локализации, рибонуклеаз

Опубликовано: 01.01.1970

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-274311-sposob-opredeleniya-vnutrikletochnojj-lokalizacii-ribonukleaz.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения внутриклеточной локализации рибонуклеаз</a>

Похожие патенты