Штамм чумного микроба yersinia реsтis, используемый в качестве тест-объекта для определения строения и функции новой дополнительной плазмиды возбудителя чумы

(54) ШТАММ ЧУМНОГО МИКРОБАУЕЯЯЮА РЕЯТ 5. ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ ТЕСТ-ОБЬЕКТА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТРОЕНИЯ И ФУНКЦИИ НОВОЙДОПОЛНИТЕЛЬНОЙ ПЛАЗМИДЫ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ Изобретение относитсягии и может быть испольэоваской и научно-исследмикробиологии.Штамм чумного микроба Уегзп 1 а резбзАвыделен от блох большой песчанки, отловленной в 120 км северо-восточнее поселка Баканас, Штамм получают прямым по-.севом биологического материала на агаровые пластинки среды Хоттингера при 28 С. На вторые сутки инкубации отмечается типичный рост возбудителя чумы,Штамм Ахарактеризуется следующ ми признаками.Культурально-морфологические изнаки: штамм Аимеет типичные возбудителя чумы культурально-морфол ческие и другие свойства, Он растет в й-форме на обычных питательных средах (бульон и агар Хоттингера, среда Мартена, обычный питательный агар, среда Эндо, дрожжевая среда, гидролиэаты каэеина и желатина). к биотехнолоно в медицин- овательской отребности шС на среде следоза 3:,двузамещий 7; однозамещлий 2; цитратнезия 0,1; суль05; фенилаланиин 0,05 (аминоктиллированная Питательные и Штамм растет при 28 го состава, г/л: глюк фосфорнокислый кал фосфорнокислый кв 0,5; сернокислэя маг трия 0,5; цистеин 0 метионин 0,05; треон в 1.- и О-форме), дис амма. ующеенный енный натрия фит нан 0,05; ислоты вода 1 ридля огиГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССРГОСПАТЕНТ СССР)(57) Использование: биотехнология, медицинская микробиология, генетика микроорганизмов, Сущность изобретения: получение нового штамма-чумного микроба УегзЬа резбз, имеющего дополнительную плаэмиду мол. м. 20 мДа. Штамм выделен от блох большой песчанки, отловленной в 120 км северо-восточнее поселка Баканас. Он имеет типичные для возбудителя чумы культурально-морфологические и другие свойства и может быть использован в качестве генетического зонда при идентификации и детекции штэммов возбудителя чумы, выделенных из различных природных очагов,Ф ф Диаметр колоний при изолированном росте на среде Хоттингерв нв 2-3 сутки 2-3 мм, на пятые - 2-8 мм(при 28 С выращивания),Оптимальная температура роста 27- 28 С, минимальная (еле заметный рост нэ 3 сутки) - + 2 С, максимальная - +40 С. На среде Джексона-Берроуза растет в виде популяций, состоящих из пигментироввнных (р 9 а+) колоний. Нв жидких питательных средах характер роста типичен для чумного микроба. В мазках выявляются грамотрицательные биполярные палочки.1825375 40 Формула изобретения Штамм чумного микроба Уегэйа Реэ 1 з КМ, используемый в качестве тест-объекта для определения строения и функции новой дополнительной плазмиды возбудителя чумы. Составитель М. СероваТехред М. Моргентал Корректор Л, Ливринц Редактор Заказ 2232 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва,Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 л (в случае приготовления плотных питательных сред добавляют 30 г агар-агара).Физиолого-биохимические признаки. Ферментирует с образованием кислоты беэ газа глюкозу, мальтозу, маннит, арабинозу, маннозу, ксилозу, глицерин. Не ферметирует лак 1 озу, сахарозу, рамнозу. дульцит, эритрит, мелибйоэу целлобинозу, Дает отрицательные реакции денитрификации и нитрификации, Имеет ф-галактозидазу. Реакция Фогес-Проскауэра положительная. Не имеет фсрмента уреазы, оксидазы, редуктазы тетратионата, амилазы, декарбоксилазы лизина и дегидролазы аргинина. Желатин не разжижает, не расщепляет малоната и тартрата натрия. Кальцийзависимый. На среде Хигучи-Смита мутирует в кальцийнезависимые клетки(Са ) с низкой частотой (2-8 х 10 - 7 - 8 х 10).Отношение к гомо- и гетерологичным штаммам, Высокочувствителен к диагностическим чумному и псевдотуберкулезному фагам и фагу Л"С",Отношение штамма к видовым диагностическим сывороткам, Аглютинируется противочумной сывороткой в титре 1: 1200.Антигенные свойства штамма, Обладает антигенами 1 га, па, Тох.Чувствительность к антибиотикам, Высокочувствителен к стрептомицину, рифампицину, гентамицину, пенициллину, мономицину, тетрациклину, хлорамфериколу, хлортетрациклину,Генетические особенности штамма, Штамм ауксотрофен. Имеет обычные для возбудителя чумы плазмиды рРз 1, рСас (рИг), рЕга Тох и дополнительную плазмиду мол. м. 20 мДа.Вирулентные свойства, Штамм Авысоковирулентен для лабораторных животных - морские свинки погибают от 10, аз белые мыши - от 10 микробных клеток при2подкожном методе заражения.Условия хранения. Штамм хранится в запаянных пробирках на косячках среды Хоттингера в холодильнике (3-10 С),5 10 15 20 25 30 35 Условия выявления продуктов жизнедеятельности штамма. Для выявления токсина и антигенной фракции 1 может быть использована среда Хоттингера (температура инкубации - 37 С), Для выявления пигментсорбции используют среду Джексона-Бзрроуэа в обычной прописи.П р и м е р. Культуру штамма и кишечной палочки выращивали в течение суток на агаре Хоттингера (рН 7,2), затем снимали клетки с площади 1 см и суспендировали в2200 мл буфера, содержащего 50 мМ Триса, 2,5додецилсульфата натрия и чаОН (до рН 12,5). Образцы помещают в водяную баню при 68 С на 30 мин. Добавляют равный объем смеси фенол-хлороформ (1: 1) и тщательно перемешивают. Центрифугируют в течение 5 мин при 15 тыс. об/мин. Водяную фазу смешивают с 1/10 объема буфера и наносят в лунки 0,6 о-ного агарозного геля. Электрофорез проводят в горизонтальных пластинах геля в буфере ТВЕ: 69 мМ триса, 89 мМ НзВОз, 2,5 мМ Иа 2 - ЗДТА. Постоянное напряжение 100 В, продолжительность электрофореза 3,5 ч. В качестве маркеров мол. м, используют плазмиды Е.со: рСВ (7,5 мДа), рВК 290 (13 мДа), рЯа (23 мДа), В 6 К (26 мДа), ВР 4 (37 мДа). В результате эксперимента выявляют наличие дополнительной плазмиды у штамма А. Мол. м, плазмиды составляет 20 мДа,Таким образом, новый штамм возбудителя чумы, содержащий дополнительную плазмиду мол. м, 20 мДа, может быть использован в качестве генетического зонда при идентификации и детекции штаммов возбудителя чумы, выделенных из различных природных очагов.